牛奶中抗生素的来源及定量分析方法.ppt

牛奶中抗生素的来源及定量分析方法,姓名：李蒙学号：2151274,设计,目录,一、抗生素的定义和种类二、分析牛奶中抗生素的可能来源三、实验部分,一、抗生素的定义,是指某些细菌、放线菌、真菌等微生物的次级代谢产物，能杀灭或抑制病原微生物，有些抗生素还具有抗肿瘤和抗寄生虫作用。,一、抗生素的种类,抗生素的种类在世界范围内的食品或农产品进出口贸易中，主要有6类需要检测的残留抗生素，分别为-内酰胺类、四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、氯霉素类。,二、牛奶中抗生素的可能来源,1.治疗药物治疗泌乳期病牛时使用的抗生素可能会从奶牛体内移行到乳腺，进入牛奶中。,二、牛奶中抗生素的可能来源,2.饲料添加剂为了预防奶牛疾病并提高产量，在奶牛饲料中添加抗生素也可能会造成牛奶中抗生素的残留。,二、牛奶中抗生素的可能来源,3.其他渠道由于牧场没有严格的卫生制度和配套的设施，加之管理不善，在实施挤奶、储奶时，可能也会造成牛奶抗生素的污染。,三、实验,样品取样地点：某奶牛场样品保存条件：4条件下密封保存，避免阳光直射,样品收集,1.选取20头患有乳房炎的奶牛，对其中10头患病奶牛，采用无抗药品进行治疗，另外10头患病奶牛采用含抗生素的药品进行治疗，用药812h后分别对奶牛进行采样（100mL），标注保存，待测。,样品收集,2.选取10头健康的奶牛，饲喂含有抗生素添加剂的饲料，饲喂812h后分别对奶牛进行采样（100mL），标注保存，待测。,样品收集,3.选取10头健康的奶牛，饲喂无添加剂的饲料，812h后分别对奶牛进行采样（100mL），标注保存，待检。,四环素类抗生素与氯霉素类抗生素的检测方法,固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC）,褚洪潮.牛奶中抗生素残留的检测技术研究及贵阳地区牛奶中抗生素残留的调研D.陈文生：贵州师范大学，2014.,仪器,Agilent1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）Diamonsil钻石C18柱（4.6mm250mm，5m）（北京迪马科技有限公司）Cary100Bio紫外可见分光光度计（美国Varian公司）HYPERSEPC18固相萃取柱（美国Thermo公司）WatersOasisHLB固相萃取柱（美国Waters公司）EYELAOSB-2000旋转仪蒸发仪（日本EYELA公司）AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）H66MC超声波发生器（无锡市超声电子设备厂）SHB-型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）80-2型离心机（上海医疗器械集团）,试剂,乙腈（色谱纯）正己烷（色谱纯）甲醇（色谱纯）甲酸（色谱纯）盐酸四环素（OTC）盐酸土霉素（TC）盐酸金霉素（CTC）氯霉素（CP）磷酸氢二钾（分析纯）柠檬酸（分析纯）乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）（分析纯）,试剂,0.1molEDTA-2Na-Mcllvaine缓冲溶液：称取柠檬酸12.9g，磷酸氢二钾10.9g，EDTA-2Na37.2g，用高纯水溶解并定容至1.0L，调节pH值至4.00.5。,样品的处理,各准确量取上述牛奶样品2.00mL，并加入2mL水，加入2mLEDTA-2Na-Mcllvaine缓冲溶液充分振荡2min后，4000r/min离心10min，残渣按照上法再次提取，合并两次上清液后加入等体积正己烷萃取，过WatersOasisHLB固相萃取柱（预先用3.0mL甲醇和3.0mL纯净水活化），等近干时用1.0mL体积分数为0.1%的甲酸乙腈溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液经0.45m有机滤膜过滤后用于HPLC分析。,色谱条件,色谱柱：Diamonsil钻石C18柱（4.6mm250mm，5m）流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈流速：1.0mL/min进样量：10.0L柱温：30oC检测波长：270nm,结果计算,样品中抗生素残留量Cn按下式计算：Cn=An/AbCbV/Gn：表示各类抗生素An：表示各类抗生素的峰面积Ab：表示各类抗生素标准品的峰面积Cb：表示各类抗生素标准品的浓度（g/mL）V：表示样品定容体积（mL）Cn：表示样品中各类抗生素的残留量（mg/kg）G：表示样品的称样量（g）,青霉素类抗生素的检测方法,固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC）,试剂,青霉素G标准对照品阿莫西林标准对照品甲醇（色谱纯）乙腈（色谱纯）磷酸二氢钾（分析纯）实验所用水均为超纯水,样品的处理,各准确称取上述牛奶样品30mL，置于100mL聚丙烯离心管中，加入10.0mL乙腈溶液提取，摇匀后，再加入50.0mL乙腈溶液，充分摇匀，然后在2000r/min转速下离心10min，过滤，取上清液用旋转蒸发仪在35下旋干后，向其中加入1.0mL的（pH=4.6）磷酸二氢钾溶液，充分溶解后，过HYPERSEPC18固相萃取柱（预先用5.0mL甲醇和5.0mL纯净水活化），等近干时用3.0mL体积分数为70%的乙腈水溶液洗脱，收集洗脱液。样品溶液经0.45m微孔滤膜过滤后用于HPLC分析。,色谱条件,色谱柱：Diamonsil钻石C18柱（4.6mm250mm，5m）流动相为水-乙腈流速：0.6mL/min进样量：10.0L柱温：30oC检测波长：225nm,结果处理,样品中抗生素残留量Cn按下式计算：Cn=An/AbCbV/Gn：表示各类抗生素An：表示各类抗生素的峰面积Ab：表示各类抗生素标准品的峰面积Cb：表示各类抗生素标准品的浓度（g/mL）V：表示样品定容体积(mL)Cn：表示样品中各类抗生素的残留量（mg/kg）G：表示样品的称样量（g）,结果处理,根据测量及计算结果，确定牛奶中是否含有抗生素以及确定抗生素的来源。,参考文献,1宁海容.牛奶中抗生素残留检测研究进展J.中国畜牧兽医，2012（8）：5-6.2褚洪潮.牛奶中抗生素残留的检测技术研究及贵阳地区牛奶