农药残留前处理技术

农药残留前处理技术,四川省农科院分析测试中心杨晓凤,农药的历史,1948年，HermannMuller因为发明了化学农药DDT而获得诺贝尔生理和医学奖,农药的定义,农药：主要是指用于预防、消灭或控制危害农业、林业的病、虫、草和其它有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成或者来源于生物、其它天然物质的一种物质或者几种物质的混合物及其制剂。,农药种类,用途：杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂、除草剂,化学结构：有机氯、有机磷、有机氮（氨基甲酸酯）、拟除虫菊酯等,农药残留分析技术之前处理,NY/T761-2008：1.试样制备：按GB/T8855抽取蔬菜、水果样品，取可食部分，经缩分后，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成待测样。放入分装容器中，于-20-16条件下保存，备用。,NY/T761-2008：2.准确称取25.0g试样，加入50.0mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g7g氯化钠100mL具塞量筒中，收集滤液40mL50mL，盖上盖子，剧烈震荡1min，在室温下静止30min，使乙腈相和水相分层。（备注：红色字体是关键控制点）（提取、分离、盐析）提取：乙腈（强极性，与水混溶、溶剂化、渗透能力强，目前欧盟、日本肯定列表等均采用乙腈作为提取剂）分离：过滤（可以用漏斗过滤，也可以抽滤）盐析：使乙腈相和水相分层盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。常用的中式盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。,农药残留分析技术之前处理,注意：样品称量,样品应充分粉碎，以保证称量时的平行。称量时应将匀浆样品充分搅匀，解冻后的样品也应充分搅匀。匀浆样品称量时应遵循多量少次的原则，即尽量减少称量次数以达到称量要求。称量时应尽量将样品放入容器底部，不要粘在容器的壁部，以保证检测结果的平行性。,加样避免污染瓶口称量25.00g，准确至0.02g记录编号，名称，重量,样品称量,样品的提取,注意：加量要准确，用移液管加入或定量加液器,此体积要参与计算,注意转速:1200015000r/min匀浆时间:min,通风橱中进行,样品的提取,匀浆机的清洗,样品匀浆完成后：1.清水冲洗2.丙酮水+3.清水冲洗4.再用滤纸檫干，接着处理另一样品,避免交叉污染,过滤过程应在通风橱中完成,样品过滤,样品过滤,在量筒中加入6g氯化钠。(氯化钠在140烘4小时)用少量水将滤纸湿润,用玻棒轻压，增加滤液体积滤液一般在60-70ml,盐析,盐析,1.放气，轻摇5-10次，开塞放气2.剧烈振荡1min3.静置30min，保证有机相与水相完全分离4.盐析作用，震荡后，要有氯化钠固体余存5.分层后，有机相体积约30-45ml,盐析过程中振荡频率和振幅应一致，保证样品的平行性。盐析过程中，要充分摇匀后再静置。如果摇匀过程中发生乳化现象，则长时间静置或者加少量蒸馏水，直到分层清晰。静止时间应足够，一般不应小于0.5小时。在静止过程中，应不时轻摇容器，使器壁上的水珠下落。,盐析,样品的移取,、用移液管准确移取10ml、同时移取三份样品，份测有机磷类农药，份测有机氯和拟除虫菊酯类农药用，1份液谱测定并分别编号、避免取到水层,农药残留分析技术之前处理,NY/T761-2008：3.第一部分：有机磷（气相色谱-FPD）：浓缩、定容：从具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，80氮吹，蒸发近干，用丙酮定容至5.0mL，装入自动进样瓶中，备用。（备注：红色字体是关键控制点）浓缩：10.00mL5.0mL定容：丙酮蒸至近干：可以氮吹（80），也可以旋转蒸发（40）,减压浓缩,减压浓缩注意事项,使用旋转蒸发器时，应注意水浴温度不宜过高，一般不超过40。在浓缩过程中，要注意不能蒸干，保留1mL左右为宜。使用旋转蒸发器时，应尽量选择冷却水循环系统，冷却水温度控制在5以下，以保证回收率。,常压氮吹浓缩,氮吹浓缩注意事项,加热温度不宜过高，一般控制在80以下。氮气流量不能过大，不能将样品吹干，在近干状态下取离水浴锅，自然晾干，若一定要干涸时，则操作必须细心，可以用橡皮球慢慢吹入干燥空气。