3-HPLC 色谱柱介绍演示幻灯片

WatersHPLC色谱柱,Waters色谱柱发展历史,Styragel,Bondapak,DeltaPak,1964,1979,1973,1992,Symmetry,Spherisorb,Atlantis,Symmetry300,XTerra,XTerraPrep,1998,Nova-PakProteinPakTMPico-TagTM,SymmetryShield,1984,1986,2002,1999,1994,2003,AtlantisHILICSilicaPrepOBDIntelligentSpeedTMBioSuiteNanoEase,2004,ACQUITYUPLCBEHSunFireColumns,PrepPak,1976,1958,AtlantisT3ACQUITYUPLCHSST3AccQTagTMUltra,2006,2005,XBridge,2007,ACQUITYUPLCHSSC18andHSSC18SB,2008,XBridgeHILIC,2009,ACQUITYUPLCBEHAmideACQUITYUPLCBEHGlycanXBridgeAmideXSelectHSSHPLCColumns,2010,ACQUITYUPLCBEH200SECXSelectCSHHPLCcolumnsACQUITYCSHColumnsViridisSFCColumnsProteinPakHighRsIEX,AccQTagTM,2011,ACQUITYUPLCHSSCyanoP/N:1860023502010药典人参含量测定，通过将HPLC方法转换成UPLC方法，分析时间由120min缩短到10min,2010药典人参含量测定,键合相提供不同选择性,方法开发中全能型色谱柱!,特殊键合相满足特定需求ShieldRP18：内嵌极性基团C18,通过极性嵌入基团保留水可完全兼容100%水相屏蔽硅醇基，对碱性化合物峰形更佳提供与C18不同的选择性,ShieldRP技术改善碱性峰形实例（XBridgeRP18有更宽pH范围，pH2-11！）,pH7.0,注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，可能不能代表所有应用情况（法律申明）,阿奇霉素各国药典方法,XBridgeShieldRP18最适于阿奇霉素分析,国家食品药品监督管理局关于修订阿奇霉素氯化钠注射液和阿奇霉素葡萄糖注射液药品标准有关事宜的公告,照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录VD）测定，采用硅胶表面经杂化处理的十八烷基键合硅胶色谱柱如XBridgeTMShieldRP18（规格：2504.6mm，5um）或与之相当的色谱柱，柱温30；以乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%磷酸调节pH值至8.2）（58：42）为流动相；流速为每分钟1.0ml；检测波长为210nm。,Hilic模式色谱柱:XBridgeAmideT3对dC18色谱柱的稳定性进行了更好的提升,切实增强对极性化合物的保留,1.Thiourea2.5-Fluorocytosine(B)3.Adenine(B)4.Guanosine-5-monophosphate5.Thymine,注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，并不代表所有应用情况（法律申明）,HSST3分析OTC感冒药活性成分,2010药典复方丹参滴丸,应对高容量和峰形柱效的需求,色谱工作者的需求和问题：柱效？！柱容量？！载样量高？！中-低pH条件下碱性化合物拖尾严重？！样品杂质或相关物质分析及分离？！,4,8,12,对碱性化合物峰形更佳的更优质硅胶色谱柱,5,1,Vo,2,3,4,SymmetryC185mUSPTf=1.69N=6961,以Amitriptyline（峰5）计算拖尾因子USPTfpH7条件下,SunFireC185mUSPTf=1.26N=8203,CSH表面带电杂化颗粒技术的键合相产品,CSHC18三点键合C18广泛的pH使用范围pH1-11卓越的峰形与柱效，无论是典型缓冲盐流动相体系还是低离子强度流动相体系130ACSHC18多肽和小分子蛋白，0.1%FA具有卓越的上样量CSHPhenyl-Hexyl（苯己基，USPL11)三点键合C6-Phenyl广泛的pH使用范围pH1-11对于芳香性分析物提供互补的选择性CSHFluoro-Phenyl（氟苯基，USPL43）三点键合的、未经封端的、五氟苯基pH18与烷基柱相比具有独特的选择性稳定的、重现的生产控制,对碱性分析物有卓越的峰形与载量尤其适合LCMS流动相条件,丙咪嗪浓度保持恒定为0.5mg/mL;使用利于LCMS分析的0.1%甲酸流动相条件,2.0%,1.0%,0.5%,0.1%,丙咪嗪,2.0%,1.0%,0.5%,0.1%,Amitriptyline,ACQUITYCSHC181.7m0.1%formicacid,SuperficiallyPorousC181.7m0.1%formicacid,观察CSH技术对碱性物质有卓越的峰形，特别是使用兼容LCMS检测的流动相条件时。