麻疹监测-样本采集与检测

麻疹监测-样本采集与检测,敬永计,各级CDC职责,省级疾病预防控制中心为全省麻疹监测工作提供技术指导；建立和完善本省的麻疹监测网络；指导和参与麻疹暴发疫情调查；对本省监测数据进行收集、整理、定期分析和反馈；进行麻疹病毒分离；对本省麻疹实验室网络进行考核；对本省疾病预防控制中心专业技术人员进行培训；对本省麻疹监测系统进行管理和质量控制；组织开展本省麻疹免疫水平、疫苗效价和免疫成功率监测工作，并按相应要求上报监测结果；对本省麻疹监测系统运转状况进行督导、评价。市级疾病预防控制中心为全市麻疹监测工作提供技术指导；对本市监测数据进行收集、整理、定期分析和反馈；开展麻疹疑似病例血清学检测和结果反馈；指导和参与麻疹暴发疫情调查；对本市各级专业技术人员进行培训；对本市麻疹监测系统运转状况进行督导、评价。,各级CDC职责,县级疾病预防控制中心负责具体实施麻疹监测工作；开展麻疹疑似病例的流行病学调查和信息录入；负责麻疹疑似病例标本的收集、采集、运送和有条件实验室的血清学检测；定期对辖区内医疗单位开展麻疹疑似病例主动监测；对本辖区监测数据进行收集、整理、定期分析和反馈；对本辖区专业技术人员进行培训；开展辖区内麻疹暴发疫情的调查与处理。医疗单位负责麻疹病例的报告和就诊病例的标本采集工作，协助各级疾病预防控制中心完成流行病学调查和标本运送工作；对本单位医护人员进行培训；严格按照有关要求对病人进行隔离和医疗救治，避免医院感染的发生。,监测目的,及时发现麻疹病例，采取针对性措施，预防和控制疫情。了解麻疹流行病学特征，分析人群免疫状况，确定易感人群，加强预测预警。了解麻疹病毒学特征，追踪病毒来源、传播轨迹。评价预防控制效果，为适时调整消除麻疹策略措施提供依据。,合格血标本问题,2003版方案中规定：出疹后3天内采集的血标本定义为不合格血合格血检测结果作为病例分类的依据3天内采血检测麻疹阳性却是不合格血不利于提高血标本采集率不适合作为直接考核指标新方案修改计划病例分类定义中直接写明采血时间合格血标本定义仅限于标本状态对于3天内鼓励采血，阴性血可于出疹后4-28天再采第二份血标本,标本的采集与运送,医疗单位负责就诊病例血标本采集填写标本送检表，通知CDC县CDC负责组织未就诊病例血标本采集流行病学调查、疫情处理、主动搜索发现采集的血标本应在24小时内送至县CDC县CDC收到标本后，48小时内送达本地麻疹血清学实验室血清和标本送检表发现暴发疫情时，血标本要快速送检。并采集出疹早期病原学标本送省CDC进行病毒分离,标本的采集与运送,合格血标本的基本要求出疹后28天内采集，血清量不少于0.5ml，无溶血，无污染；28条件下保存、运送。出疹后3天内血标本麻疹IgM阴性或可疑病例出疹后428天采集第2份血标本。,(一)血标本,1.采集出疹后28天内病例静脉血23ml,加入到无菌试管中,标明采集日期和病例姓名、编号。2.有条件地区可用1500rmp/分钟离心机分离血清。如果没有离心机，在室温下凝固分离血清，或冷藏条件下放置，直到血清完全析出。3.在无菌条件下，将血清移至外螺旋盖带垫圈的无菌管中，避免吸到红血球。4.血清标本运送前应在28保存,如果7天内不能运送的,应置-20以下保存,避免反复冻融.全血标本不能冻结。,(一)血标本,5.填写完整的标本送检表，送检表上要注明病历编号。6.对出疹3天内麻疹IGM抗体阴性者,可于出疹后4-28天再采集第2份血标本。,（二）病原学标本,采集病原学标本的要求是在暴发疫情早期，至少采集2例（10例病例的暴发）或5例（10例病例的暴发）新发病例的病原学标本。1.鼻咽拭子标本。（1）采集出疹前5天至出疹后5天内的鼻咽拭子标本。 （2）使用的棉拭子和试管等应灭菌。 （3）用无菌棉拭子适度用力在鼻咽部和咽喉部擦拭，获得上皮细胞。,（二）病原学标本,（4）把拭子放入有外螺旋盖并装有2ml病毒运输液的冻存管中。（5）病毒运输液有商业成品可用。常用的病毒运输液包括： pH7.47.6的Hank,s液：在90ml蒸馏水中加入10ml Hank,s,然后加入10ml牛血清和0.2ml0.4%酚红溶液，过滤消毒。加1ml青/链霉素溶液。分装到无菌管中，于4储存备用。 组织培养液：DMEM液加入青/链霉素使其终末浓度分别卫5001000IU/ml和5001000ug/ml,加入胎牛血清使其终末浓度为2%，加入谷氨酰胺至浓度为1%；加入7.5%的NaHCO3调节pH至7.47.6。,（二）病原学标本,2.尿标本（1）采集出疹前5天至出疹后5天内的尿标本1050ml。尿液应收集在灭菌容器中。28保存。 （2）尿中的脱落上皮细胞含有麻疹病毒，通常应在24小时内离心。4，转速500g（约1500rpm),离心5分钟。 （3）弃上清，并用33ml病毒运输液悬浮沉淀，置于有外螺旋盖的冻存管中。