《烟用添加剂中一氯乙酸的测定-离子色谱法》

烟用添加剂中一氯乙酸的测定 离子色谱法标准项目实验报告烟用添加剂中一氯乙酸的测定 离子色谱法标准项目组2011-4-1824目 录一 前言31.1 概述31.2 一氯乙酸的分析方法介绍41.2.1 化学分析法41.2.2 气相色谱法41.2.3 液相色谱法51.2.4 离子色谱法51.3 总结6二 标准适用范围6三 原理6四、试验方法64.1 仪器、试剂和材料64.1.1 仪器设备和材料64.1.2 试剂74.2 样品前处理74.3 色谱条件74.4. 标准溶液的配制和标准曲线绘制84.4.1 标准溶液配制84.4.2 标准工作曲线的绘制8五 结果与讨论95.1 前处理优化95.1.1 萃取溶剂的选择95.1.2 称样量的选择115.1.3 萃取液体积的选择125.1.4 萃取时间的优化135.1.5 小结135.2 仪器条件的优化135.2.1 淋洗液的选择135.2.2 淋洗液浓度梯度的优化145.2.3 色谱柱的优化175.2.4 其他色谱条件的优化19六 分析参数196.1 样品测定结果206.2 检出限和定量限206.3 方法的重复性试验216.4 样品回收率216.5 再现性实验22参考文献23一 前言1.1 概述食品工业是国民经济中重要的支持性产业之一，近年来我国食品工业发展很快。食品添加剂是指为改善食品品质和色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化学合成或天然物质。在食品加工制造过程中合理使用食品添加剂，既可以使得加工食品色、香、味、形及组织结构俱佳，还能保持和增加食品营养成分，防止食品腐败变质，延长食品保存期，便于食品加工和改进食品加工工艺，提高食品生产效率。随着我国综合国力的迅速提高和科学技术的不断进步，我国的食品工业快速发展，加工食品的比重成倍增加，食品的种类花色日益繁多，我们生活中接触到的食品添加剂也随之变得越来越多，人们对食品添加剂给食品安全带来的问题也越来越关注。当今食品安全问题日益受到社会关注，烟草虽然不被直接食用，但很多国家依然把烟草划为食品类或准食品类，作为特殊食品其安全性越来越受关注。烟用香精香料是卷烟产品的重要组成，它的添加可增强或改善烟草产品的香味或口味，以满足消费者的需求。然而也有专家预言，它的使用可能改变卷烟的毒性，或者裂解后产生有毒物质，也可能影响卷烟的燃烧产物，产生高含量的毒素，一些专家将与吸烟相关疾病的烟气成分称为霍夫曼分析物，以下简称霍夫曼分析物，国内外对此已经有许多的研究。同时，FDA及欧盟等对烟用添加剂的种类及在卷烟中最高用量已做了相应规定，因此对烟用添加剂进行安全评价很有意义。为了加强产品质量安全监控体系建设，2008年国家烟草专卖局下发国家烟草专卖局关于开展卷烟产品质量安全检查的通知文件，文件将一氯乙酸列为卷烟产品添加剂中禁用的16种成分之一。一氯乙酸，也称氯乙酸、氯代乙酸，是一个有机羧酸，化学式为ClCH2CO2H。结构式如下：一氯乙酸为无色或淡黄色结晶，有刺激性气味，易潮解，能溶于水和乙醇、乙醚等大多数有机溶剂，其钠盐20在水中的溶解度为85g/100ml。有四种结晶体（,和型）。沸点187.85，粘度1.29，相对密度1.4043（40/4）。酸性比醋酸强。一氯乙酸是一种重要的有机精细化工原料。主要用于染料、医药、农药、树脂及其它有机合成的中间体，染料工业用于生产靛蓝染料。它也是有机合成中的重要试剂，为有潜在危险的烷基化试剂。医药工业用于合成咖啡因、巴比妥、肾上腺素、维生素B6、氨基乙酸。农药工业用于制造乐果、除草剂2，4-D，2，4，5-T、硫氯醋酸、萘乙酸，还用作羧甲基纤维素，有色金属浮选剂Z-200#的原料和色层分析试剂等。氯乙酸具有很强的腐蚀性，能腐蚀皮肤，破坏所有非贵重金属、橡胶和木材等。大鼠急性经口LD50(钠盐)650mg/kg，粉尘对皮肤和眼睛有刺激性。国内外研究已表明卤代酸具有致癌性，其毒性不断的被得到毒理学和生理学的证实。日本饮用水中一氯乙酸限量20ppb，美国环保局规定饮用水中5种卤代酸浓度总和的最大限值为60ppb。