血管紧张素转化酶70289.ppt

血管紧张素转化酶的测定及其临床意义检验科,概述,血管紧张素转化酶（ACE）又称激肽酶或肽基-羧基肽酶，系统命名为肽基-二肽水解酶。属血管内皮细胞膜结合酶，由肽的C端将氨基酸切为两段变换而来，可使肽链C端二肽残基水解。ACE可催化血管紧张素（十肽）水解成八肽的血管紧张素，使血管进一步收缩，血压升高。也可作用于肾上腺皮质，促进醛固酮的分泌。因此，ACE是肾素-血管紧张素-醛固酮的重要成分。,概述,ACE还催化具有降压作用的缓激肽水解而失去活性。ACE广泛分布于人体各组织，以附睾、睾丸及肺的含量较丰富，其中肺毛细血管内皮细胞ACE活性最高。肾、脑垂体等组织酶活性较低。ACE测定方法主要有比色法、酶偶联法等。血管紧张素转换酶的别名：血管紧张素转化酶,转换酶的测定原理血管紧张素,.（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：底物马尿酰-甘氨酰-甘氨酸（Hip-Gly-Gly）在ACE作用下，释放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者与三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黄色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gly-Gly），其含量与ACE活性呈正相关。,（2）酶偶联法：ACE使底物马尿酸双甘肽（Hip-Gly-Gly）水解成马尿酸（Hip）和双甘肽（Gly-Gly），后者与L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GGCN）和-谷氨酰基转移酶（GGT）偶联，形成3-羧基-4-硝基苯胺，在340nm处测其吸光度，以反映ACE活性。,试剂,（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：底物液：用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/LHGG溶液，此液中含0.4mol/LNa2SO4、0.3mol/LNaCl，调pH7.3。0.1mol/L硼酸盐缓冲液（pH9.0）。100g/L钨酸钠（含2个水）溶液。0.33mol/LNaSO4。60mmol/LTNBS溶液,（2）酶偶联法：50mmol/LHEPES缓冲液：称羟、乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）1.191g，加双蒸馏水100ml溶解，用于配制GGT、CGCN和基质缓冲液。20kU/LGGT贮存液：取HEPES缓冲液5ml，加入GGT100U，混匀后分装小瓶，20。保存。6.7kU/LGGT应用液：将上述贮存液用二倍量的HEPES稀释配制。0.1mmol/LGGCN溶液：称GGCN20mg，加入50mmol/LHEPES60ml，溶解后4保存。,基质缓冲液：称HEPES1.191g，NaCl1.755g，Na2SO45.68g，用双蒸馏水溶解后，用NaOH调pH至8.0，再补充双蒸馏水至100ml，4保存。基质液：由Hip-Gly-Gly89.5mg加基质缓冲液10ml溶解混合而成。此液各试剂终浓度为：HEPES50mmol/L，NaCl30mmol/L，Na2SO4400mmol/L，Hip-Gly-Gly30mmol/L。10mmol/L双甘肽标准液：称Gly-Gly52.9mg加双蒸馏水溶解，并稀释至100ml，此为贮存液（40mmol/L）。1份贮存液和3份双蒸馏水混合即为应用液。,正常值,（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：26.156.7kU/L。（2）酶偶联法：12-68U/L。,化验结果临床意义,血清ACE测定主要同于肺部疾病的诊断，对其他系统疾病的诊疗也有一定价值。(1)肺部疾病：绝大多数结节病患者血清ACE活力升高，其阳性率及幅度与病活动与否和病变累及的范围有关。肺结核也可升高，而哮喘发作、急性心原性肺水肿、慢性阻塞性肺疾患、自发性气胸、肺纤维化、成人呼吸窘迫综合征等血清ACE均有不同程度下降。（2）肝脏疾病：多数肝脏病患者ACE活性升高，升高幅度依次为肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝则正常。,（3）甲状腺疾病：甲亢患者ACE活性明显高于其他甲状腺疾病，且酶活力高低与T3、T4含量呈正相关。（4）其他：糖尿病、虹膜炎、免疫母细胞肉瘤等，血清ACE升高；高血压、结肠炎等则降低。,附注,（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：标本在室温或冰箱存放1周，酶活力无明显变化，15保存3周酶活性稳定。胆红素对ACE有明显抑制作用，故重度黄疸可使测定结果偏低。EDTA是ACE的强抑制剂，NaCl和Na2SO4对ACE有明显的活化作用，溶血、脂血对结果无影响。本法与紫外分光光度法酶活力单位一致，但其测得值为紫外法的9倍。,（2）酶偶联法：当底物pH8.0，GGCN1.0mmol/L，GGT6.7ku/L时，ACE活性与吸光度值有良好线性。线性范围大，即使ACE在1500U/L，不用稀释也可获得理想结果。GGCN浓度选择：本反应体系中GGCN既是测定酶ACE的受体，又是指示酶GGT的供体。以1.0mmol/L的GGCN最理想，在此浓度下GGCN与吸光度保持良好的线性。GGT对测定的影响：本反应利用GGT将双甘肽与GGCN偶联，生成黄色的3-羧基-4-硝基苯胺，其加入量可直接影响测定结果。GGT高浓度可使底物过度消耗，使吸光度偏离曲线；低浓度GGT又使吸光度