血细胞分析在临床中的应用

,血细胞分析在临床中 的应用,血细胞分析的发展,近年来,随着科学技术的飞速发展及计算机在血液分析仪中的广泛应用,各种先进的血液分析仪逐渐普及.,1953年，第一台血细胞计数仪问世，标志着这一项目抛弃了作坊式手段；,1913 - 1998,Model A,High speed automatic blood cell count and cell size analyzer,原理,血液分析仪主要是利用阻抗原理进行细胞计数的. 不同体积的血细胞,因其电 阻大小不同,而产生相应大小的脉冲,分别进入到仪器设置的不同通道,CBC(全血细胞计数)+DIFF(WBC分类)模式下WBC计数分类,WBC/DIFF通道对WBC计数和分类时,使用的两个信号:细胞经半导体激光激发产生侧向荧光强度侧向散射光强度信号,使用的两种试剂:溶血素(4DL):将RBC完全溶解,同时在WBC膜表面打孔荧光染料(4DS,聚次甲基荧光染料)通过 小孔进入WBC内,对胞浆和胞核中的核酸物质进行染色,测定,经过核酸荧光染色后的WBC在633nm激光的照射下,产生侧向荧光信号和侧向散射光信号。侧向荧光强度与WBC的核酸(DNA/RNA)含量成正比,侧向散射光强度反映了细胞内容物的复杂程度(核的分叶,胞浆颗粒的大小,数量,分布均匀程度)。,1,2,3,4,5,9,鞘流技术激光计数原理示意图,1 流通池2 梭头3 样本头4 鞘流头5 透镜6 吸收光7 低角度散射光检测8 高角度散射光检测9 光源,Side Scatter (Internal structure),淋巴细胞,单核细胞,嗜中性细胞,嗜酸细胞,Fluorescence (RNA ,DNA),RBC ghost,嗜碱细胞,RBC和PLT检测原理,全血标本稀释后分配到RBC/PLT计数池,鞘流技术产生的层流使这个电阻信号转化为脉冲信号记录下来,脉冲的高度反映了细胞的大小,每个脉冲信号代表一个细胞,收集信号得到RBC和PLT的直方图。,SLS血红蛋白检测方法,检测使用的主要成份为十二烷基磺酸钠表面活性剂先将RBC溶解，释放出Hb分子Hb分子中的Fe2+被氧化为Fe3+，与SLS结合形成SLS-Hb有色基团，在535nm有最大吸收峰。,SLS血红蛋白检测方法特点,不含氰化物，无毒具有环保性SLS是一种脂溶性试剂，可减少脂血和高WBC总数造成的浊度对血红蛋白检测的影响,数据异常信息,中性粒细胞增多,感染（急性细菌感染）组织损伤（心肌梗塞 .手术）恶性血液病药物使用(肾上腺素.类固醇)生理性增高,淋巴细胞增多,恶性血液病感染(百日咳.传单.病毒性风疹)应激状态(急性心衰.心脏梗塞.过敏反应)自身免疫性疾病.肿瘤.吸烟,单核细胞增多,感染(细胞性.败血症)胶原病妊娠性WBC增多霍奇金氏病恶性肿瘤,嗜酸性细胞增多,过敏反应(药物.寻麻疹)寄生虫病皮肤病纤维瘤内分泌病感染(结核病),中性粒细胞减少,严重的细菌感染白血病.肿瘤骨髓转移药物血液恶液质过敏性休克.酒精中毒,淋巴细胞减少,流行性感冒.败血病药物(抗肿瘤药物.肾上腺皮质激素)肿瘤晚期.霍奇金氏病胶原性疾病(系统性红斑狼疮.类风湿性关节炎),干扰因素造成假性增高(降低),WBC假性增高,PLT聚集冷凝集有核红细胞难溶红细胞冷球蛋白,PLT假性增高,红细胞碎片小红细胞冷白蛋白,PLT假性降低,血小板聚集巨大血小板,RBC假性增高,白细胞增多巨大血小板,RBC假性降低,红细胞碎片冷凝集小红细胞,急性粒细胞白血病,Auer小体,出现原始粒细胞,DIFF散点图显示:淋巴细胞.单核细胞和原始细胞区域出现大量散点且连成一片,大部分原始细胞由于异常增殖含有过多的DNA/RNA,出现异常淋巴细胞,散点图显示:有大量的异常淋巴细胞,荧光强度较弱而侧向 散射光强度稍强,RBC双峰分布,表示出现大小不同的两群红细胞,缺铁性贫血诊断与铁剂治疗后直方图动态变化-疗效观察,铁剂治疗2周后,铁剂治疗4周后,特发性PLT减少性紫癫(ITP),PLT直方图分布上,在40fl附近出现一个高峰,提示有大型PLT,因此反映细胞大小的直方图无法将PLT准确检测出来,许多大的PLT被计数成RBC,需要镜检的情况,、国际血液学复检专家组推荐的41条自动CBC和DC复检规则： 1.新生儿：（1）复检条件：首次检测标本；（2）复检要求：涂片镜检。 2.WBC、RBC、Hb、PLT、网织红细胞（Ret）：（1）复检条件：超出线性范围；（2）复检要求：稀释标本后重新测定。 3.WBC、PLT：（1）复检条件：低于实验室确认的仪器线性范围；（2）复检要求：按实验室标准操作规程（SOP）进行。,4.WBC、RBC、Hb、PLT：（1）复检条件：无结果；（2）复检要求：检查标本是否有凝块，重测标本，如果维持不变，用替代方法计数。 5.WBC：（1）复检条件：首次结果30.0x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。 6.WBC：（1）复检条件：3天内Delta值超限，并30.0x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。,7.PLT：（1）复检条件：首次结果1000.0x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。 