1.2 一氯乙酸的分析方法介绍关于一氯乙酸的检测，较早的方法为化学分析法，主要利用显色反应；随着色谱技术不断发展，气相色谱方法由于其具有一定的优势逐渐被广泛用来定性定量一氯乙酸，其方法检测灵敏度高，但其前处理需衍生和耗时的萃取浓缩过程，操作重复性差，且需要用到毒性较强的试剂；近期，也有高效液相色谱方法不断涌现；离子色谱法仪器和方法的不断开发，给阴阳离子的分析带来最有效的技术。 1.2.1 化学分析法早期检测一氯乙酸主要用化学分析法，其中显色反应较为多：第一种，与硫氰酸铵反应，生成的绕丹酸可以与1,2-萘醌-4-磺酸及碱形成有色缩合产物，根据颜色的深浅来判断含量。第二种，一氯乙酸与含有过量氧化钙的碱金属亚硝酸盐作用，产生硝基甲烷，可与1,2-萘醌-4-磺酸形成有色缩合产物，从而检测。这两种显色反应都需假设没有其他胺类及活性的亚甲基基团化合物存在。第三种，与浓硫酸和铬变酸反应生成红-紫色醌型化合物，利用这个特性反应就可鉴定出一氯乙酸，但需要说明的是，一氯乙酸在低于150170时不发生显色反应，可在火焰上加热，或置于已预热至170的甘油浴内加热即可1。1.2.2 气相色谱法一氯乙酸是高沸点物质，不能直接进行气相色谱分析，在分析前一般都需要进行衍生处理。衍生反应出了缩合反应，可以说基本上是衍生试剂于成分中活泼氢的反应，主要有三大类：酯化、酰基化、硅烷化。美国环保署（Environmental Protection Agency，EPA）推荐了三种方法检测环境水中的氯乙酸类物质：EPA Method 552.12、 EPA Method 552.23和Standard Method 62514。这三种方法都是首先用甲基叔丁基醚或者阴离子交换树脂将水样品中的氯乙酸萃取出来，再利用重氮甲烷将其甲酯化，最后用气相色谱电子捕获检测器（GC/ECD）来定性定量分析。M.J. Cardador等人5利用同时液液微萃取的方法萃取了水中的氯乙酸类物质，并甲酯化处理，采用气相质谱法检测（GC/MS），这种方法相对GC/ECD法灵敏度更高，氯乙酸类检测下限可达到0.020.4g/L。1.2.3 液相色谱法由于氯乙酸具有较强的极性，所以也可用高效液相色谱法或毛细管电泳法检测6。采用高效液相色谱方法可配备不同检测器：紫外检测器7、电化学检测器8等。Alireza Ghassempour等人9采用高效液相色谱二极管阵列法（HPLC/PDA）检测了甜菜碱中的一氯乙酸和二氯乙酸，甜菜碱样品先由1-萘胺衍生后进样，色谱柱采用苯基柱，检测波长为222nm，本方法中一氯乙酸的检测下限为0.1g/mL，回收率为98%。1.2.4 离子色谱法氯乙酸类是一种极性亲水性的中等强度酸，水中（pH6）可完全离解，呈离子状态。离子色谱法检测原理是：样品中待测的离子经过离子交换柱时，流动相淋洗液将样品中的离子从分离柱中洗脱下来，样品中各种离子的脱顺序和保留时间取决于离子对树脂的亲和力、淋洗液、柱长和流速，由于电导率与样品中被测离子的浓度成正比，所以通过电导检测器测量电导，可以确定样品中待测离子浓度。离子色谱法具有简单快速，绿色环保，可直接进样且重现性好等优点，同时灵敏度也可完全满足检测要求。因此，近年来出现了不同的用离子色谱（IC）测定氯乙酸类的方法10-17，其中有采用电导检测，也有紫外检测器16,17。桂建业等人18采用离子色谱法测定了饮用水中的五种卤代乙酸，方法采用的是IonPac AS19阴离子交换柱，对水中卤代酸的保留行为进行了研究，一氯乙酸的检测下限为1.15g/L。1.3 总结综上，对于我国烟草行业，建立准确可靠的烟用添加剂中一氯乙酸的定量检测方法是非常有必要的。根据目前烟草行业现状及仪器条件，在文献及资料的基础上，通过长期的调研和探索，又因离子色谱法由于具有如下的优势：一是样品可直接进样，或直接采用加水稀释或萃取后进样，前处理无需其他有机溶剂，快速环保；二是准确度和重现性好，灵敏度高；三是前处理和分析时间短，适合大批量样品处理等。因此，项目组选用离子色谱法用来测定烟用添加剂中的一氯乙酸。并通过系列方法优化、实验比对及共同实验来验证了该标准方法。二 标准适用范围 本标准规定了烟用添加剂中一氯乙酸的测定方法离子色谱检测法。本标准适用于烟用添加剂中一氯乙酸的测定。