免疫诊断与预防

第七章 免疫学诊断与预防,第一节 免疫诊断,一、抗原与抗体的检测二、淋巴细胞的测定三、诊断方法的应用,第二节 免疫防治,一、免疫学预防,二、免疫学治疗,第一节 免疫诊断,一、抗原与抗体的检测,1、抗原抗体反应的特点：,特异性,可逆性,比例性,阶段性,一、体外免疫学检测,1、抗原抗体反应的特点： 特异性、可逆性、比例要适宜,抗体过剩,比例适当,抗原过剩,抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系,2、常见检测法,（1）凝集反应,间接凝集和间接凝集抑制试验,（2）沉淀反应,单向琼脂扩散试验,双向琼脂扩散试验,对流免疫电泳,-,+,（3）补体结合反应,补体结合反应,（4）免疫标记技术,免疫荧光直接法,免疫荧光间接法,a、免疫荧光技术,b、免疫酶技术,1、包被抗体 洗,2、加抗原 洗,3、加酶标抗体 洗,4、加底物显色,1、包被抗原 洗,2、加抗体 洗,3、加酶标抗 球蛋白 洗,4、加底物显色,ELISA双抗体夹心法,ELISA间接法,C 放射免疫测定法（RIA）,放射免疫测定法（RIA）是将放射性核素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫标记技术。D：免疫印迹法：Western印迹法,(1)外周血单个核细胞的分离,采用葡聚糖泛影葡胺（分离液）密度梯度离心法,（二）淋巴细胞检测,一、淋巴细胞的类别鉴定,(2) 淋巴细胞亚群的分离,尼龙棉分离法E花环分离法洗淘法流式细胞术 是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。磁分离技术,流式细胞仪的工作原理,光学系统 激光光源 光收集系统液流系统 流动室 液流驱动系统电子系统 光电转换 数据处理系统细胞分选系统,二、淋巴细胞的功能测定,T细胞功能测定增殖试验 3HTdR掺入法 MTT法细胞毒试验皮肤试验 以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，剌激体内致敏T细胞分化增殖，释放淋巴因子，引起局部皮肤的IV型超敏反应,淋巴细胞转化试验,T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)或特异性抗原刺激后，可出现代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加、细胞体积增大并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为淋巴细胞转化现象。 淋巴细胞转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平，因此，可作为测定机体免疫功能的指标之一。正常值6080。,B细胞功能检测,抗体形成细胞的测定溶血空斑试验 溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞（B淋巴细胞）的一种方法，即将经绵羊红细胞（SRBC）免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37作用下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。该试验可检测机体产生抗体的能力。,免疫诊断方法的应用,一、疾病诊断 1、感染性疾病 各种病原体感染后，体内能检出特异抗体或抗原，因此抗原抗体反应广泛用于感染的确定、传染病的诊断、传染后免疫力的确定等。 2、免疫缺陷病 免疫细胞的鉴定、计数以及功能试验可帮助免疫细胞缺陷的诊断。 3、肿瘤，自身免疫疾病二、免疫学监测 感染性疾病的免疫学监测有助于疾病的转归与预后判定，如监测乙型肝炎病毒抗原与抗体的消长有助于乙型肝炎的预后判定，HIV感染者的CD4细胞计数有助于艾滋病的诊断、病情分析、疗效判定。,第二节 免疫学防治,免疫学防治是使用免疫学的方法，借助生物制品的作用，增强机体免疫功能，从而达到防治疾病的目的。,人工自动（主动）免疫（疫苗、类毒素）,人工被动免疫（抗毒素、丙种球蛋白等）,免疫预防,免疫治疗,免疫增强疗法,免疫抑制疗法,免疫防治,一、 人工自动免疫,人工自动免疫：是给机体输入疫苗或类毒素等抗 原物质，剌激机体产生特异性免疫力。,死疫苗：用物理或化学的方法将病原微生物杀死制备而成的制剂。又称灭活疫苗。活疫苗：用人工变异或从自然界筛选获得的减毒或无毒的活的病原微生物制成的制剂。又称减毒活疫苗。新型疫苗：亚单位疫苗、合成疫苗、基因工程疫苗,1、疫苗,死疫苗和活疫苗的比较,（1）亚单位疫苗（Subunit Vaccine）是去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。优点：免疫效果高， 不良反应少（2）合成肽疫苗 (synthetic peptide vaccine)将具有保护性免疫力的人工合成肽与适当载体结合后，再加入佐剂制成的疫苗。乙肝病毒多肽疫苗 （3）基因工程疫苗 DNA 疫苗（DNA Vaccine） 是用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的重组体直接免疫机体，转染宿主细胞，使其表达保护性抗原，从而诱导机体产生特异性免疫的疫苗优点：体内可持续表达，免疫效果好，维持时间长。缺点：其机制和安全性尚不完全清楚，一些问题有待解决。,新型疫苗,我国推行的儿童基础免疫程序,2、类毒素（Toxid）,细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留其免疫原性。 白百破：白喉类毒素+ 百日咳杆菌死疫苗+破伤风类毒素,人工被动免疫：是给机体输入抗体或细胞因子，使机体获得特异性免疫力。可立即获得，但免疫维持时间短，2-3周，多用于治疗或紧急预防。,1、抗毒素：是抗细菌外毒素的抗体。多为马血清制剂，具有抗体性和免疫原性。 2、胎盘球蛋白和血浆丙种球蛋白 分别由健康产妇胎盘血和正常人血浆中提取的丙种球蛋白制成的生物制品 3、抗菌血清或抗病毒血清： 来源于恢复期病人及含高价特异性抗体供血者血浆， 或免疫动物血清。 4、细胞免疫制剂（干扰素、转移因子),二、人工被动免疫,人工自动免疫和人工被动免疫的比较,针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强或抑制 机体的免疫功能以达到治疗疾病的治疗方法。常使用免疫增强剂和免疫抑制剂等生物制品来进行治疗。、免疫增强疗法主要用于治疗感染、肿瘤、免疫缺陷等免疫功能低下的疾病。、免疫抑制疗法主要用于治疗超敏反应、自身免疫性疾病、移植排斥、炎症等。,二、免疫学治疗,1、免疫增强剂,免疫增强剂（IPA）：是增强、促进和调节机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。抗体，分子疫苗细胞因子：IL2，干扰素生物应答调节剂：能促进或调节免疫功能的生物制剂 转移因子：存在于人和动物白