金银花中绿原酸的提取与分离

现代分离技术的实验规划一、实验说明本课程实验是一次综合性实验，分班进行，每班实验应在两天内完成。 各组实验预定于星期六和星期日上午8时至晚上8时。实验每次一班，每个实验由两个人共同完成。 也就是说，2人是1组，1组是1组实验器具和1台实验台。 各级班长负责实验室的卫生和安全。2、课堂评价方法以实验考察形式进行，每人设置一次实验机会，到期不补。 我希望大家能准时参加。 如果发生冲突，学生之间可以互换。3 .进入实验室后，各组学生首先根据仪器清单检查仪器的数量和健全情况。 如有设备不足或损坏等问题，请在课后20分钟内联系实验室工作人员，委托实验人员进行补充或更换。4、实验结束后，各组学生应对仪器清单进行检查，分别清洗后委托实验人员进行检查。 如有破损或不足，应规定支付赔偿金。 因此，希望学生们珍惜机器，认真操作。在实验期间，要注意保持实验室桌面、地面、水槽的卫生，尤其是自己的工作区域。 同时要注意实验室财产的安全和自己的安全，不要在实验室里吵闹。二、实验内容主题：金银花中绿原酸的提取与分离学习内容：固体中有效成分的提取(索氏法)技术减压浓缩(旋转蒸发)技术硅胶吸附柱色谱；硅胶吸附TLC技术薄层色谱法检测产品纯度灯盏花是灯盏花科灯盏花属植物灯盏花同种植物的干燥花蕾，是“药食相同”的绿色植物，是临床常用中药之一。 具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保护肝利胆的功能，以痈肿治疗疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、感冒、疫病发热、急性支气管炎、肺炎、腮腺炎、胆道感染、关节炎等，能改善放射、化疗引起的白细胞降低，被誉为“中药青霉素”。 金银花还广泛应用于健康食品、化妆品、烟草、食品等行业。 现代研究认为金银花的主要生物活性有效成分是绿原酸类化合物，常用其含量的高低来评价金银花的品质优劣。绿原酸结构式三、实验方案金银花粉75%乙醇，索氏萃取回流4h滤液(粗提取液)残渣减压浓缩，60干燥粗提物(浸渍)1:1硅胶混炼样品提取物混炼样品硅胶柱子乙酸乙酯：甲酸：水(以不同比例溶出)含有绿原酸的洗脱液浓缩至树干绿原酸粗品硅胶柱子氯仿-甲醇梯度溶出绿原酸四、方法1、TLC板的制备和活化在干净的乳钵中加入约6g硅胶GF254，边轻轻磨削边慢慢加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液15ml。 继续研磨约10min，系统的粘稠度适当的时候可以铺垫板。用勺子把适量的糊料均匀地摊在干燥的载玻片上，用手拿着薄板的端部在桌子上轻轻振动，直到薄层变得均匀。 把铺好的座椅放在水平的桌子上，使之凉爽。将冷却后的薄片放入预先恒温至105110的烤箱中活化30min。2、提取(索氏提取法)将金银花制成粗粉，称量约100g，用75%乙醇用索氏萃取器回流处理4h，减压浓缩该提取液，在60干燥得到提取物。3、分离(1)粗分离取一定量的浸泡，按1:1加入200-300目的硅胶混合，晾干。使用乙酸乙酯湿式柱(柱型8.5cm53cm、硅胶200-300目)，用干式法同样地使柱为乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲酸-水(2010.1 )、乙酸乙酯-甲酸-水(1010.1 )、甲醇流速控制在每1/10管柱的体积即可。 分部收集，每管30ml。(2)粗分离过程中的薄层检测粗分离过程中随时薄层检测柱的洗脱情况，展开剂为乙酸丁酯：甲酸：水(72.52.5 )。 从某馏分中出现绿原酸(365nm处显示蓝色荧光)，几乎看不到蓝色荧光，显示绿原酸几乎完全收集。 根据显色剂的显色，加上相同的流程，分为26个部分。 流程图：图2金银花粗分流程图具体方法：捕集液的薄层预检：在用TLC分析各捕集管之前，为了节约薄板，用毛细管将各捕集管中的液体依次放置在一张薄板上，用与各点对应的管号编号，使各点的溶剂完全挥发干燥后，在波长365nm的紫外光下观察，发现其对应的接受管上有明显的斑点并且，对于有斑点的各管，采用以下方法进行TLC分析。TLC分析：采用预激活的薄层片，按管收集液体进行TLC分析，点样品数随片的大小而异，两个斑点间的最小间隔在8mm以上，其中有绿原酸对照点(注：各毛细管只能用于同样的样品)。 在订购各试管的样品量必须相同的样品时，必须按照编号顺序进行。按照TLC分析的薄层片材请按顺序编号)。 等展开剂爬到板层的4/55/6的高度时，取出薄层板，在室温下放入加热片，使其平整，使溶剂挥发干燥。 接着，在波长365nm以下放置薄板，观察并记录薄板上斑点的分布情况及其相应的Rf值。TLC的分析内容如下：判断斑点数的多少。 展开后，斑点数越多，表示含有化合物越多。 只有斑点者表示对应的管可能含有纯化合物。 斑点颜色越深，表示对应化合物的含量越多。根据Rf值或斑点高度，判断不同管中是否含有相同的化合物。 同一高度有相同的斑点表明两管含有相同的成分。B5和C1部分在TLC中含有大量绿原酸，两部分合并(B5C1)干燥后浓缩至得到绿原酸粗品。(3)精制B5和C1部分用TLC含有大量绿原酸，两部分合并(B5C1)干燥后得到绿原酸粗品，该部分以硅胶柱色谱法、氯仿-甲醇梯度溶出，得到化合物(e )绿原酸精品。4 .检查分别采用高效液相色谱法分析B5C1和e2部分，测定两部分绿原酸的含量。测定条件：将对照品溶液和供试品溶液分别精密吸取510L，注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键硅胶为填充剂，以SPD-10AV紫外检测器、乙腈-0.4%磷酸(13:87 )为流动相，以327nm进行测定。附属：试验主要用品1 .材料金银花(金银花蕾与开放花混合样品，用吹风机吹干后备用。 中所述情节，对概