三 原理烟用添加剂试样经氢氧化钠水溶液提取后，采用梯度淋洗，电导检测离子色谱法对一氯乙酸进行检测，保留时间定性，外标法定量。四 试验方法4.1 仪器、试剂和材料4.1.1 仪器设备和材料4.1.1.1 分析天平，精确至0.1mg4.1.1.2 离子色谱仪，配备含阴离子抑制器的电导检测器和色谱工作站。 推荐色谱柱：Ionpac AS11-HC型分离柱(250mm4mm)和Ionpac AG11-HC型保护柱(50mm4mm) 4.1.1.3 pH计（精度不小于0.2级）。4.1.1.4 振荡器。4.1.1.5 锥形瓶，具磨口塞，规格为50 mL。4.1.1.6 移液管。4.1.1.7 容量瓶，规格为：10mL、100mL、1000 mL。4.1.1.8 水相过滤膜，0.45m4.1.1.9 滤纸：快速定量滤纸，灰分少于0.01%。 4.1.2 试剂除特别要求外，所用试剂均为分析纯。4.1.2.1 水，应符合GB/T6682中的规定，水质一级以上。4.1.2.2 氢氧化钠（纯度99%）。 4.1.2.3 一氯乙酸标准品（纯度99.5%）。4.1.2.4 氢氧化钾（KOH，1310-58-3），优级纯。4.1.2.5 萃取溶液：称取0.04g 氢氧化钠（4.2.2）至烧杯中，溶解后至100mL容量瓶中，超纯水定容。取1mL该溶液至1L容量瓶中，超纯水定容，得到0.01m mol/L氢氧化钠溶液（pH值为89）。4.1.2.6 流动相：准确称取3.3660g 1mg 的氢氧化钾（4.1.2.4），加水（4.1.2.1）溶解，定容至2000 mL，得到浓度为30 mmol/L的氢氧化钾溶液。4.2 样品前处理称取1 g（精确到0.1 mg）试样（若试样为固体状，则研磨后称取）于锥形瓶中，准确加入15 mL萃取溶液（4.1.2.5），具塞后置于振荡器（4.1.1.4）振荡10 min（转速：150 rmp），将萃取液经滤纸（4.1.1.9）过滤转移至25 mL容量瓶中，用8 mL萃取液荡洗锥形瓶两次，经滤纸过滤合并加入容量瓶中，然后用萃取液定容，摇匀后静置，取水相经0.45m滤膜（4.1.1.8）过滤后待测。4.3 色谱条件按照操作说明书操作离子色谱仪，以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。流动相：KOH淋洗液自动发生器柱温：30 流速：1.0 mL/min进样体积：25 L抑制器电流：75 mA总分析时间：30 minKOH梯度淋洗液浓度梯度见表1： 表1 KOH梯度淋洗液浓度梯度表Time (min)KOH浓度(mmol/L)曲线015（线性）1105（线性）15105（线性）16305（线性）22305（线性）22.115（线性）3015（线性）4.4. 标准溶液的配制和标准曲线绘制4.4.1 标准溶液配制4.4.1.1 一氯乙酸标准储备液准确称取（精确至0.1mg）0.01g的一氯乙酸标准品（4.2.3）至烧杯中，萃取溶液（4.2.4）溶解完全后至100mL容量瓶中，并定容至刻度，即配制成100mg/L储备液。于4冰箱中避光保存，有效期为1个月。4.4.1.2 工作标准溶液分别准确移取标准储备溶液（4.1.1）50L 、100L 、200L、500L、1000L、2000L、5000L于100 mL容量瓶中，用萃取溶液（4.2.4）定容。即配制成如表2所示的7级标准溶液，即配即用。表2 工作标准溶液系列 系列标准溶液1#2#3#4#5#6#7#一氯乙酸 (mg/L)0.050.10.20.51254.4.2 标准工作曲线的绘制对工作标准溶液（4.4.1.2）进行离子色谱电导法测定，以分析物一氯乙酸浓度（mg/L）为横坐标，其响应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。对校正数据进行线性回归分析，相关系数R2应不小于0.999。测定一氯乙酸的浓度，计算每一个样品中一氯乙酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。