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文档简介
1,检测细胞色素P4501A酶的高选择性比率双光子荧光探针,文献出处:DOI:10.1021/jacs.5b09854J.Am.Chem.Soc.2015,137,1448814495,1,2,Contents,Introduction,1,2,Experimentalsection,1,2,3,4,ResultsandRepresentation,2,3,1.Introduction,CYP1A,抗干扰差成像效果差毒性大,人体药物新陈代谢酶,对致癌物质活性有重要影响,活性腔中有丰富的羟基氨基酸,氢键和-相互作用可能对基底的组成产生作用,传统单显微镜荧光探针,3,NCMN的设计依据:CYP1Ad的底物偏好对位有较强的脱烷基化作用,2.Experimentalsection,4,3.表征,结论:NCMN作为检测CYP1A的探针可行,肉眼色比,112nm红移,5,机理,6,3.表征,7,结论:NCMN的脱甲基化具有良好的反应性和理想的动力学行为,有潜能对复杂生物体中的CYP1A进行定量测定。,8,表征人肝微粒体中CYP1A的量化,结论:(a)(b)(c)确定了NCMN的高选择性(d)(e)(f)表面NCMN可以作为CYP1A调节器的筛选和表征,9,活细胞成像应用,10,11,2,单光子,双光子,未加抑制剂,加CYP1A抑制剂,结论:荧光响应是由于CYP1A调节NCMN所致。NCMN可以用单光子、双光子激发成像来检测活细胞中CYP1A的活性。,11,NCMNe在完整细胞和细胞匀浆内检测CYP1A的量,正常,1nMTCDD,10nMTCDD,12,结论:NCMN可以被用于筛选有效的CYP1A诱导剂,并检测活细胞中生成的CYP1A的酶活性,13,小鼠肝组织中CYP1A的三维深度成像,放大图,结论:NCMN组织渗透力强,组织中的CYP1A适合用双光子深度荧光成像,14,15,3.Resultsanddiscussion,CYP1A2,CYP1A1,亚铁血红素,铁原子,结论:三条H-bond表明-COOH在识别和对接CYP1A中的重要作用催化效率CYP1
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