HE染色程序及相关溶液配制

HE染色程序1取材与固定：一般取0.5立方米，基本不用再次修形。置于4%甲醛溶液中，至少固定24小时。室温保存即可。2水洗：视组织块大小而定。一般与固定时间相等或至少水洗24小时。3脱水：70酒精（过夜或2h）80酒精（过夜或1h）90酒精（1h）95酒精（1h）95酒精（1h）100酒精(1h)100酒精(1h)，梯度酒精脱水注：当酒精浓度逐渐升高时，特别是100%的酒精，注意观察组织块情况，不能脱水脱过了，如果拖过了，切片时，组织易碎。如果水脱的不彻底，则浸蜡时，蜡不能完全浸入，也会影响后期切片。4、透明：二甲苯（10min）二甲苯(10min) 。5、浸蜡：58 1.5-2h （一般用新蜡）6、包埋：叠好的蜡槽，一般深1cm，宽1cm，长7cm，放4个组织块为宜。注：包埋一般采用旧蜡，避免产生气泡。包埋时用来夹取组织块的镊子，要同时放在蜡箱里预热。先向蜡槽内倒蜡，然后用预热的镊子夹取浸蜡缸中的组织，放到蜡槽底部，尽量避免漂浮。包埋后，就不要挪动蜡槽了，否则组织漂浮在蜡槽的表面。7、常规切片，一般组织3-5微米，神经组织切7微米。展片温度为52摄氏度。捞片时刻直接从95%的酒精中取载玻片直接捞片，不必擦干载玻片上的酒精。捞好片后，置于37度温箱恒温干燥过夜。8、 切片脱蜡：二甲苯（5min）二甲苯(8min)，9、 水化：100酒精（1min）90酒精(1min)80酒精(1min)70酒精(1min)10、 水洗2-5min11、 苏木素染色 15-20min12、 水洗至灰黄色13、 分化：1%盐酸酒精分化30s至桃粉色，14、 水洗返蓝：2-3h15、伊红染色：15min16、脱水：70酒精（10s）80酒精（20s）90酒精（30s）95酒精（1min）100酒精(2min)100酒精(2min)17、二甲苯透明：二甲苯（5min）二甲苯(5min)18、中型树胶封片，镜检。相关液体的配制：1、4%甲醛固定液：40%的甲醛溶液10ml + 90ml蒸馏水，摇匀即可。2、处理载玻片用的盐酸酒精：95%酒精100ml + 36-38%盐酸 1 ml 摇匀即可。3、分化用1%盐酸酒精：注：1%盐酸酒精配制：75%酒精99ml+36-38%HCL 1ml 即可。4、二甲苯：无需配制，用商品化得即可。5、各个浓度的酒精，均用100%的酒精或95%酒精按比例稀释配制即可。6、苏木素的配制： A液：铵明矾（硫酸铝按） 55克加蒸馏水至600ml B 液：苏木素 6克加100%酒精50ml混匀 C液：甘油 150ml加甲醇150ml分别配制A、B、C液，将A与B混合过夜，用滤纸过滤后，加入C液，在温暖有阳光处照射1-2个月，使染料成熟，方可使用。7、1%伊红的配制（水溶性的）：1克伊红（曙红B）加100ml蒸馏水即可，需放置于阳光下成熟一段时间。一般500ml染液中加入5-6滴醋酸，可以增强其着色力。HE染色原理;苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。 所有化学试剂买“分析纯”级别的。甲醛：买回来的都是40%浓度的，回来自己配成4%的。二甲苯：买回来的直接用就行，无需配制。无水乙醇：95%乙醇： 此两种浓度的酒精，用来配制90%，80%，70%浓度的酒精。苏木素：还有叫苏木精的。如果买粉末的话，就按上边给的配方配制，这样就需要铵明矾（硫酸铝按）常规药品，都好买。也有商品化的，买现成的染液，直接就是液体的。伊红，又有叫曙红B，（千万别买错了，还有叫曙红Y的，这个不能用于HE染色）。粉末状的，按上面的配方自己配。也有现成的商品化的染液，就是价格略贵一些。蜡：有国产的，国产的比较便宜。有进口的。进口的比