高中生物（新人教版）选修三专题2《细胞工程》222《动物细胞融合与单克隆抗体》课件（新人教版选修

动物细胞融合与单克隆抗体,思考：1、什么叫动物细胞融合？2、促进细胞融合的方法有哪些?3、细胞融合技术最大的优点是什么？4、植物体细胞杂交与动物细胞融合有哪些异同？,电场法(效率高、伤害小、易操作)（离心、振动、电刺激）,聚乙二醇（PEG）,灭活的病毒（灭活的仙台病毒）,链接:病毒促融细胞,(一)动物细胞融合（细胞杂交）,总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合,细胞膜的流动性、植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、果胶酶去壁,用胰蛋白酶使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、生物方法,获得部分或完整植株,主要用于制备单克隆抗体,回顾1、抗体的化学本质？2、抗体由什么细胞产生？3、抗体的作用特点？4、抗体的分布？,（二）单克隆抗体的制备,思考：如何获取某种特定抗体？,1、抗体的传统生产方法,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,思考与探究：如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想：,2、单克隆抗体的制备过程,自学与思考：1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？为什么要这样处理？2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？,1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?,小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。,2、骨髓瘤细胞是癌细胞吗?,有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。,2、单克隆抗体的制备过程,思考与探究：如何获得能产生特异抗体的杂交瘤细胞呢？,（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?,第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。,具有一定的流动性,C,有丝,不变,抗体能与抗原发生特异性结合的特点,变式练习右图为细胞融合的简略过程，请据图回答：若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用处理，除去了；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是。若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。若A、B是动物细胞，一般取自，然后用，使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是，所形成的D称为。若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了。注射后小鼠身体产生了相应的。图中B为。若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D细胞应该是。从中选择出它的方法是培养。获得D后，常用的培养方法是。,知识拓展：如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,单克隆抗体：特异性强、纯度高、灵敏度高，产量大、容易标准化生产。,3、单克隆抗体的优点,4、单克隆抗体的应用,、可用于作为诊断试剂：有准确，高效，简易、快速的优点、可用于疾病治疗、可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹”。）“生物导弹”单克隆抗体药物,总结,一种诱导细胞融合的新方法,一种新细胞,一个优势,例题2（1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，将抗原注射到小鼠体内，可获得(多选)（）AT淋巴细胞B效应B淋巴细胞C抗体D记忆细胞（2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是(多选)（）AB淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体C体外培养时，一个B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不能无限增殖D单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显,BCD,ACD,已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：（1）试管中除融合的杂种细胞外，还有种融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。方法：。原理：,培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞,加入氨基嘌呤后,使D合成的途径阻断,所以仅D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖,例题3右图是某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：(1)该方案能达到预期效果吗？原因是什么？(2)图中为什么过程？(3)图中进行细胞培养，目的是什么?(4)图中