功效成分及卫生指标检验规范.doc

功效成分及卫生指标检验规范1 主题内容和适用范围1.1 本规范规定了保健食品和原料的卫生要求、功效成分和卫生指标的检验项目和方法。1.2 本规范适用于保健食品的检验受理、项目的确定和方法的选择。2 基本要求2.1 凡保健食品，必须符合保健食品通用卫生要求，该要求所列的各项目必须按规定执行。附表1所列检测项目是对保健食品通用卫生要求补充规定。2.2 保健食品中使用的添加剂必须符合GB2760食品添加剂使用卫生标准规定的品种名单。检测机构根据产品配方检测合成色素、防腐剂、甜味剂及抗氧化剂的含量。2.3 凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用的有机溶剂要符合GB2760附录D食品工业用加工助剂推荐名单要求。2.4 保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征成分。附表2所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。2.5 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定的项目。2.6 功效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根据其产品适用的方法学范围选择国家标准、卫生部部颁标准、行业标准以及国际上权威分析方法进行测定。2.7 在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称（具有）的功效成分或特征成分的检测方法及检测所需的标准品对照品及特殊试剂均由申报单位提供，并说明其产品中功效成分或特征成分分析方法的来源。如属自主开发研究的分析方法，需提供方法学研究的相关资料，同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品功效成分检测协作组（中国疾病预防控制中心营养与食品安全所）备案，必要时卫生部将组织方法学验证，其费用由申报单位承担。2.8 检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、工艺及企业标准等相关资料。2.9 卫生部对保健食品的功效成分的检测机构进行认定，检测机构的名单由卫生部门公布。保健食品的功效成分检测工作应在卫生部认定的检测机构进行。违禁成分的检测由卫生部指定的检验机构进行检测。附表1：下列类型的产品、或下列原料为主的产品指标检测项目表产品类型检测项目1固体水分、灰分2口服液可溶性固形物、3海产品镉4鱼油类酸价、过氧化值（降血脂类产品需检测胆固醇）5茶叶有机氯农药残留（六六六、滴滴涕）6红曲黄曲霉毒素1、桔青霉素7中药材汞、六六六、滴滴涕8苹果、山楂 展青霉毒素9 片剂和胶囊崩解时限10抗疲劳、减肥和改善生长发育的产品违禁药物附表2：功效成分和特征成分检测项目表1营养素补充剂产品中标识的营养素(包括维生素和矿物质) 2五加科参类皂甙3蕈类（灵芝、蘑菇等）膳食纤维4冬虫夏草菌丝体腺苷5红景天类红景天甙6芦荟类芦荟甙7大蒜类大蒜素8螺旋藻类蛋白质、胡萝卜素、维生素B1、维生素B29茶叶类茶多酚10魔芋类膳食纤维11纤维素类膳食纤维12磷脂类丙酮不溶物、乙醚不溶物（原料）13红曲类洛伐它丁14植物油类脂肪酸、维生素E15动物油类脂肪酸16初乳类免疫球蛋白17鹿血类蛋白质、氨基酸18蚂蚁类锰、蛋白质19蚯蚓类蚓激酶（溶纤酶）、蛋白质20蛇、蝎等蛋白质、氨基酸21角鲨烯角鲨烯22蜂皇浆10-羟基癸烯酸23蜂花粉、蜂胶总黄酮24甲壳质产品脱乙酰度，产品如为复方应检测原料的脱乙酰度25蛋白质、氨基酸制品蛋白质、氨基酸26褪黑素产品褪黑素 产品原料（褪黑素）需提供原料纯度证明并检测3 保健食品中功效成分的检验方法见附件1附件1目 录1. 保健食品中红景天甙的测定2. 保健食品中大蒜素的测定3. 保健食品中芦荟甙的测定4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA）的测定5. 保健食品中吡啶甲酸铬的测定6. 保健食品中盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定7. 保健食品中肌醇的测定8. 保健食品中肉碱的测定9. 保健食品中亚麻酸、亚麻酸的测定10. 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定11. 保健食品中水溶性粗多糖的测定12. 保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定13. 保健食品中原花青素的测定14. 保健食品中核苷酸的测定15. 保健食品中洛伐他丁的测定16. 保健食品中中药功效成分的鉴别方法17. 保健食品中银杏叶总黄酮的高效液相色谱测定18. 保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定19. 保健食品中金雀异黄素的测定20. 保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定21. 五味子类保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定22. 保健食品中腺苷的测定23. 