动物细胞融合与单克隆抗体的制备课件

,？,再分化,一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性,二、诱导方法：离心振动电激、聚乙二醇,三、用途：获得杂种植株,脱分化,(一)概念,动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,（二）动物细胞融合的过程,与植物原生质体融合原理相同，方法类似。,杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。,一、动物细胞融合,.原理：,与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。,.诱导方式：,物理法：,电激、振动、离心,化学法：,聚乙二醇（PEG）,生物法：,灭活的病毒,例如：仙台病毒,仙台病毒,丧失感染性,（不感染细胞）,保留融合活性,（诱导细胞融合）,细胞A,细胞B,杂交细胞,灭活的病毒,物理法化学法,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）,(三)动物细胞融合的应用,1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。,2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。,鼠鸡、鼠兔、鼠猴、人鼠、人兔、人鸡、人蛙、酵母菌鸡、人胡萝卜等,3、重要用途：制备单克隆抗体。,二、单克隆抗体,（一）、什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,三、单克隆抗体,1、抗体是由何种细胞产生的？,浆细胞（效应B细胞）,2、抗体是如何产生的？,B淋巴细胞,抗原,增殖分化成浆细胞,3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体？,一种,（二）获得抗体的传统方法,1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。,2、缺点：产量低，纯度低，特异性差。,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。,1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念,用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？,不可能,2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？,癌细胞,3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？,细胞融合,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖,杂交细胞,动物细胞培养技术,（三）、实验原理：,动物细胞融合,单克隆抗体,既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体，,如何大量生产单克隆抗体？,利用B淋巴细胞产生抗体的功能。利用肿瘤细胞无限增殖的特性。利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。,应用：,动物细胞融合,设计方案：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,化学性质单一、特异性强,杂交细胞,单克隆抗体的制备,单克隆抗体的特点：,（四）、单克隆抗体的制备过程,3.过程：,免疫动物,灭活的仙台病毒,？种,BB、B瘤、瘤瘤、,杂交细胞,免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备,细胞融合,杂交瘤细胞的选择培养,杂交瘤细胞的筛选,分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立,单克隆抗体的大量制备,？,？,抗原,效应B细胞,筛选,筛选,过程：,抗原,小鼠,效应B细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,细胞融合筛选,细胞培养筛选,能产生特定抗体的细胞群,体外培养体内培养,提取出单克隆抗体,考考你！,1.在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？,浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生单一抗体。,考考你！,2、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？,两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,五、单克隆抗体的应用,、可用于作为诊断试剂：有准确，高效，简易、快速的优点、可用于疾病治疗、可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹“。）“生物导弹”单克隆抗体药物,植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较,三.细胞工程比较,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后,诱导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜流动性细胞增殖,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,克服远缘杂交不亲和性的障碍,1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是（）A、融合的原理B、融合的优点C、融合的诱导手段D、融合的过程,2、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A、克服远缘杂交不亲和B、制备单克隆抗体C、培育新物种D、生产杂种细胞,3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A、经过免疫的B淋巴细胞B、不经过免疫的T淋巴细胞C、经过免疫的T淋巴细胞D、不经过免疫的B淋巴细胞,4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞ABCD,5、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C抗癌物质在克隆细胞中大量合成D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合,6只能使动物细胞融合的常用诱导方法（）APEGB灭活的病毒C电刺激D离心7、“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单抗上连接抗癌药物,8、下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，不正确的是（）AB淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体C体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖D单克隆抗体与常