移植免疫及其免疫检测

移植免疫及其免疫检验,P380,移 植 免 疫,1954年12月23日，世界上第一例成功器官移植手术在美国波士顿进行1960年，吴阶平教授开展了国内首例肾移植。,后排左起为约瑟夫E默里、约翰梅瑞尔和哈特维尔哈里森医师前排为接受手术的孪生兄弟,机体接受其他个体的细胞，组织或器官后，机体与移植物相互作用所产生的免疫应答。,宿主抗移植物反应（host versus graft rejection，HVGR）移植物抗宿主反应（graft versus host rejection，GVHR）,供者(donor),移植物(graft),移植免疫：,按供受者之间的关系：自体移植同系移植同种异基因移植异种移植按移植物的来源：尸体供移植活体供移植,移植的分类：,（一）主要组织相容性抗原组织相容性： 组织器官移植时，供受者相互接受的程度。组织相容性抗原/移植抗原： 存在于组织细胞表面的决定组织相容性的同种异型表位。,第一节 引起排斥反应的靶抗原,主要组织相容性复合体（major histocompatibility comlex，MHC） 指编码主要组织相容性抗原的一组紧密连锁的基因群。不仅在控制移植排斥反应中起重要作用，而且在免疫应答和免疫调节中起重要作用。,HLA复合体与HLA分子/系统,HLA复合体1.定位：2.结构：HLA类基因区HLA类基因区HLA类基因区,HLA分子触发移植排斥的抗原：类分子尤以HLADR最重要,其次B、A、DQ、DP,（二）次要组织相容性抗原（mHA）（三）其他组织相容性抗原1.ABO抗原系统：* 供者与受者ABO血型不配合 受者血清抗体与移植物血管内皮细胞表面的ABO抗原结合 血管内皮细胞损伤和血管内凝血2.组织特异性抗原： 移植排斥强度：皮肤肾肝脏,第二节移植排斥反应的种类及发生机制,一、宿主抗移植物反应（HVGR）,（一）超急性排斥反应 移植物血液循环恢复后数分钟至12天内发生的不可逆的体液排斥反应。 原因：受者体内预存抗供者的Ab：供、受者间ABO等血型不符；受者血液中含有抗供者白细胞，血小板的Ab；非免疫因素：如灌流冲洗不彻底等。,（二）急性排斥反应最常见 移植后1周3个月内发生的排斥,（一）直接识别(direct recognition)：受者T细胞TCR特异性识别供者APC表面的同种异型MHC抗原。,T细胞MHC抗原 受者 供者,（2）间接识别(indirect recognition)：,供者MHC抗原被受者APC进行加工、处理，以抗原肽：MHC II类分子复合物的形式提呈给受者T细胞，使之活化，引起排斥反应。,机制：等同于普通外源性AgCD4T*特点：出现较晚，强度弱,（三）慢性排斥反应 发生于移植后数月、甚至数年，是影响移植器官长期存活的主要障碍。,二、移植物抗宿主反应 (GVHR) 移植物中淋巴细胞，识别受者的同种异型抗原，诱发针对受者的排斥反应。发生条件： 移植物中含一定数量成熟的淋巴细胞(T细胞)； 供、受者间组织相容性差; 宿主的免疫功能状态低下。常见于：骨髓、胸腺、脾等移植或大量输血后机制：供者CD4+T细胞识别宿主MHC抗原临表：炎症性疾病，皮疹、腹泻、肺炎等。,Graft versus host disease,一、血清学分型法（Serological Typing）HLA-A、B、C、DR、DQ抗原可用血清学方法鉴定，故称为SD抗原（Serological defined antigen ）方法：Terasaki等改良的微量补体依赖的细胞毒试验（CDC test）该方法简便易行、结果可靠、重复性好，被美国国立卫生研究院（NIH）认可,成为国际通用的标准技术,第三节 HLA的分型,原理：用一系列已知抗HLA的标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解，死亡的细胞可被染料着色。,待测淋巴细胞,标准抗血清,补体,二、细胞分型法（Cellular Typing） HLA-类抗原中的D、DP抗原过去采用细胞分型法检测，故又称LD抗原（lymphocyte defined antigen） 以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC）为基本技术的HLA分型法。,-判断待检细胞的HLA型别/LC反应强度的指标,-异体器官移植前的HLA配型,三、分子生物学分型法 P388,基本原则： 供者与受者间HLA尽可能相符，以降低移植物组织抗原的免疫原性 非特异性抑制受者的免疫应答 诱导受者对移植物的特异性免疫耐受,第四节 排斥反应预防与治疗,（一）选择合适的供者多数情况下只检测HLA-A、B、DR不同的器官移植对HLA配型的要求有所不同 骨髓等对HLA配型要求很高 肾、心脏、胰腺等，HLADR配型重要 肝、肺/心移植主要要求ABO血型配合，不作HLA配型对移植后果无明显影响。1.HLA配型 常用方法是CDC test、MLC,2.HLA交叉配型与检测预存抗体（1）淋巴细胞交叉配合试验 无论抗体是针对类还是类HLA，只要细胞毒性超过10%，则表明受者体内已有细胞毒性抗体，应另选供者；若小于10%则为阴性，表明供受者匹配。（2）T细胞淋巴细胞毒性交叉配型 无论反应水平高低，均为移植的禁忌症（3）B细胞淋巴细胞毒性交叉配型（4）自身交叉配型,（肾常规项目）,受者血清供者细胞,（二）移植物与受体的预处理1.对移植物进行预处理 移植术前应充分清除移植物中的过客白细胞，以减轻排斥反应2.受体的准备 移植前应用一定的免疫抑制剂可有效的提高器官移植的成功率。,（三）免疫抑制措施1.免疫抑制剂的应用抑制代谢药物和激素：常用的是硫唑嘌呤和环磷酰胺。抑制T细胞活化的药物 ：环孢菌素A(CsA) 抗体及其他生物制剂 ：针对免疫细胞表面抗原的单克隆抗体可用于抑制相应免疫细胞活化及功能2.免疫耐受的诱导,（一）体液免疫水平检测相关的免疫指标主要有ABO血型抗体、其他血型抗体、HLA抗体、抗供者组织细胞抗体、血管内皮细胞抗体等。常用各种交叉配型、CDC试验等进行检测。,第四节 排斥反应的免疫检测,（二）细胞免疫水平检测包括参与细胞免疫的有关细胞数量、功能和细胞因子水平的检测1.外周血T细胞及其亚类的计数2.4hT细胞转化试验 取受者PBMC加入标记物直接培养4小时掺入法测其转化率，以预报急性排斥反应危象3.NK细胞活性测定4.血清细胞因子的测定,（三）补体水平的检测 补体的数量及活性与急性移植排斥反应的发生有密切关系（四）急性时相反应物质的检测 C反应蛋白（CRP）、IL-