阪琦肠杆菌与婴儿乳粉安全

2/3/2018,阪琦肠杆菌与婴儿乳粉安全,主 要 内 容,阪琦杆菌安全事件,2.2.2 单因素实验,阪琦杆菌安全事件,阪琦杆菌生物学特性,阪琦杆菌生物学特性,阪崎肠杆菌缺少磷酰胺酶，多数A-葡萄糖苷酶活性为阳性。可作为快速区分阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的可靠方法。,生化 反应,增值能力,生物毒性,阪崎肠杆菌是一种少见的新生儿脑膜炎的病原菌，某些阪崎肠杆菌可能产生一种毒力因子类肠毒素样化合物，一些菌株可产生细胞毒效应。,喜冷怕热，用 60的温度 3 分钟即可杀灭，建议 70的开水冲调婴儿配方奶粉，但能耐受一定程度的渗透压和干燥。,对阪崎肠杆菌进行危险性评估发现,与本底相比,25放置6 h该菌的相对危险性可增加30倍;25放置10 h可增加30000倍。,抵抗 能力,阪琦肠杆菌的检测,传统分离检测,分子检测,阪琦肠杆菌检测,阪琦杆菌的分子检测方法,普通PCR法,1 单重 PCR,1.1 rRNA 基因,在保守的rRNA 基因中找到特异性的序列，借助PCR 等分子生物学方法进行特异性检测。,1.2 外膜蛋白A基因,过克隆和鉴定阪崎肠杆菌的外膜蛋白A基(ompA)针对该基因建立了PCR检测方法。,1.3 -葡萄糖苷酶基因,克隆了阪崎肠杆菌葡萄糖苷酶基因簇，建立了针对- 葡萄糖苷酶活性基因的特异性PCR 鉴定系统。,普通PCR法,2 双重PCR法,多重 PCR 检测就是将两对或者两对以上的引物在同一个反应管里进行扩增，达到同时检测多个目的 DNA片段的目的。,相比较单重 PCR 的检测方法，双重PCR 检测单一病原菌灵敏度也有所降低，但具有更高的特异性，减少了假阳性。,多重PCR 的检测应用包括单一病原菌的检测和多种病原菌的同时检测。,荧光定量PCR,定量PCR不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规 PCR 相比，它具有特异性更强、自动化程度高等优点，已在食源性病原菌的检测中广泛应用。 许多研究者针对阪崎肠杆菌多个靶基因进行了荧光定量PCR 检测研究。,环介导恒温扩增（LAMP）,探针方法,1 荧光原位杂交(FISH)技术,FISH是将细胞原位杂交技术和荧光技术有机结合而形成的技术。,检测结果具有很好的特异性和很高的灵敏性，婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌经过8h 的增菌后，灵敏度为1CFU/10g。,与普通PCR的检测方法对比两者都具有很好的特异性。但相比较PCR方法荧光原位杂交不需要DNA提取的步骤，方法更为快捷，而且该方法原则上只能检测到活的菌体,探针方法,2 基因芯片,基因芯片又称为 DNA 芯片、DNA 微矩阵，该检测技术具有高通量、操作简便快速、特异性强，敏感性高等优点。,利用基因芯片技术，选择 ITS 序列作为目的片断进行扩增，根据 6 株阪崎肠杆菌的 ITS 测序序列及 GenBank 序列信息，设计两对引物和 10 条探针。,选用 23 株阪崎肠杆菌和 65 株其他菌进行特异性检测，没出现假阴性和假阳性。经过选择性富集，检测的灵敏为1.3CFU/100g。,2/3/2018,检测方法总结,控制措施,化学法酒精硝酸溶液绿先锋溶液漂白粉溶液双氧水溶液氢氧化钠溶液,控制措施,1、生产环境中的地面、排污管道(包括地漏口)应当经常用1.5%的氢氧化钠溶液进行处理,既能保证环境清洁,又能对阪崎肠杆菌起到预防杀菌作用。,2、设备的清洗要注重碱洗的浓度控制和清洗时间,实际生产中会存对于存在奶垢、粉垢的设备内壁需要有足够的时间将污垢浸泡刷洗掉,达到清洗杀菌的目的。,生产加工注意事项：,控制措施,3、器具的酒精杀菌应当在清洗干净后进行,将酒精均匀涂抹在工器具上,不能有遗漏点。,4、防止人员的交叉污染。操作人员的手部杀菌必须严格执行皂液清洗、烘干、酒精杀菌的程序。,5、