ODS-反相柱层析

ODS 反相柱层析（开放柱）2011-05-31 23:55:10|分类：专业知识笔记|字号订阅 ODS（octadecyl silane）即十八烷基硅烷，是以硅胶为基质键合的C18填料，属于反相色谱。ODS柱色谱，简单地说，就是指用ODS装成的色谱柱。 开放”是指未对色谱柱施加任何压力，让其在重力作用下洗脱；相对于开放ODS柱色谱，有中低压柱色谱，高低柱色谱等等。平时所说的反相HPLC，一定程度上来也可以说是ODS柱色谱，它的分离效果更好，同时连接了UV、DAD、ELSD等检测手段，其实质还是属于反相柱色谱。适用范围： 对于极性，ODS适合用于分离极性中等偏大的化合物。对于极性较小的化合物，应该考虑用硅胶、凝胶等手段进行分离纯化，绝对不要尝试ODS，唯一的后果只能是：样品全部死吸附，根本不可能洗脱！（*不确定 r）对于化合物类型，ODS对黄酮苷类、环烯醚萜苷类、糖苷类等成分都能有一定的分离效果，也有很多成功的分离纯化实例。但是，对于苷元类化合物，则需要慎重考虑，其实还是极性大小的问题：苷元类化合物，一般极性较小。装柱、上样、洗脱 装柱：新买来的ODS，用甲醇浸泡过夜后即可装柱。具体的装柱方法，跟硅胶的装柱子法是一样的，记得用甲醇装柱就行。装完以后，置换成起始流动相系统，即可投入使用了。 上样：分为两种，一种是湿法上样，另一种是拌样。湿法上样，不必多说，就是将样品溶解至一定体积（强烈建议用起始流动相溶解，但体积不可过大，太大相当于原点变大，分离度变差），然后上样；至于拌样，很多的观点表示ODS不应该拌样，我在这里指出，依我个人经验来看，拌样是可以的，尤其对于一些溶解性较差的样品，拌样后分离的效果，比湿法上样好很多，大家可以尝试。（所谓拌样，就是指将你的样品溶解，然后从柱子里面掏出小部分ODS，然后进行拌匀，注意不要过载） （* 待尝试 r） 洗脱过程：如果你有ODS薄层板，你可以先点板看看样品大概的极性大小。如果你没有ODS板，你拿到的是“盲样”，一般可以采取常规的梯度洗脱，如水30%甲醇/水50%甲醇/水70%甲醇/水100%甲醇，然后依据各流分样品量的大小进一步进行细分；经过常规的梯度洗脱以后，假设，你的样品集中在50%的甲醇/水部分，进行细分的时候，你就可以选择40%甲醇/水45%甲醇/水50%甲醇/水100%甲醇这样的梯度。 流动相的选择：其实就是反相流动相，无非就是甲醇/水，乙腈/水，流动相中也可以加入一些其他物质。我曾经很多次加入乙酸，用来改善拖尾的现象（点ODS薄层板分析过）。至于缓冲盐，我没有试过，具体情况不太了解。洗脱样品的如何处理？ 洗脱下来的样品，可用硅胶薄层板进行点板分析，然后将相同流分进行合并，也可以采用HPLC检测合并。 我认为，对于一些量小的流分，相差不是很大的，尽量合并，避免样品的分散； 对于一些量大的流分，可合可不合，反正量大，合与不合的效果是一样的（无非就是多占点空间）； 从ODS上洗脱的流分，很可能是纯品；易结晶的样品，会在溶剂挥发的过程中结晶析出来，要注意观察；柱子被污染如何处理？ 污染是正常的，见过那么多，也用过那么多ODS柱子，没有哪一根能在使用一段时间后保持“洁白无瑕”的。 被污染，一般情况下就是用甲醇冲洗，一直到冲洗液蒸干没有杂质为止，就可以进行下一批样品的分离了。 也许有人问：你这么处理彻底吗？回答是否定的，但是，对于ODS柱色谱，这样的处理已经足够了。 道理很简单，用ODS进行分离的样品，一般极性不会很小，70%甲醇/水基本能全部冲洗下来。现在已经用甲醇冲洗得差不多，在你对下一批样品