本实验建立的标准曲线如图1所示，相关离子色谱数据见表3，回归方程：y=0.221x0.0078，相关系数：0.9997。表3 一氯乙酸工作标准溶液的离子色谱数据溶液浓度（mg/L）保留时间 （min）峰面积（us*min）峰高（us）检测浓度（mg/L）0.05 5.56200.00820.04230.03620.1 5.56700.01900.10190.08600.2 5.56300.04020.28150.19250.5 5.57000.10220.76210.46151 5.57300.19971.51870.90212 5.57700.43063.23941.94525 5.58301.10108.15664.9735图1：一氯乙酸的标准工作曲线五 结果与讨论由于样品中经检测均未检测到一氯乙酸，因此整个优化过程中用到的样品均采取如下处理：首先称取一定量的样品，添加不同体积的一氯乙酸储备液，得到不同浓度的含有一氯乙酸的样品。摇匀，待分析。5.1 前处理优化 5.1.1 萃取溶剂的选择一氯乙酸极易溶于水， 20时其钠盐在水中的溶解度为85g/100ml 。因此选择水溶液作为一氯乙酸的萃取液。pH的变化主要影响一氯乙酸的萃取效率及其稳定性。由标准申报项目专家评审意见，我们深入研究了强碱条件对于待分析目标物稳定性的影响。NaOH被选为pH调节的试剂。选用NaOH调节后 pH值为7、8、9、10、11的水溶液为萃取液作为考察对象。并深入探讨了加入不同pH值的萃取液后一氯乙酸低中高浓度12h，24h，48h，72h的样品的稳定性。如图2所示：（A） 低浓度（2 ppm）（B） 中浓度（20 ppm）（C） 高浓度（100ppm）图2：一氯乙酸为不同浓度萃取溶液pH值的影响其中，萃取效率=检测到的浓度/已加入的浓度100%从图2 A可以看出，样品添加浓度为2 PPM时，加入不同pH值萃取液，样品的萃取效率均较好，一氯乙酸需在48小时内检测，其稳定性较好；但48小时后pH的不同对一氯乙酸的影响较大，pH为8-9时，样品的稳定性较好；同样图2 B，在此浓度时加入不同pH值萃取液，结果发现一氯乙酸在24小时内检测准确性较好，24小时后一氯乙酸随着pH不同损失的变化较大，尤其是pH为7时，损失严重。pH为8-9时，样品的稳定性和萃取效率均好；高浓度时（图2C），样品添加的浓度为100 PPM。加入不同pH值萃取液，发现pH为7时，萃取效率不高；不同的pH值下一氯乙酸在24小时内检测稳定性均较好，24小时后一氯乙酸随着pH不同变化较大。当萃取溶液的pH值为8-9时，可达到满意的萃取效果，并且稳定性好。综上，我们选择pH为89的NaOH（即氢氧化钠浓度为110m moL/L）水溶液作为萃取液，并建议48小时内检测完毕。5.1.2 称样量的选择分别称取两个样品0.5g、0.8g、1g、1.5g，加入一定一氯乙酸储备液制备成浓度一定的加标样品，加入10mL萃取溶液，振荡10min钟后采用离子色谱分析，结果如表4所示：表4 称样量选择的优化称样量（g）萃取效率（%）样品一0.506389.260.798497.641.004596.231.507895.67样品二0.497695.030.806893.461.007294.721.504092.15结果显示，对同一样品而言，不同的称样量得到的萃取效率相近，这说明称样量的不同对实验结果的影响不明显。考虑到样品差异性和不均匀性，最终选择1g为本方法的称样量。5.1.3 萃取液体积的选择进一步优化萃取液的体积。选择三个性质不同的样品，同样，称取1 g已加标的样品（5份），分别加入10 mL、 20mL、25 mL、30 mL、50 mL的pH为89之间的NaOH溶液，振荡20 min 后过膜进样分析。结果如图3所示，15mL后随着萃取液体积的增加，萃取效率提高不明显，综合考虑萃取效率、稀释比以及定容容量瓶，选用25 mL作为合适的定容体积。图3：萃取溶液不同体积对一氯乙酸的影响其中，萃取效率=检测到的浓度/已加入的浓度100%5.1.4 萃取时间的优化为选择合适的萃取时间，准确称取1 g已添加样品5份，于25 下分别振荡萃取0、5、10、25、50min。