MRD检测在急性白血病分层治疗中的意义解读.ppt

微量残留病检测在急性白血病分层治疗中的意义,MRD:TheleukemicpopulationundectablebymorpglogicmethodshasbeendefinedasMRD,MinimalResidualDisease(MRD),MRDisatermusedwhenthereisevidence(immunophenotypic,molecular,orcytogenetic)thatleukemiccellsremainintheBMbutthereareinsufficientcellstobedetectedbyroutineexaminationunderthemicroscope.,MRD检测的方法,MRD监测的临床意义,MRD检测在分层治疗中的意义,FCM-MRD检测的结果,MRD检测方法,PCR:基因-定性、定量（RQ-PCR）b.多参数FCM：免疫标志,发病时寻找免疫标志和基因标志进行检测,目的基因：融合基因：BCR/ABL,AML1/ETO,PML/RAR基因重排：IgH，TCR(10-4-10-5)基因突变：FLT3-ITD,NPM1(10-5)基因表达增加：WT1,PRAME(10-3)优点：灵敏度高-10-5-10-6/5copes/10-5特异性强缺点:1.融合基因：应用范围有限：ALL:10-30%，AML:30-50%2.IgH/TCR:90%,操作复杂，费时,需要基因测序，特异引物/探针(每例患者特异）3.容易污染，出现假阳性。,RQ-PCR检测MRD特点,优点：灵敏：ALL-10-4,AML-10-3-10-4（获取细胞相关）定量单位：细胞%快速：检测当天即可知结果操作简便应用范围广：90%缺点：表型的变化:假阴性受前体B细胞(Hematogones)的干扰：形态幼稚，表达CD34,TDT在小儿、化疗后、SCT后比例增加5%需要较高的分析水平和技能应用不够广泛，需要建立标准化操作,FCMMRD检测的特点,定义：正常骨髓/PB中不表达或表达比例较低的免疫表型,白血病相关的免疫表型(LAIP)（LeukemiaAssociatedImmunoPhenotype）,FCM-MRD：白血病细胞的特异抗原：NG2(7.1),IM/MRD检测的抗原CD34,CD33-：正常分化抗原：表达于正常细胞的不同系列、分化阶段（非白血病细胞所特异）,交叉系列抗原:B、T、髓、NK细胞抗原非同期抗原共表达:CD15/CD117CD34/CD64抗原表达量异常：表达强度过高、过低或不表达异常的光散射信号：FSC和SSC,LAIP的分类,基础：熟悉正常细胞不同分化阶段抗原出现的顺序和表达量的规律,Cytometry(communicationsinClinicalcytometry)38:139-152(1999),诱导缓解后MRD水平与累计复发率,Coustan-SmithE.BLOOD,2000;96:2691,JohnsHopkins,MostinformationdisplaysNo.ofcases(%)ACD19/CD45/CD20/CD10(N=82)CD45vsCD1048(59)FSCvsCD1013(16)FSCvsCD2011(13)CD10vsCD204(5)76(93)BCD19/CD45/CD9/CD34(N=77)CD45vsCD3427(35)FSCvsCD3417(22)CD34vsCD916(21)72(94)A+B81(99),Leukemia(1999)13,558-567,AChildrensOncologyGroupStudy（FCM-MRD),Blood.2008;111:5477,诱导缓解后MRD检测的意义（D29）,N=2134,诱导后MRD水平对早期和晚期复发的影响,Relapse-freesurvival,Years,NCISR伴好遗传学特性患者MRD与EFS关系,Years,Years,4,10,8天PBMRD的意义,多变量分析,鉴别预后非常好的一组患者,NCI-SR+DTTEL-AML1+MRD-D8andD29,12%,成人-ALL-FCM,Blood.2003;10:4695,CD7/CD5/CD3CD4/CD8/CD3CD7/CD2/CD3CD7/CD34/CD38,Spain,MRD水平与RFS,11.76%(n=12/102),Day14MRD-/0.03%,RFSOF90%at5years,对RFS的多变量分析,Statusofminimalresidualdiseaseafterinductionpredictsoutcomeinbothstandardandhigh-riskPh-negativeadultacutelymphoblasticleukaemia.ThePolishAdultLeukemiaGroupALL4-2002MRDStudyN=116,BritishJournalofHaematology,2008:142,227,CD7/CD2/CD3CD7/CD5/CD3CD7/CD38/CD34CD7/CD4/CD8TDT/CD7/Ccd3CD7/CD1a/CD3cCD3/CD7/CD3,CD10/CD20/CD19CD34/CD22/CD19CD34/CD38/CD19CD45/CD34/CD19TDT/CD10/CD19CD58/CD52/CD19CD33/CD13/CD19CD15/CD117/CD19CD65/CD56/CD19CD7/CD2/CD10,B-ALL,T-ALL,诱导缓解后MRD与复发关系,诱导后MRD状态与治疗的关系,对复发率和leukaemiafree-survival的多变