食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定

附件1食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定BJS 201705范围1该方法规定了高效液相色谱-串联质谱测定食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的方法。该方法适用于液体牛奶、稀奶油、婴幼儿配方奶粉(特殊医学用途除外)、婴幼儿谷类辅助食品、谷物粉碎加工品、植物油等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定。2原理样品由乙腈提取，纯化为正己烷脱脂剂，由高效液相色谱-串联质谱检测，并通过外标法定量。3试剂和材料除非另有规定，所有试剂均为分离纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇(CH4O):色谱纯。3.1.2乙腈(C2H3N):色谱纯。3.1.3甲酸(CH2O2):色谱纯。3.1.4正己烷(C6H14):色谱纯。3.1.5氯化钠(NaCl): 550 燃烧4h后备用。3 . 1 . 6 . 0 . 1%甲酸水溶液：10mL甲酸测定，为1000mL添加水固定容量。3.2标准品有关香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素基准物纯度98.0%、中文名称、英文名称、CAS注册号、分隔符、相对分子量和结构等的详细信息，请参阅附录a表A.1。3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液体(1.00mg/mL):分别称为香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素0.1g(到0.0001g)标准物质在100毫升容量的瓶子里，被甲醇溶解，在尺度上是常量。-18 保存，保留期为6个月。3.3.2混合标准储备溶液：在相同的100毫升容量瓶中，将上述3种标准储备溶液各1.00毫升吸收为乙腈10g/mL浓度的混合标准储备溶液，在刻度上稀释，在-18 保存，保留期为1个月。3.3.3空矩阵溶液：根据6.1中规定的预处理方法制造空矩阵溶液。3.3.4基质混合标准系列工作液：分别正确吸收香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准储备液体适量(3.3.2)、空基质提取物(3.3.3)稀释，分别为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng4设备和设备4.1液相色谱-串联质谱：电喷雾离子源。4.2滚动混合器。4.3超声波清洗机。4.4离心机：速度5000r/min。4.5分析平衡：敏感度0.1mg和0.01g5准备样品婴幼儿的谷类辅助食品、谷物制粉加工品都要粉碎，搅拌均匀，以便通过425m的标准网状体质。其他样品不需要特殊的准备。6分析阶段6.1样品的制备和提取6.1.1婴幼儿配方奶粉，婴幼儿麦片辅助食品：带1g样品(至0.01g)，放入50mL聚丙烯离心管，3mL水，旋流振动30s，7mL乙腈(3.1.2)，滚动振动30s，超声波处理25min，116.1.2液体牛奶(巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳等)、稀奶油：2g样品(直到0.01g)，放入50毫升聚丙烯离心管，20毫升乙腈(3.1.2)，旋流振动30s，超声波处理25分钟，116.1.3谷物铣削加工品(大米等):取1g样品(至0.01g)，放入50mL聚丙烯离心管，3mL水，旋流振动30s，7mL乙腈(3.1.2)，滚动振动30s，超声波处理25min，1000006.1.4植物油：取1g样品(到0.01g)，放入50mL聚丙烯离心管，1mL水和10mL乙腈(3.1.2)，旋流振动30s，超声波处理25min，1g氯化钠(3.1.5)，1000r6.2设备参考条件6.2.1色谱条件a)列：XDBC18列，4.6mm50mm，1.8mm或同等性能。b)流动相：a: 0.1%甲酸水溶液、b:甲醇、梯度洗脱条件见表1。c)流速：0.3mL/min。d)柱温度：30C。e)样本：2L。表1拔模洗脱条件时间(分钟)a奖(%)b相(%)075250.57525250506505071090910901275256.2.2质量分析条件f)离子源：电喷雾离子源。g)扫描方法：阳离子扫描(ESI)。h)检测方法：多反应监测(MRM)。I)电离电压、雾化气体、辅助气体、气幕压力、雾化温度应优化为最佳灵敏度，离子对和定量离子对以及其他质谱参数见附录b表B.1。6.3测量6.3.1制作标准曲线以混合标准系列工作液(3.3.4)分别测量为仪器参考条件(6.2)的相应标准溶液的色谱峰面积、混合标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标绘制世界曲线。6.3.2定性测量在相同的测试条件下测量样品和矩阵混合标准工作溶液，并记录目标在样品和标准工作溶液中的保留时间。如果在样品中检测出与矩阵混合标准溶液(3.3.4)的测量对象保留时间相匹配的色谱峰，并且相对于对应于浓度的标准溶液的对应定性离子的相对丰富度，偏差不超过表2中规定的范围，则可以确认在样品中检测到相应的测量对象。表2定性测定中相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/% 50从20到50从10到2010允许的相对偏差/%202530506.3.3定量分析根据仪器参考条件(6.2)测量样品溶液(6.1)，可以确定根据标准曲线测量的液体中各成分的浓度。在示例中测试的每个组件的响应值必须在标准曲线的线性响应范围内，如果其内容超出线性范围，则应重新采样分析，将乙腈稀释到适当的浓度进行测量。混合标准工作液的高效液相色谱-串联质谱MRM色谱见图C.1。7计算结果要计算样品中单个目标化合物的含量，请按(1)。.(1)正在样式中：X样品的测量目标成分含量(每公斤微克(g/kg)；C从标准曲线读取的测量流体中，每微克升( g/l)的每种测量成分浓度；M示例称为质量，以克(g)为单位。V样品溶液固定体积，mL(单位)。计算结果显示为在迭代条件下获得的两个独立测量结果的算术平均值，结果保持在小数点后一位。8检测方法灵敏度、准确度、精度8.1灵敏度羊碱液牛奶为2g，植物油，稀奶油，谷物制粉，婴幼儿配方奶粉，婴幼儿麦片辅助食品被称为样品数量1g时，香兰素，甲基香兰素，乙基香兰素的检测限制为30.0g/kg，定量限制为100.0g/kg。8.2准确度该方法在婴幼儿配方奶粉、液体油、植物油、稀奶油、谷物制粉加工品、婴幼儿谷类辅助食品100.01000.0g/kg添加浓度范围内，回收率为78.6%118.4%。8.3精确度在迭代条件下得到的两个独立测量结果的绝对差异不能超过算术平均值的10%。附录a香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素三种化合物的相关信息表A.1中文名称、英文名称、CAS注册号、子代、相对分子质量和结构名字英文名字卡斯分子式相对分子质量结构式香兰素范依林121-33-5C8H8O3152.14甲基香兰素Methylvanillin120-14-9C9H10O3166.17乙基香兰素Ethylvanillin121-32-4C9H10O3166.17附录b质量分析条件参考质量分析参数：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方法：阳离子扫描(ESI)；c)检测方法：多反应监测(MRM)；d)电离电压(is):5500v；e)雾化气体(Gas1):50psif)辅助气体(Gas2):50psig)气幕压力(cur):35 psi；h)雾化温度(tem):500；I)定性离子对、定量离子对和其他质谱参数见表B.1。表B.1 3种化合物的定性离子对、定量离子对和质谱参数序号分析物离子对M/z移除丛集电压v碰撞能量EV入口电压v出口电压v1香兰素153.1/93.1*90191013153.1/125.0901410132甲基香兰素167.2/139.0*100171013167.2/124.01002510133乙基香兰素167.2/111.0*90171013167.2/93.090231013*:定量离子注：附录b中列出的参考质量分析条件仅供参考，使用其他质量分析器时仪器参数可能会有差异，测量前应优化质量分析参数。附录c香兰素、甲基香兰