实验四 细菌的简单染色和革兰氏染色_第1页
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文档简介

一、目的与要求1、掌握细菌涂片标本的制备2、掌握革兰氏染色法的步骤和关键点3、识别细菌革兰氏染色结果,实验四细菌的简单染色和革兰氏染色,二、实验原理：细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。为什么要对细菌染色？细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。,简单染色法可用以观察微生物的形状、大小及细胞排列状态，是微生物技术中应用广泛，操作简便的染色法。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色，而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。,三、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28培养24h的大肠杆菌(Escherichiacoli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28培养16h的枯草杆菌(Bacillussubtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；,细菌的简单染色步骤：,细菌的革兰氏染色步骤：,涂片,干燥,固定,结晶紫染色,水洗,干燥,镜检,碘液媒染,水洗,乙醇脱色,番红复染,水洗,水洗,五、实验关键步骤和注意点：1、玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。2、挑菌量宜少，涂片宜薄，过厚则不易观察。涂片厚度适当。3、固定温度适当。4、革兰氏染色成败的关键是脱色时间，脱色程度适当。5、染色过程中勿使染色液干涸。,六、实验报告,1.画出你所观察到的形态并标出革兰氏染色结果。2.思考题(p241,4)：（1）涂片后为什么要进行固定？固定时应注意什么？（2
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