实验动物眼底照相及荧光素眼底血管造影

实验动物眼底照相及荧光素眼底血管造影,昭衍（苏州）新药研究中心眼科实验室,-眼科基础知识,可获取眼底彩照及FFA的仪器,台式裂隙灯+前置镜,台式眼底照相机,手持式眼底照相机,动物眼底结构-猴,视网膜颞上动脉,视网膜颞上静脉,视网膜鼻上动脉,视网膜鼻上静脉,视网膜鼻下动脉,视网膜颞下动脉,视网膜颞下静脉,黄斑中心凹,黄斑反光晕轮,视盘,食蟹猴眼底图谱,手持式眼底照相,数据来源：昭衍（苏州）新药研究中心,数据来源：昭衍（苏州）新药研究中心,动物眼底结构-猴,正常眼底图A：神经纤维反光B：豹纹状眼底C：豹纹状眼底,A,C,B,视盘,视网膜静脉,视网膜动脉,动物眼底结构-兔,新西兰兔眼底图谱,兔：视盘位于上方，主要动静脉从视盘中央进入眼内分为内侧支和鼻侧支，动脉位于表层，静脉位于深层，动静脉平行或彼此交叉。,脉络膜血管,手持式眼底照相加+60D前置镜,手持式眼底照相,动物眼底结构-狗,黄绿色透明毯层,深色素层,鼻下支动脉,鼻下支静脉脉,上支静脉,上支动脉,颞下支动静脉,Beagle犬眼底图谱,视盘,视网膜静脉,视网膜动脉,鼠：视盘位于视网膜中央，色淡红，无明显黄斑结构，视网膜血管为全血管型，中央动脉与中央静脉相间排列。,动物眼底结构-鼠,SD大鼠眼底图谱,BN大鼠眼底图谱,视盘,视网膜静脉,视网膜动脉,脉络膜血管,数据来源：昭衍（苏州）新药研究中心,A,A：视网膜色素紊乱、色素上皮萎缩紊乱B：视网膜色素紊乱C:黄斑中心凹颞侧见2个黄白色病灶，未见明显出血。,B,C,眼底异常图片,荧光素眼底血管造影,一、原理：荧光素眼底血管造影（fundus fluorescenin angiography, FFA）最基本的原理是利用能发荧光的物质，用特定波长的光线激发，产生可以观察到得图像，激发停止，荧光就消失。 FFA采用的荧光染料是荧光素钠，造影时将其快速注入静脉内， 用蓝色光照射，使眼底血管内的荧光素钠被激发出荧光，用高速照相及或摄像机进行拍摄或录像，了解实时的眼底情况。,荧光素眼底血管造影,栅滤光片,激发滤光片,眼,光源,照相机,闪光灯,465490nm,500530nm,荧光素眼底血管造影,荧光素眼底血管造影,关于荧光素钠1.荧光素钠药理荧光素钠（sodium fluorescein）：分子量为376.27，pH=8时荧光最强。激发光波长在紫蓝色波段（465490nm），激发发出的荧光波长在黄绿色波段（500530nm）分布：60%-80%的荧光素钠在血液中与白蛋白结合不能发出荧光，大约20%游离在血液中可被蓝光激发出荧光。静脉注射后1min，荧光素钠即散布全身组织。排泄：24h内经肝、肾排出。注射后24h皮肤显黄色，2天内尿液呈黄色。多饮水可加速荧光素钠排出。2.荧光素钠的应用荧光素钠一般经静脉注射，少数情况可口服给药。(目前我们使用的是10%荧光素钠，0.08ml/kg）3.荧光素钠的副作用,二、荧光造影眼底血管造影技术操作1.造影前准备确认仪器能正常使用动物的精神状态（特别是进行过）医疗垃圾袋、生理盐水，开睑器2.造影过程过敏试验：目前试验中动物未进行过敏试验。造影：先拍摄彩色眼底像，应尽量包括全部眼底，突出病变部位。注射荧光素钠，食蟹猴一般使用10%荧光素钠，0.08ml/kg。注射完毕开始计时并开始拍片，前30s连续拍片，每秒1-2张，30s后可每5秒一张。如果双眼病变需要双眼同时造影。造影早期尽量多照一些图像，中晚期一边观察一边拍摄，注意细节。,荧光素眼底血管造影,三、眼底荧光造影所见的正常荧光形态,内界膜 ILM神经纤维层 NFL神经节细胞层 GCL内丛状层 IPL内颗粒层 INL外丛状层 OPL外颗粒层 ONL外界膜 OLM感光细胞层 IS/OS色素上皮层 RPE,视网膜分层,荧光素眼底血管造影,眼底组织的屏障功能,血-视网膜屏障：血管内皮细胞紧密连接+壁内周细胞组成屏障，其他血管没有此屏蔽功能。