HIV实验室诊断

HIV实验室诊断,广州医学院第一附属医院检验科廖伟娇,一、HIV的一些相关知识：1.HIV的结构2.HIV基因组成及结构3.HIV感染的免疫反应二、HIV的实验室检查1.实验室、人员及设备要求2.实验室检测3.职业暴露,1.HIV的结构,脂质膜,蛋白酶,整合酶,P18,gp120,gp41,RNA,反转录酶,P24,核蛋白,核衣壳(由微粒组成),2、HIV的基因分型HIV可分为两个型：HIV-和HIV-。(1)基因组成：:LTR-gag-pol-vif-vpr-tat-rev-vpu-env-nef-LTR.:LTR-gag-pol-vif-vpx-vpr-tat-rev-env-nef-LTR.结构基因：gag、pol、env调节基因：tat、rev、nef、vif、vpu附属基因：vpr、vpx,LTP,gag,LTP,gag,pol,pol,vpr,vif,vif,tat,vpu,rev,env,rev,rev,rev,tat,tat,tat,env,LTP,LTP,vpr,vpx,net,net,（2）基因结构：,(3)两者的主要区别：型含有vpu，而型含vpx。vpr和nef与其他基因的关系也不同：AHIV-的vpr与vif相互重叠，而nef与env不重叠；BHIV-的vpr与vif不重叠，而nef与env相互重叠。,(4)基因表达产物：HIV-HIV-env：gp160gp120gp41gp140gp105gp36gag：p55p24p18p56p26p16pol：p65p51p31p68p53p34,3.HIV感染的免疫反应,抗-gp41,抗-p24,p24,实验室要求：实验室分级：初筛实验室确证实验室粤卫2004305号文规定：05年6月份前在县级以上收治定点医院建立初筛实验室。填写申请、评审、批准要求：HIV血清学试验：BSL-(P2)HIV病毒研究：BSL-P3),初筛实验室设计和建造的要求：有专用实验室（至少专用检测台），应划分清洁区和污染区，并有明显标记，有充足的操作空间。(2)实验室墙面、地面、台面材料应来耐酸、碱、易清洁消毒、不渗漏液体；室内应有防蚊、防蝇、防鼠等设备,检验台上应装置紫外灯。备有消毒药品、消毒器材和消毒设备。有感应流水装置，备有冲眼睛水，足够的一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜。(6)实验室应装置恒温设备,室温为2025。,BSL实验室：设计和建造的要求（增加）：应有专门放置生物废弃物容器的台(架)。应设置实施各种消毒方法的设施，如高压灭菌锅、化学消毒装置等对废弃物进行处理。应设置洗眼装置。实验室门宜带锁、可自动关闭。实验室出口应有发光指示标志。,BSL实验室：安全设备：生物安全柜或其他物理抑制设备,HIV抗体初筛检测程序：,样本,选用初筛试剂,初筛检测,阳性反应,阴性反应,原有试剂另一种原理初筛试剂,重复检测,均呈阳性,一阴一阳,均呈阴性,送确认,阴性报告,HIV抗体的检测：1.初筛试验方法及原理：（1）ELISA（2）明胶凝集试验（3）金标法（4）自动化仪器测定,2.确证试验：免疫印迹法、间接免疫荧光法、免疫沉淀法(1)方法原理(2)确证试验结果判断：美国CDC：gp160/gp120或p24/gp41任意二条带美国FDA：gp160/gp120或p24、gp41、p31三者组合WHO：至少二条以上env带美国红十字：gag、pol、env每组至少一条带中国：至少二条以上env带或一条env带和一条(gag)p24带。,3注意事项(1)相关的政策和规定(2)临床操作中的注意事项(3)初筛与确证结果的差异及解释(4)医疗纠纷,医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则(试行)(2004.5.31)：第八条医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后，应当立即实施以下局部处理措施：,1用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤，用生理盐水冲洗粘膜。2如有伤口，应当在伤口旁轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，再用肥皂液和流动水进行冲洗；禁止进行伤口的局部挤压。3受伤部位的伤口冲洗后，应当用消毒液，如75酒精或0.5碘伏进行消毒，并包扎伤口，被暴露的粘膜，应当反复用生理盐水冲洗干净,第九条医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后，医疗机构应当对其暴露的级别和暴露源的病毒量水平进行评估和确定第十条艾滋病病毒职业暴露级别分为三级,一、发生以下情形，确定为一级暴露：暴露源为体液、血液或者含有体液、血液的医疗器械、物品。2暴露类型为暴露源沾污了有损伤的皮肤或者粘膜，暴露量小且暴露时间较短。,二、发生以下情形，确定为二级暴露：暴露源为体液、血液或者含有体液、血液的医疗器械、物品。2暴露类型为暴露源沾污了有损伤的皮肤或者粘膜，暴露量大且暴露时间较长；或者暴露类型为暴露源刺伤或者割伤皮肤，但损伤程度较轻，为表皮擦伤或者针刺伤。,三、发生以下情形，确定为三级暴露：暴露源为体液、血液或者含有体液、血液的医疗器械、物品。2暴露类型为暴露源刺伤或者割伤皮肤，但损伤程度较重，为深部伤口或者割伤物有明显可见的血液。,第十一条暴露源的病毒载量水平分为：轻度、重度和暴露源不明三种类型。,暴露源不明：不能确定暴露源是否为HIV病毒阳性者轻度：经检验，暴露源为HIV病毒阳性，但滴度低，艾滋病病毒感染者无临床症状、CD4计数正常者。重度：经检验，暴露源为HIV病毒阳性，但滴度高，艾滋病病毒感染者有临床症状、CD4计数低者。,第十二条：医疗卫生机构应当根据暴露级别和暴露源病毒载量水平对发生艾滋病病毒职业暴露的医务人员实施预防性用药方按。,第十三条预防性用药方按分为基本用药程序和强化用药程序。基本用药程序：为两种逆转录酶制剂，使用常规剂量，连续使用28天。强化用药程序：是在基本用药程序的基础上，同时增加一种蛋白酶抑制剂，使用常规治疗剂量，连续使用28天。,预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在4h内实施，最迟不得超过24h；即使超过24h，也应当实施预防性用药方。（早、有）,发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，可以不使用预防性用药；（一级轻度不用药）发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为重度或者发生二级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，使用基本用药程序。（一级重度或二级轻度用基本）,发生二级暴露且暴露源的病毒载量水平为重度或者发生三级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度或者重度时，使用强化用药程序。（二级重度或三级用强化）暴露源的病毒载量水