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文档简介

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证,课程要求,掌握：乙肝表面抗原的ELISA法定量检测方法；ELISA法方法学评价的方法。熟悉：定量检测的酶标仪操作要领；各种缓冲液的配制。了解：ELISA检测中的影响因素和注意事项。,试验目的,进行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法学验证。,试验材料,1试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。2仪器及酶标板酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：MilliporeElix；电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。,3溶液配制0.01MpH7.4的PBS缓冲液：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。质控品：用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。,试验方法,1标准曲线各浓度的配制用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。,2测定方法设计标准品、质控品及空白分配方案；取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按需要重新配制；在相应孔中加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul；37温育30min，洗板4次；加入酶标抗体，生物素二抗，50ul/孔；37温育30min，洗板4次；加入A、B液,50ul/孔，37温育15分钟。加入终止液，50ul/孔。,3标准曲线制作及结果计算酶标板放入酶标仪，盖上盖子；在电脑上打开MicroplateManager5.2软件选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值；输入标准品各浓度值，以双对数法制备标准曲线，获取各孔的浓度值，打印标准曲线图和计算结果。,ELISA法标准曲线示意图,4准确度（回收率）计算按示例表1样式列表并计算回收率。,5按示例表列表并计算精密度。,板内精密度,板间精密度,6检测限（LOD）计算：取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。,注意事项,标准品和质控品配制要准确。实验各个环节都很重要，每步操作都要认真。,讨论,1.实验背景介绍（目的、采用的方法、检测原理、方法学验证的基本知识介绍）2.本实验的设计及实施特点3.实验结果分析4.临床应
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