保健食品中褪黑素的测定附：保健食品功效成分检验方法协作组提供的检验方法1. 保健食品中人参总皂甙的测定2. 保健食品中总黄酮的测定3. 壳聚糖的游离氨基测定及脱乙酰度的计算4. 蚓激酶活性的测定5. 乙醚不溶物、丙酮不溶物的测定6. 角鲨烯的测定1.保健食品中红景天甙的测定Determination of salidroside in health food 第一法 高效液相色谱法1 范围本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。本方法适用于以红景天为主要原料的保健食品中红景天甙的测定。本方法的检出限：0.02g。本方法的线性范围：0.010.50g/mL。2 原理将混匀的试样使用甲醇进行提取，根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检测。3 试剂 除非另有说明，在分析中仅使用双蒸水。3.1 乙酸钠 分析纯。3.2 甲醇 优级纯。3.3 石油醚 分析纯。3.4 红景天甙标准溶液 准确称量红景天甙标准品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每mL含2.0mg红景天甙。 4 仪器4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理5.1.1 液体试样：准确量取摇匀后的液体试样20mL于50mL容量瓶中，先加入25mL甲醇，超声10min后用甲醇定容至刻度，混匀，经0.45mm滤膜过滤后供液相色谱分析用。5.1.2 固体试样：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀，准确称取适量试样（精确至0.001g）于50mL容量瓶中，加入甲醇, 超声提取10min。取出后加入甲醇定容至刻度，混匀后以3000rpm/min离心3min。经0.45mm滤膜过滤后供液相色谱分析用。5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6250mm,5m。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 215nm。 5.2.4 流动相：甲醇:0.02mol/L乙酸钠溶液9:91。5.2.5 流速：1.0mL/min。5.2.6 进样量：10mL。5.2.7色谱分析：取10L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50g/mL红景天甙标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。5.4 分析结果的表示5.4.1 计算 h1 C V X = h2m1000式中： X 试样中红景天甙的含量，mg/g； h1 试样峰高或峰面积； C 标准溶液浓度，g/mL； V 试样定容体积，mL； h2 标准溶液峰高或峰面积；m 试样质量，g。 计算结果保留三位有效数字。6 技术参数准确度 方法的回收率在91.798.6之间。允许差 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法 极谱法1 范围 本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。本方法适用于以红景天甙为主要功效成分的保健食品中红景天甙的含量测定。本方法的最低检出量为0.05g。若取1.00mL液体类试样，其最低检出浓度为0.05mg/L；若取0.25g固体类试样、则最低检出浓度为0.2mg/kg。本方法的最佳线性范围为0.1g/mL1.0g/mL。2 原理保健食品中红景天甙用甲醇提取，D101型大孔吸附树脂净化处理，经亚硝基化后，其衍生物在硼砂溶液中具有电活性，在滴汞电极上还原产生极谱波。用峰电位定性，以试样与标准的峰电流（Ip）比较定量。3 试剂除注明外，试剂为分析纯，实验用水为重蒸馏水。3.1 甲醇。3.2 D101型大孔吸附树脂。3.3 饱和硼砂溶液。3.4 0.2%盐酸溶液。3.5 2mol/L亚硝酸钠溶液。3.6 1.0mg/mL红景天甙标准贮备溶液：准确称取0.1000g红景天甙对照品（中国药品生物制品检定所）于烧杯中，加水溶解并定容至100mL容量瓶。此溶液每毫升含红景天甙1.0mg，冰箱保存。3.7 10.0g/mL红景天甙标准使用溶液：准确吸取红景天标准贮备溶液1.00mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液每毫升含红景天甙10.0g。4 仪器与设备4.1 极谱分析仪。4.2 超声波清洗机。4.3 10mm150mm玻璃层析柱。5 分析步骤5.1 试样的制备及予处理5.1.1 液体类试样（如保健酒、口服液、饮料等）准确吸取摇匀的试样液1.00mL于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀，供测定用。5.1.2 一般固体类试样（如保健茶、蜜片、胶囊等）准确称取经粉碎并过20目筛的试样0.25g，置50mL三角瓶中，加入10mL甲醇，于超声波清洗机超声提取10min、过滤，滤液收集于50mL容量瓶中。再加入10mL甲醇于三角瓶中，重复超声提取一次，合并滤液于上述容量瓶中，用水稀释至刻度，供测定用。5.1.3 个别组分复杂的固体类试样个别组分复杂的固体类试样需经柱层析净化处理。层析柱制备。