槐米中芦丁的提取、分离与鉴定

槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）一、 实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。二、实验原理芦丁：浅黄色针状结晶，mp174-178。溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313-314（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持PH8-9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。浓缩至1/2体积，滤液在60-70再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH应严格控制8-9，不得超过10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二）一、实验目的1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。2、熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。二实验原理芦丁粗品可利用芦丁对冷、热水 的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可以通过化学反应及紫外光谱鉴定。三、药品材料芦丁粗品、 硫酸、 盐酸、 氢氧化钠、 镁粉、 -萘酚、 三氯化铝、 葡萄糖溶液、 鼠李糖溶液、 95%乙醇、 碳酸钡、 广泛PH试纸、 层析滤纸等。四、实验操作（一） 芦丁的提取和精制1、芦丁的提取：取前次操作芦丁沉淀液，慢慢倾去上清液后，抽滤，沉淀用少量冷水洗涤2-3次，抽干，得到芦丁的粗产物。2、重结晶：称定粗品芦丁的重量，按约1:200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置于空气中晾干或60-70干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。3、芦丁的水解：取芦丁1g，置于250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液80ml直火微沸回流1小时，至析出的黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15ml）重结晶即得精制槲皮素。取水解后的母液20ml，加入碳酸钡细粉中和至PH7，滤除生成的碳酸钡沉淀。滤液置水浴上浓缩至1-2ml ，供纸色谱用。（二） 鉴定1、 性质实验（1）盐酸-镁粉反应：取芦丁少量置于试管中，加1ml乙醇使溶解，加5滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化的情况。（2）Molisch 反应：取芦丁和槲皮素少量，分别置试管中各加1ml乙醇使溶解，加几滴-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁加浓硫酸10滴，注意观察两液面间产生的颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。2、 色谱鉴定（1）芦丁及槲皮素的纸色谱检识点样：取新华1号滤纸；距下端3cm处用铅笔划线，为起始线，隔1.5cm处点样品。将点好的样品的滤纸挂在层析杠中饱和半个小时，再上行展开。支持剂：层析滤液（5cm*10cm）展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5）上层样品：自制槲皮素的乙醇溶液 自制芦丁的乙醇溶液对照品：芦丁标准的乙醇溶液显色剂：a、可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点b、 喷雾三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察荧光斑点（2）糖的纸色谱检识支持剂：层析滤纸（5cm*10cm）展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5）上层样品：水溶液对照品：1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品溶液显色剂：喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105烘焙5分钟至斑点显色清晰（3） 芦丁及槲皮素的薄层色谱鉴定吸附剂：硅胶G板，105-110活化1小时展开剂：氯仿-甲醇-甲酸（15:5:1）样品：自制槲皮素的乙醇溶液 自制芦丁的乙醇溶液对照品芦丁标准品的乙醇溶液显色剂：a、