结果（图4）表明，五分钟后萃取时间对萃取的效率影响不大，考虑样品具有差异性，选择10min为合适的萃取时间。图4：不同时间对一氯乙酸萃取的影响其中，萃取效率=检测到的浓度/已加入的浓度100%5.1.5 小结 通过实验，确定一氯乙酸的前处理步骤如下：准确称取1 g（精确到0.1 mg）试样（若试样为固体状，则研磨后称取）于锥形瓶中，准确加入15 mL萃取溶液，具塞后置于振荡器振荡10 min（转速：150 rmp），将萃取液经滤纸过滤转移至25 mL容量瓶中，用8 mL萃取液荡洗锥形瓶两次，合并经滤纸过滤加入容量瓶中，然后用萃取液定容，摇匀后静置，取水相经0.45m滤膜过滤后待测。5.2 仪器条件的优化 5.2.1 淋洗液的选择由于碳酸氢根淋洗液（碳酸根-碳酸氢根混合物）抑制后形成的碳酸易于部分电离，从而导致背景电导和基线噪声都比希望的高，因此选择氢氧根淋洗溶液为作为淋洗液19。 5.2.2 淋洗液浓度梯度的优化各离子的保留时间与淋洗液的浓度和流速相关，浓度和流速越大，物质越易洗脱，保留时间越小。一氯乙酸属于极性较强的化学物，较易洗脱。与一氯乙酸根离子和常见阴离子F-，Cl-，NO2-，NO3-，Br-等相比，试样中可能含有一些对离子色谱固定相有更强的亲和能力的强保留的离子，需要较高浓度的淋洗液才能洗脱下来。因此，为保证样品中难洗脱物质流出，防止影响下一次进样，并保护色谱柱，淋洗液的浓度可选择先用低浓度，再用高浓度洗脱，并且梯度淋洗时，增加平衡时间，可保证对连续进样无影响。因此淋洗液浓度梯度如下表5，总分析时间为30分钟：表5 淋洗液浓度梯度及流速表Time (min)KOH浓度(mmol/L)流速(mL/min)曲线011.005（线性）1101.005（线性）15101.005（线性）16301.005（线性）22301.005（线性）22.111.005（线性）3011.005（线性）在此淋洗液条件下，我们考察了其他离子共存时对一氯乙酸检测有无干扰，包括常见无机阴离子（F-，Cl-，NO2-，NO3-，Br-，SO42-）和一价有机小分子阴离子（HCOOH-，CH3COO-，HOCH2COO-）。首先考察一氯乙酸根离子与F-，Cl-，NO2-，NO3-，Br-，SO42-的分离情况，如图5，体系中存在大量阴离子，其他常见无机阴离子浓度为10ppm，一氯乙酸根离子浓度为0.5ppm，此淋洗液梯度不仅能将所有常见离子洗脱下来，能得到很好的基线分离，且分离度都大于1.5。其中与F分离度Rs7，与Cl的分离度Rs2.7。图5 大量常见无机阴离子与一氯乙酸根离子分离色谱图1 氟离子2 一氯乙酸根离子(MCA-) 3 氯离子4 亚硝酸根离子 5溴离子6 硝酸根离子 7 硫酸根离子进一步考察一价有机酸根离子，主要为小分子有机酸根，为甲酸根离子，乙酸根离子，羟基乙酸根离子的干扰。如图6所示，HCOOH-，CH3COO-，HOCH2COO-，ClCH2COO-浓度均为10ppm，甲酸、乙酸、羟基乙酸在此条件下，出峰顺序为羟基乙酸根乙酸根甲酸根，保留时间分别为4.307、4.347、4.620min。而氟离子的保留时间为4.217min，因此当这几种有机酸浓度较高时无法一一分离，但不影响一氯乙酸根离子的保留，一氯乙酸离子和其它几种酸根能很好的基线分离，说明这几种离子对一氯乙酸的分离检测无影响。图6 有机一价小分子离子与一氯乙酸根离子分离色谱图1 氟离子、羟基乙酸根离子、乙酸根离子2甲酸根离子 3 一氯乙酸根离子 4 氯离子 图7为一氯乙酸与常见的6种无机离子和小分子有机离子分离的总图，可见在此淋洗液浓度梯度下，对一氯乙酸检测无干扰。图7 一氯乙酸根离子与有机无机离子分离总色谱图1 氟离子、羟基乙酸根离子、乙酸根离子2甲酸根离子3 一氯乙酸根离子 4 氯离子5 亚硝酸根离子 6溴离子7 硝酸根离子 8硫酸根离子5.2.3 色谱柱的优化离子色谱分离柱的填料是由基质和功能基两部分组成。基质作为功能基的载体，对分离不起明显作用。功能基是可离解的无机基团，与流动相接触，在固体相的表面形成了带电荷的离子交换位置，与流动相中的离子发生离子交换，在离子交换反应中，离子交换剂的本体结构不发生明显变化，仅由其离子交换功能基团的离子与外界同性电荷的离子发生等量的离子交换。