量分析,Riskandresponse-basedclassificationofchildhoodB-ALL,ChildrensOncologyGroup(COG),Blood:2007;109:926935.,Retrospective,CCG:1988-1995,POG:1986-1999,N=6238,Age:1-22y,COGriskclassificationscheme,Riskfactors:Age:10yWBC:50000/LCytogenetics:TEL/AML1,Trisomies(4,10.17),BCR/ABL,MLL,Day-14marrowresponse:M125%blastDay-29MRD-FCMCNS/TD,ChildhoodB-Precursor-ALL,Age:10,WBC:50000/L,:HighRisk,:StandardRisk,TEL/Tris,D8/15,29BM,D29MRD,CNSorTD/MLL,+,M1,M11.0%,VHR,Riskandresponse-basedclassificationofchildhoodB-ALL,Blood:2007;109:926935.,PediatricOncologyGroup(POG),ChildrensCancerGroup(CCG),Riskandresponse-basedclassificationofchildhoodB-ALL,IgHTCR基因的阳性率和敏感性,TFlohr，Leukemia(2008)22,771782,AIEOP-BFMALL2000,PCRMRD指导的危险度分层,AIEOP-BFMALL2000化疗流程,MRD指导的分层标准,HR:PPR;NR,BCR/ABL,MLL/AF4,QR-PCR检测MRD流程,Event-freesurvival,cumulativeincidenceofrelapse,Blood.2010;115:3206,MolecularresponsetotreatmentredefinesallprognosticfactorsinchildrenandadolescentswithB-cellprecursoracuteLymphoblasticleukemia:resultsin3184patientsoftheAIEOP-BFMALL2000study,TEL/AML1+,favorableDNAindex(1.16and1.6),PCR-MRD对预后好患者的影响,PCR-MRD对Ph+患者的影响,SR,IR,HR,PCR-MRD对Ph-患者的影响,多变量分析,CML欧洲白血病网(ELN)最新推荐,伊马替尼400mg/d初始治疗失败的定义:3个月未达到CHR,6个月未达到任何CyR,12个月未达到PCyR,18个月未达到CCyR,任何时间,丢失之前达到的CCyR或CHR疾病进展或出现耐药的Abl激酶突变推荐采用第二代TKI尼洛替尼治疗,慢性期,加速/急变期,NCCN最新版治疗指南推荐,对于伊马替尼400mg/d初始治疗患者，出现以下事件推荐患者接受尼洛替尼治疗:3个月未达到血液学反应或者血液学复发,6个月未达到任何CyR,12个月未达到PCyR或者细胞遗传学复发,18个月未达到CCyR或者细胞遗传学复发,CML患者CCR后BCR-ABLmRNA动态变化与imatinib应用,QinYZ,LiuYR,ZhuHH,etal.IntJLabHematol2008;30:317,“”：CCR“”：Ph+,其中1例患者由CCR进展至急变期，BCR-ABL升高2.5log,但未检测出Ph染色体,QinYZ,LiuYR.ZhuHH.etal.IntJLabHematol2008;30:317,CML患者CCR后的BCR-ABLmRNA水平提示复发,空心：CCR，实心：Ph+,正常B细胞的分化规律,北京大学人民医院血液病研究所,CD10CD34CD19与CD45关系,CD22CD20CD19与CD45关系,CD38CD58CD19与CD45关系,I:CD34+CD10+cIg-sIg-(Com-B-ALL)II:CD34-CD10+cIg+sIg-(pre-B-ALL)III:CD34-CD10-cIg+sIg+(matureB-ALL),Note:noCD19+CD10-CD34+(Pro-B-ALL),成人与儿童B-ALL各亚型中LAIP发生率,363/403(90.1),236/262(90.1),127/141(90.1),总,8/15(53.3)e,8/12(69.2)c,0/3(0)a,成熟-/-,59/75(78.7)d,35/46(76.1)b,24/29(82.8),Pre-/+,238/255(93.3),148/159(93.1),90/96(93.8),Com+/+,58/58(100),45/45(100),13/13(100),Pro+/-,总,成人,儿童,CD34/CD10,B-ALL,亚型,中国实验血液学杂志2006；14：853,Campana.Cytometry38:139-152(1999),MRD+0.1%,CD45-CD10st+CD34s+,分析全部CD19+的细胞，以Hematogones作为内对照观察每个双参数的图形，无僵硬设门优点：避免表型改变所致假阴性不依赖于发病时的IM缺点：不易掌握,4色FCM检测B-ALLMRD的临床意义,98例：儿童78，成人20，671份标本，6.8次/人，10.8月/人，3.1月/次,中国血液学杂志2006；27：302,两组四色抗体：通用：CD34/CD10/CD45/CD19个体化：CD38,CD123,CD13,CD33,CD5