环介导等温扩增技术_第1页
环介导等温扩增技术_第2页
环介导等温扩增技术_第3页
环介导等温扩增技术_第4页
环介导等温扩增技术_第5页
免费预览已结束，剩余13页可下载查看

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

环介导等温扩增技术,胡星星201505112015.10.20,主要内容,定义原理操作步骤优缺点及,定义,环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）是指在等温（60-65）条件下，利用链置换DNA聚合酶短时间（通常1h）内进行核酸扩增，是一种“简便、快速、精确、低价”的基因扩增方法。其检测结果可直接肉眼观察白色沉淀或者绿色荧光，是一种适合现场、基层快速检测的方法。,原理,扩增启动阶段,FIPF3,（5）:有1个环状构造（Fc1末端5端游离）的单链,BIPB3,（8）:有2个环状构造（F1末端即3端游离和Bc1末端即5端游离）的单链,循环扩增阶段,FIPF1末端延伸至形成一个环状构造（B1末端即3端游离）；FIP退火到茎环结构（8）上，引导链置换DNA合成反应，产生结构（9）的产物；随后产物（9）的B1末端即3端自动引导链置换DNA的合成，生成产物(10）和茎环结构（8）（与开始的产物（8）序列互补的）；BIPB1末端延伸至形成一个环状构造（F1末端即3端游离）；BIP退火到茎环结构（8）上，引导链置换DNA合成反应，产生结构（9）的产物；随后产物（9）的F1末端即3端自动引导链置换DNA的合成，生成产物(10）和茎环结构（8），产物（8）开始新一轮的循环扩增。,延伸循环步骤,产物(10)和(10)进入延伸循环步骤，分别形成(11)和(11)；内部引物又可以(11)和(11)作为模板，引导链置换DNA的合成，使产物的序列不断延伸、环化、再延伸，最终的产物是一些具有不同茎长度茎环结构的DNA和带有许多环的折叠结构的DNA的混合物。,LAMP法实验室常规操作步骤,优缺点,优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高25个数量级）；反应时间短（3060分钟就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浊度仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于反应管中，置于水浴锅或恒温箱中63左右保温3060分钟，肉眼观察结果）。缺点：灵敏度高，一旦开盖容易形成气溶胶污染，故在进行试剂盒的研发过程中可采用实时浊度仪，不要把反应后的反应管打开；引物设计要求比较高，有些疾病的基因可能不适合使用环介导等温扩增方法。,应用,LAMP技术因其快速、高效、特异、灵敏和经济等优点，已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 项目管理

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论