离子交换剂的选择性主要由树脂的组成，离子交换位置的类型和结构等因素来决定。阴离子交换剂的离子交换功能基主要有两类，即烷基季铵和烷醇季铵。因为用抑制性电导检测时成功的梯度淋洗只有用NaOH淋洗液才是可能的。因此最近色谱柱发展的一个热点是研究对OH-亲和力强，可用低浓度NaOH洗脱阴离子的固定相。OH-对固定相的亲和力是由季铵功能基的水和度决定的，即取决于OH-的数目以及它们与离子交换功能基的距离。随着OH-数目的增加和距离子交换功能基距离的减少，围绕离子交换功能基的区域将被更强的水和，对OH-的选择性也更强，OH-本身就是强水合离子，因此亲和力更强。达到上述目的一个方法就是合成烷基链上带有OH-的季铵离子交换功能基，或者是合成在离子交换功能基的附近带有OH-的单体。用于IonPac AS11柱的离子交换树脂，围绕季铵功能基有三个OH-，产生较高的水合度，可用较低浓度的NaOH洗脱强保留的多价阴离子。AS11-HC柱的填料的基质与AS11相同，都是乙基乙烯基苯交联55%的二乙烯基苯，AS11柱的基质微粒是直径为13m的微孔树脂，AS11-HC柱的基质微粒是直径为9m的大孔树脂，因此AS11-HC柱的柱校和柱容量都比AS11高。下图8为美国戴安公司使用AS11柱和AS11-HC柱分析同一样品色谱图，从图可以看出，AS11-HC柱校高，分离效果好，一氯乙酸峰形好，且得到较好的基线分离。图8 IonPac AS11柱与AS11-HC分离同一样品的色谱对比图戴安公司最近推出了一款高容量，氢氧根体系阴离子交换色谱柱IonPac AS19 是，它是用来检测各种样品中卤氧化物和无机阴离子，包括氟离子，亚氯酸盐，溴酸盐，氯化物，等，包括饮用水，地表水，废水，和其它各种样品。其中最主要的应用是检测饮用水中痕量的臭氧消毒副产物溴酸盐。 而IonPac AS11-HC更适用于分析复杂基体中的阴离子和有机酸，尤其适用于一元羧酸的检测。AS11-HC分离柱还具有以下优点：（1）进行高浓度样品分析时不会出现过载和峰拖尾现象；（2）通过大体积直接进样检测痕量有机酸和无机阴离子；（3）允许使用更高浓度的淋洗液，从而扩大梯度范围。 项目组分别试验了AS19柱和AS11-HC柱，如图9所示，9（A）为AS11-HC柱分离图，9（B）为AS19柱分离图，发现同一梯度洗脱条件下，对于一氯乙酸AS11-HC保留小，保留时间更为合适，且峰形较好，同一浓度比较峰面积发现AS11-HC较高。结合行业内仪器及色谱柱使用情况，本试验中选用IonPac AS11-HC作为分离柱。（A）AS11-HC分离一氯乙酸标液的色谱图（B）AS19分离一氯乙酸标液的色谱图图9 IonPac AS11-HC柱与AS19分离一氯乙酸标液的色谱对比图图中：1一氯乙酸5.2.4 其他色谱条件的优化接下来，项目组分别试验了柱温分别为25、30、35的检测效果，发现对样品的检测影响不大，本试验中推荐使用30作为检测温度。进样体积选择25L，根据淋洗液最高浓度为30mM，抑制器电流为75mA。六 分析参数 6.1 样品测定结果通过本文论述的方法测定烟用添加剂中一氯乙酸的浓度，试样中一氯乙酸的含量（M）由下式计算得出，结果以mg/kg表示： （1）式中：X-试样中一氯乙酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）Ci-由标准曲线得出的一氯乙酸浓度，单位为毫克每升（mg/L）V-定容体积，单位为毫升（mL）m-试料质量，单位为克（g）取两次平行测定结果的平均值为最终测试结果，精确至0.01 mg/kg。平行测定结果其相对平均偏差应小于10%。6.2 检出限和定量限 本实验测定检测限的方法为：对标准曲线中的最低浓度连续重复进样10次，将10次测定的峰面积代入标准曲线的回归方程求出浓度值，再计算10次测定浓度值的标准偏差（SD），分别以3SD和10SD为Ci代入6.1中样品测定计算公式得到的值分别为本方法的检出限和定量限。数据见表6。表6 检出限和定量限结果编号测定浓度（mg/L）10.048720.045130.052940.044250.051260.049770.053680.045890.0489100.0522SD0.