脉络膜视网膜屏障：RPE间闭锁小带,荧光素眼底血管造影,臂-视网膜循环时间（arm-retina circulation time，A-RCT）,荧光素： 肘中静脉右心肺循环主动脉颈总动脉颈内动脉眼动脉眼底,A-RCT大体在1015s,影响A-RCT的各种因素 注射部位、速度、注射处的血管粗细、血液粘度与速度、心脏的排血功能，血管管径和阻力，燃料浓度与剂量。 甲亢和贫血可使染料加速到眼底而红细胞增多症和心排量减低等反之。 颈动脉狭窄等,荧光素眼底血管造影,视网膜循环的荧光形态及分期,层流与轴流现象荧光素的血液前锋呈分层流动，称为层流。遇到分支后，荧光素沿一侧前进，称为层流。,动脉层流,荧光素眼底血管造影,静脉层流,染料排空静脉：周边充盈全部充盈周边排空全部排空动脉：中央充盈全部充盈中央排空全部排空染料可以再循环2-3次。五六分钟后荧光素均匀分布于周身所有血液内，此时就见不到再循环了。,荧光素眼底血管造影,背景荧光与残余荧光背景荧光：在动脉前期脉络膜毛细血管很快充盈并融合形成的弥漫性荧光，是透过RPE层透见的脉络膜荧光。残余荧光：荧光素可以弥散至巩膜组织，造影晚期视网膜和脉络膜荧光消退，仍可看到视盘缘和颞侧弧形斑等处的荧光，称为残余荧光。视网膜循环时间（retinal circulation time，RCT）指从视网膜中央动脉开始出现荧光到视网膜中央静脉任何一支开始出现荧光的时间。24秒，视网膜不同区域，RCT不同；黄斑区最快,荧光素眼底血管造影,背景荧光,动脉前期：视网膜动脉出现荧光前。睫状后短动脉早0.51.5秒动脉期：从动脉开始充盈到静脉开始充盈之前。12秒静脉期：静脉开始充盈到全部充盈或开始衰减。再循环期：首次视网膜循环后的再次循环。后期：视网膜荧光完全消退，约在注射造影剂1015分钟后,视网膜循环分期,荧光素眼底血管造影,视网膜毛细血管染料通过动脉后开始充盈，此时眼底的背景荧光逐渐增亮。黄斑部的毛细血管最清晰，黄斑区中央为暗区。,荧光素眼底血管造影,与脉络膜血管同时充盈，比视网膜中央动脉早12秒,睫状视网膜动脉,荧光素眼底血管造影,视盘荧光,1、深层朦胧荧光2、浅层葡萄串荧光3、视乳头表层辐射状毛细血管4、晚期视盘晕轮,巩膜荧光,荧光染料经静脉注射后2分钟到几小时，脉络膜毛细血管渗漏荧光素，使周围组织着色，同时使巩膜着色，从视盘近视弧中见,荧光素眼底血管造影,窗样缺损,四、眼底的异常荧光形态,荧光素眼底血管造影,视网膜色素上皮渗漏是造成强荧光的一个常见原因。透视荧光也是造成强荧光的一个原因。若色素上皮的色素脱失，脉络膜的荧光在脱失处透出。透视荧光特点：早期可见；形态无变化；随脉络膜荧光消失而消失。,染料积存也称池样充盈，指血-视网膜屏障破坏，荧光素经渗漏点聚集在一定空间内，不在早期出现，边界清楚，逐渐增强。组织着染也称组织染色，是指血-视网膜屏障破坏，荧光素经血管壁弥散于周围组织，缺乏一定的空间形状。,染料积存,荧光素眼底血管造影,血管壁着染,染料积存,荧光素眼底血管造影,五、FFA适应症：,视网膜血管疾病（视网膜动、静脉阻塞；高网、糖网；COATS病、EALES病；视网膜毛细血管瘤；视网膜动脉瘤；黄斑中心凹旁毛细血管扩张）黄斑部疾病（中浆病、中渗病；玻璃疣、AMD、黄斑囊样水肿；黄斑裂孔、黄斑缺损、黄斑前膜；Stargardt病、眼底黄色斑点症；病理性近视；先天性视乳头小凹；视锥细胞营养不良；卵黄状黄斑营养不良）视神经乳头疾病（视盘玻璃膜疣；视盘炎；视盘血管炎；视乳头水肿；前部缺血性视神经病变）眼底肿瘤（脉络膜痣、脉络膜黑色素瘤、脉络膜转移癌、脉络膜血管瘤、脉络膜骨瘤、视网膜母细胞瘤、视网膜色素上皮错构瘤）其他疾病（脉络膜破裂、血管样条纹、光凝斑、视网膜色