特别有利于对低含量物质的检测，有好的峰形、分离度与灵敏度。,丙咪嗪,阿米替林,阿米替林,覆盖全部现代反相色谱柱的选择性范围BEH+CSH+HSS:,ACQUITYBEHPhenylXBridgePhenyl,ACQUITYBEHC18XBridgeC18,ACQUITYBEHShieldRP18XBridgeShieldRP18,ACQUITYBEHC8XBridgeC8,ACQUITYHSSC18SBXSelectHSSC18SB,ACQUITYHSSC18XSelectHSSC18,ACQUITYHSST3XSelectHSST3,ACQUITYCSHC18XSelectCSHC18,ACQUITYCSHPhenyl-HexylXSelectCSHPhenyl-Hexyl,ACQUITYCSHFluoro-PhenylXselectCSHFluoro-Phenyl,ACQUITYHSSCNXSelectHSSCN,ACQUITYHSSPFPXSelectHSSPFP,内容,色谱柱应用基础HPLC色谱柱介绍色谱柱使用保养知识,色谱柱的连接,各种锥箍和管路接头长度示意图:,色谱柱的连接,Stop_depth长度不合适造成柱前死体积柱外扩散,造成色谱峰展宽,死体积,正常,峰扩散,色谱柱的连接,锥箍锥度不合适造成渗漏,测柱效-良好的色谱实验习惯,拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录色谱测试条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽,测柱效的方法,色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同Waters的色谱柱均附有UseandCare说明书,可按说明书所述方法测定如若柱盒中无纸质说明书，请到以下网址获取,计算色谱柱的柱效N,理论塔板数计算公式：Ws方法Wtan16切线法Wh5.54半峰高W3s93sW4s164sW5s255s,Inject,Inject,用“切线”法计算柱效,不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来,好柱,坏柱,好柱,Inject,Inject,用“5”法计算柱效,坏柱,测量色谱系统的谱带展宽,卸下色谱柱，用UNION(两通)代替之按测柱效方法，以1/10的样品浓度进样，大约25微升用5sigma方法测4.4%峰高处的峰宽：W仪器参数流速1.0ml/min检测器时间常数小于0.2谱带展宽（ml）=1000W（min）,色谱柱的正确使用及操作,流动相的转换特别是GPC柱流速(压力)的变化幅度温度的变化幅度专用色谱柱样品及溶剂的要求,正确使用色谱柱(一),样品方面除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度如溶样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否有相互作用,正确使用色谱柱（二）,流动相方面除去微粒纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液（盐）的浓度有机溶剂：色谱纯,杂质含量尽量低,并与填料相匹配流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的比例,色谱柱的在线保护装置,给色谱柱提供物理的保护除去样品及流动相中的颗粒给色谱柱提供化学的保护防止分析柱被化学污染装置在线过滤器SentryGuard保护柱,在线过滤器,In-LineFilter，部件号WAT084560防止颗粒在色谱柱头累积优点：基本不影响柱效在需要高柱效的分析时常用(如：氨基酸分析)可更换的消耗品更换滤芯，部件号WAT088084(1/pkg)更换滤芯，部件号WAT005139(5/pkg),保护柱,可避免化学污染多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效，特别是在用微柱时选保护柱的原则与所用色谱柱品牌、内径一致SentryGuard保护柱通用保护柱卡套部件号:WAT046910(适用于3.0,3.9,4.620mm保护柱)186000262(适用于2.120mm保护柱)WAT097958(适用于2.110mm保护柱),色谱