平均值0.049233SD（mg/L）0.01010SD（mg/L）0.033检出限（mg/kg）0.25定量限（mg/kg）0.836.3 方法的重复性试验为考察方法的重复性，我们选择了三个不同的样品并添加了高中低不同的三个浓度，每个不同浓度的样品在上述的前处理及仪器条件下重复测定6次，得到的相对标准偏差如下表7。得到样品的重现性好，日内的重现性均在4.82%以下。在上述5.1.1中已讨论过，样品需在48小时内检测完毕。本实验也得到48小时内样品的重复性较好，相对标准偏差在6.86%内。表7 方法的重现性试样中添加浓度日内重现性（RSD，）日间重现性（RSD，）试样一试样二试样三试样一试样二试样三低4.734.823.956.296.865.75中3.184.093.465.715.084.16高1.913.471.723.825.294.876.4 样品回收率 采用标准品溶液对样品进行不同浓度水平的加标后，按照方法前处理步骤处理样品，最后根据加标回收实验计算其加标回收率，实验结果见表8，加标回收率在84.12108.17%之间。表8 方法的回收率试样中添加浓度回收率低90.17%-96.70%中89.75%-108.17%高94.81%-106.71%6.5 再现性实验采用建立的方法选取了八个样品，在中国烟草总公司云南烟草科技研究院、广东中烟工业有限责任公司、湖南中烟工业有限责任公司、上海烟草（集团）公司以及江苏中烟工业有限责任公司6家行业实验室进行了再现性实验。实验使用的离子色谱仪均由美国戴安公司生产，型号有ICS2000、ICS3000。选取的比对样品包括香精、料液（含浸膏）等不同基质的烟用添加剂，所得数据见表9。表9 不同实验室再现性实验结果样品编号湖南中烟广东中烟云南烟科院江苏中烟红塔集团平均RSD112.7711.8612.7312.5111.2712.235.31%233.5634.1133.8932.6631.2033.083.60%358.0567.2862.6254.4753.4059.169.79%418.7916.7416.8617.7215.9917.226.23%539.6341.2738.6439.1237.6839.273.39%667.9473.9872.5069.3267.3470.224.13%7NDNDNDNDND0.000.008NDNDNDNDND0.000.00实验结果表明，采用本标准建立的方法进行烟用添加剂中一氯乙酸的测定，不同实验室得到了较为一致的结果。6.6方法普适性 为证明所建立的分析方法的可靠性和普适性，项目组采用建立的离子色谱方法测定了红塔集团在用的80个烟用添加剂样品，暂未检测到一氯乙酸物质。烟用添加剂中一氯乙酸的测定 离子色谱法 标准项目组 2011.04.18参考文献1 周学永. 氯代乙酸的分析检测. 中国氯碱，2006, 4, 31.2 US EPA (1992) Method 552.1: determination of haloacetic acids and dalapon in drinking water by ion-exchange liquidsolid extraction and gas chromatography with an electron capture detector. Environmental Monitoring and System Laboratory, Cincinnati, OH.3 US EPA (1995) Method 552.2: determination of haloacetic acids and dalapon in drinking water by liquidliquid extraction, derivatization and gas chromatography with electron capture detection. Environmental Monitoring and System Laboratory,