（4）在离心悬浮沉淀前不要冷冻尿液。,二、标本运送,（一）血标本1.标本采集后应在48小时内送到实验室，严防标本污染或容器渗漏。标本标签应清晰、防水。2.标本运送时附带标本送检表，送检表上要注明病例编号。安排运送日期并通知实验室，说明标本送达时间。（二）病原学标本1.鼻咽拭子、尿液等病原学标本采集后应立即置28保存。尿液离心后重悬的沉淀可在28保存。,（二）病原学标本,2.病原学标本应尽快送达省级麻疹实验室。48小时内能送达的，可在28保存，否则-70 保存。无-70 保存条件者，可在-20 保存，但要在1周内送达。在-70 条件下保存的标本，1个月内送达省级麻疹实验室。3.标本应在28运输，严防标本污染或容器渗漏。4.标本保存和运送过程中应避免日光照射。5.其他送检要求与血清标本相同。,实验室监测,全国麻疹实验室网络：由国家、省、市三级CDC麻疹实验室组成国家级：麻疹病毒基因定型省级：病毒分离市级：血清学检测任务有条件的县级CDC或医疗单位，经省级CDC认可，可承担麻疹血清学检测工作。,血清学检测,承担血清学检测任务的麻疹实验室收到血清标本后3天内完成麻疹IgM检测，麻疹IgM阴性标本，应进行风疹IgM检测血清IgM抗体检测统一应用ELISA方法检测结果的报告及反馈本方案第四部分“资料管理与信息交流”。,病原学检测,省级麻疹实验室负责麻疹病毒分离工作接到标本的28天内完成病毒分离分离到的毒株28天内送国家实验室基因定型国家麻疹实验室在收到毒株标本14天内完成基因定型，并将结果反馈给送检单位。,实验室生物安全,按照卫生部人间传染的病原微生物名录，麻疹病毒的危害程度分类为第三类病毒培养和未经培养的感染性材料的操作应在BSL-2级实验室进行。灭活材料和无感染性材料的操作可在BSL-1级实验室进行。麻疹病毒相关标本的运输属于B类包装，航空运输UN编号为UN3373。,实验室质量控制,国家负责对省级进行质量控制和检测试剂的质量评估。每年向省级发放麻疹IgM和风疹IgM组合血清，进行盲样考核每年要求省级送检麻疹IgM阳性和阴性血清标本、风疹IgM阳性血清标本进行再证实。每年用WHO认可的组合血清对麻疹、风疹试剂进行质量评估，并将评估结果向省级反馈，供各级参考。省级负责对市级进行质量控制。每年向市级疾病预防控制中心实验室发放组合血清，盲样考核。每年要求市级送检麻疹IgM阳性和阴性血清标本、风疹IgM阳性血清标本进行再证实。省级接受国家的现场认证或信函认证。市级接受省级的认证。承担检测任务的县级和医疗单位麻疹实验室考核方法与市级相同,职能考核（PT）：考核实验室的检测能力。血清复核：评价实验室日常检测的准确性。年度现场认证：评估实验室综合能力，包括仪器设备等硬件和记录、报告等软件。技术培训：技术标准化以减少误差。实验室内部质控（IHC）的应用：监测不同时间试验、不同实验室之间的差异，发现偏差，确保检测结果的准确性。,标本采集的时间,随机误差，是一种偶然的、未能预料到的误差，是难以避免和校正的误差。检验工作中随机误差的分布符合正态分布规律。重复能减少随机误差的影响。随机误差来自：如移液器加样误差；孵育时间改变等人为因素。培训、上级复核和严格遵守操作规程能加少随机误差。,系统误差，系统误差是指一系列测定结果与真值或靶值存在有同一倾向的误差，有明显的规律性，可在一定条件下重复出现。重复不能较少系统误差的影响，但可以通过校正还纠正误差。系统误差来自：孵育水浴锅温度失调；移液器不准；洗板机堵塞等原因。仪器校准、质控能减少和监测系统误差的产生。,实验室内部质控血清(IHC),什么是IHC？在每次试验时都要加入一个实验室自制的IHC。通过对IHC检测结果的监测，来确保不同时间、不同地点的相同检测结果的正确性。为什么不用试剂本身的对照？不能监测标本处理过程。试剂对照本身的局限性，不能用于不同试剂。有些试剂对照不是真血清。,IHC的制备和保存,收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清，56加热30min灭活。用阴性血清将收集的阳性血清进行一系列稀释。检测稀释标本并绘制标准曲线。选择Cutoff值1.5至3倍OD值所对应的稀释度，制作IHC。用0.45um滤器过滤除去细菌、杂质等干扰物质。一次准备12个月使用量，分装到血清管，每管30ul，于-20保存备用。,IHC“失控”的该次检测结果无效，要对该次试验所有的标本进行重新检测。常规质控图的优点：简单易行，便于基层使用。只需一个质控。常规质控图的缺点：需要进行20次IHC的检测，才能做质控图。只有一个质控，规则简单。,省级麻疹实验室统一制作IHC，分发给各地市、县级实验室使用，可在很短的时间内获得20次的IHC检测结果，制作常规质控图。使各地市级实验室疑似麻疹病例的检测结果具有可比性。便