若易氧化的样品，还必须使用氮气。否则会导致某些农药回收率偏低。,有机磷定容,旋涡时间1min;若有悬浮物，需过0.25m膜,农药残留分析技术之前处理,NY/T761-2008：3.第二部分：有机氯及拟除虫菊酯（气相色谱-ECD）：溶剂交换：从具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，80氮吹，蒸发近干，加入5.0mL正己烷溶解残渣，待净化。净化：将弗罗里矽柱依次用5mL丙酮+正己烷（10+90）、5mL正己烷预淋洗，条件化，当液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收，用5mL丙酮+正己烷（10+90）冲洗后淋洗弗罗里矽柱，并重复一次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上，50条件下氮吹至小于5mL，用正己烷定容至5.0mL，装入自动进样瓶中，备用。（备注：红色字体是关键控制点）固相萃取净化的步骤：活化及平衡（5mL丙酮+正己烷（10+90）、5mL正己烷预淋洗上样（即接收）洗脱（10mL丙酮+正己烷（10+90）浓缩、定容（5.0mL正己烷）,SPE固相萃取净化,有机磷（FPD），不用净化有机氯及拟除虫菊酯（ECD），采用SPE净化,原因：有机磷选用FPD检测器（S、P），对S、P有高度选择性，其他杂质（糖、脂肪酸、碳水化合物等）的响应小，杂质干扰小；有机氯及拟除虫菊酯类选用ECD检测器，对含有孤对电子的物质进行响应（S、P、O、N等均会有响应），灵敏度高，杂质的干扰大，净化可减少杂质影响。,SPE固相萃取净化,SPE固相萃取净化,用正己烷约2ml，溶解残渣后，涡旋,SPE固相萃取净化,预淋洗：正己烷丙酮（v/v,90:10)预淋洗5ml正己烷预淋，5ml预淋的滤液弃去，倒入废液瓶,上样及洗脱:上样，即接收用洗脱液正己烷丙酮（v/v,90:10),10ml（分2次）洗涤残渣后洗脱过滤速度控制1-2滴/s在过柱过程中，SPE柱不得干涸，保持有一定的溶液，最后一次完全抽干,SPE固相萃取净化,农药残留分析技术之前处理,NY/T761-2008：3.第三部分：氨基甲酸酯类（液相色谱-柱后衍生-FLD）：溶剂交换：从具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，80氮吹，蒸发近干，加入2mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解残渣，待净化。净化：将氨基柱用4mL甲醇+二氯甲烷（1+99）预淋洗，条件化，当液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收，用2mL甲醇+二氯甲烷（1+99）冲洗后淋洗氨基柱，并重复一次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上，50条件下氮吹至近干，用甲醇定容至2.5mL，装入自动进样瓶中，备用。（备注：红色字体是关键控制点）,农药残留分析技术之前处理,GB/T19648-2006（气相色谱-质谱法）:试样制备：同NY/T761提取：同NY/T761净化：石墨化碳复合氨基柱活化及平衡：用5mL乙腈+甲苯（3+1）预淋洗上样：准确吸取10.0mL乙腈提取液于SPE小柱上，用150mL离心瓶接收洗脱：用5mL乙腈+甲苯（3+1）冲洗后淋洗复合氨基柱，并重复4次。浓缩、定容：在40水浴中旋转蒸发至近干，用5.0mL丙酮+正己烷（10+90）溶解残渣，装入自动进样瓶中，备用。GB/T20769-2008（液相色谱-串联质谱法）,补充讲解,1.有机溶剂极性顺序强极性：乙腈、甲醇中等极性：丙酮、乙醚、二氯甲烷、氯仿（三氯甲烷）非极性：苯、甲苯、四氯化碳、环己烷、正己烷作用：可以使我们更好的理解相似相容原理（包括提取剂的选择、净化体系的选择、定容溶剂的选择等）。,补充讲解,2.加标回收率回收率是反映待测样品在样品分析过程中损失程度的指标，损失越少，回收率越高，它与真实成分和分析的准确度有密切的关系。加标回收率空白加标回收空白加标回收：在没有被测物质的空白样品基质中加入定量的标准物质，按样品的处理步骤分析，得到的结果与理论值的比值即为空白加标回收率。加标回收率的测定,是实验室内经常用以自控的一种质量控制技术。对于它的计算方法，给定了一个理论公式：,？,？,4.加标回收率加标量的计算（以NY/