取适量D101型非极性大孔吸附树脂于烧杯中，加水洗涤数次，缓缓倾入10mm 150mm玻璃层析柱内，湿法装柱、树脂约高50mm，10mL甲醇注入层析柱上端进行淋洗，弃淋洗液。净化。按5.1.2节处理、提取试样，准确吸取10.0mL提取试液，缓缓注入层析柱上端，用玻璃蒸发皿收集流出液。再吸取10mL甲醇分两次注入层析柱进行淋洗、合并流出液于蒸发皿中，置70恒温水浴挥干，用水溶解移入10mL容量瓶中，水稀释至刻度，供测定用。5.2 极谱分析参考条件单扫描极谱法（SSP法）。选择起始电位为 400mV，终止电位 900mV，扫描速度250mV/S，三电极，二次导数，静置时间5s及适当量程。于峰电位（Ep） 600mV（vs.SCE）处，记录红景天甙的峰电流（Ip）nA。5.3 标准曲线的绘制准确吸取10.0g/mL红景天甙标准使用溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL于7支10mL比色管中（相当于含0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0g红景天甙）。各管加入2.0mL 2mol/L亚硝酸钠溶液及1.0mL 0.2%盐酸溶液置沸水浴10min，取出冷却至室温后各管再加入1.0mL饱和硼砂溶液，加水稀释至刻度，摇匀。将各管溶液依次移入电解池，置三电极系统。按上述极谱分析参考条件（5.2）下测定，记录各管红景天甙的峰电流（Ip）。以红景天甙含量为横座标，其对应的峰电流为纵座标，绘制标准曲线。5.4 试样测定5.4.1 标准曲线法准确吸取上述待测液0.1mL0.5mL于10mL比色管中，（视其含量高、低而定）加入2mL 2.0mol/L亚硝酸钠溶液，以下操作同5.3节标准曲线绘制项下测定试液中红景天甙的峰电流（Ip）。5.4.2 标准加入法分别吸取上述待测液0.10.5mL于2支10mL比色管中（视其含量高、低而定）。其中一管加入所吸取待测液中红景天甙含量大致相当的红景天甙标准使用溶液（可先予测一次），各管再加入2mLL2.0mol/L亚硝液钠溶液，以下操作步骤同5.3节标准曲线绘制项下。测定两管溶液中红景天甙的峰电流（Ip）。6 结果6.1 计算6.1.1 标准曲线法X= AmV11000（1）V式中：X试样中红景天甙含量，mg/g（或mg/mL）； A从标准曲线上查得的含量，g； V试样的定容体积，mL； V1测定用试样溶液体积，mL； m试样的质量（或体积），g（或mL）。6.1.2 标准加入法X= Bh1（h2h1）V11000（2）V 式中：B加入红景天甙标准含量，g； h1未加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA； h2加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA； X，m，V1，V与（1）式中表述含义相同。6.1.3 结果表示：计算结果保留3位有效数字。6.2 技术参数准确度：本方法的平均添加回收率为92.5%。精密度：相对标准偏差（RSD）99.0%3.5 -亚麻酸甲酯 99.0%3.6 标准储备液 称0.0250g的-亚麻酸甲酯及0.0250mg的-亚麻酸甲酯标准品，分别用正己烷溶解，并定容于25mL容量瓶中，混均，浓度分别为1.0mg/mL。3.7 标准使用液 分别取-亚麻酸甲酯及-亚麻酸甲酯标准储备液各5.0mL置于10mL的容量瓶中，混均，-亚麻酸甲酯和-亚麻酸甲酯的含量为0.5mg/mL。4. 仪器与设备4.1 气相色谱仪，附氢火焰（FID）检测器。4.2 数据处理机，或积分仪。4.3 分析天平：1/10000。4.4 分析天平：1/1000。4.5 加热式磁力搅拌器。4.6 标准磨口烧瓶(50mL)和直形冷凝管。5. 分析步骤5.1 试样制备 5.1.1 脂肪的提取 按GB/T 5009.6中规定的方法提取。5.1.2 皂化称取0.100g油脂（或脂肪）和磁力搅拌子一并放入50mL磨口烧瓶中（见图1），加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，由冷凝管上口向溶液中导入氮气；使反应瓶中始终充满氮气。开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持655，搅拌回流约15min。5.1.3 甲脂化从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，搅拌(655)，回流约2min，冷至室温，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续搅拌5min，移去冷凝管，加入5mL饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟，转移至25mL分液漏斗中分离水与有机相，再加3mL正己烷洗水相，分离，弃水相，合并有机相并定容至10mL(浓度低时吹氮浓缩至1.0mL)。供测定用。5.2 气相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：FFAP（改性聚乙二醇20M，30m0.25mm i.d. 0.25m）。5.2.2 柱箱温度：215。5.2.3 进样口温度：250 。5.2.4 检测器温度：260。5.2.5 氮气：50mL/min，301分流；氢气：45mL/min；空