8.PLT：（1）复检条件：Delta值超限的任何结果；（2）复检要求：涂片镜检。 9.Hb：（1）复检条件：首次结果其年龄和性别参考范围上限20g/L；（2）复检要求：涂片镜检，确认标本是否符合要求。 10.平均红细胞体积（MCV）：（1）复检条件：24h内标本的首次结果105fl（成人）；（2）复检要求：涂片镜检。,11.MCV：（1）复检条件：24小时以上的成人标本105fl；（2）复检要求：涂片镜检观察大红细胞相关变化，如无大红细胞相关变化，要求重送新鲜血标本，如无新鲜血标本，报告中注明。 12.MCV：（1）复检条件：24h内标本的Delta值超限的任何结果；（2）复检要求：确认标本是否符合要求。 13.平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）：（1）复检条件：参考范围上限20g/L；（2）复检要求：检查标本是否有脂血、溶血、RBC凝集及球形红细胞。,1622条为白细胞分类的复检规则： 16.无白细胞分类计数（DC）结果或DC结果不全：（1）复检条件：无条件复检；（2）复检要求：人工分类和涂片镜检。 17.中性粒细胞绝对计数（Neut）：（1）复检条件：首次结果20.0x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。 18.淋巴细胞绝对计数（Lym）：（1）复检条件：首次结果5.0x10e9/L（成人）或7.0x10e9/L（1.5x10e9/L（成人）或3.0x10e9/L（2.0x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。 21.嗜碱粒细胞绝对计数（Baso）：（1）复检条件：首次结果0.5x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。,22.有核红细胞绝对计数（NRBC）：（1）复检条件：首次出现任何结果；（2）复检要求：涂片镜检。 23条为网织红细胞的复检规则： 23.网织红细胞绝对计数（Ret）：（1）复检条件：首次结果0.10x10e9/L；（2）复检要求：涂片镜检。,2441条为可以提示的复检规则： 24.怀疑性报警不成熟粒细胞(IG)/杆状核中性粒细胞（Band）报警提示除外：（1）复检条件：首次成人结果出现阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 25.怀疑性报警：（1）复检条件：首次儿童结果出现阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 26.WBC结果不可靠报警：（1）复检条件：阳性报警；（2）复检要求：确认标本是否符合要求并重测标本，如出现同样报警提示，检查仪器，如需要，进行人工分类。 27.RBC碎片：（1）复检条件：阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 28.双形RBC：（1）复检条件：首次结果出现阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。,注意事项,仪器为筛选试验,不能从测定结果直接 诊断疾病遇到异常提示时及时镜检仪器定期保养,保证日常工作正常进行,（二）血细胞形态变化的一般规律1.细胞大小及形态大小：由大到小。2个例外：巨核细胞及早幼粒细胞。形态：红细胞始终圆形，粒细胞圆形或椭圆形，单核细胞由圆形、椭圆形变为不规则形，巨核细胞由圆形变为不规则形。2.细胞核大小：由大到小。巨核细胞除外。核形：各系细胞有不同表现。核位置：红系核居中，粒、单系核偏位，淋巴细胞核一侧着边，仅一侧有胞浆。,核染色质：颜色由浅到深，染色质由细致疏松到粗糙密集，最后紧缩成块。核膜：不明显到明显。核仁：清晰、模糊、消失。3.细胞浆量：由少到多。颜色：粒、红、巨核由深蓝或浅蓝到浅红；淋巴、单核保持浅蓝或灰蓝色；浆细胞由灰蓝变为深蓝。颗粒：从无到有，由非特异性到特异性。,、血细胞的正常形态学特征,1、红细胞系统原红（normoblast）早幼红（basophilic normoblast）中幼红（polychromatic normoblast）晚幼红（orthochromatic normoblast）,原红细胞：,早幼红细胞：,中幼红细胞,2、粒细胞系统原粒（myeloblast）早幼粒（ pro myelocyte）中幼粒（myelocyte）：中性、嗜酸、嗜碱晚幼粒（metamyelocyte）杆状核粒（stab granulocyte,band granulocyte）分叶核（Segmenteel granulocyte）,原粒细胞,早幼粒细胞,中性中幼粒细胞,晚幼粒细胞,杆状核粒细胞,嗜酸粒细胞（中幼、晚幼、杆状核、分叶核,嗜碱粒细胞（早幼、中幼、晚幼、杆状核、分叶核）,3、淋巴细胞系统原淋（Lymphoblast）幼淋（prolymphocyte）淋巴（lymphocyte）大淋巴细胞小淋巴细胞,原淋巴细胞,幼淋巴细胞：,大淋巴细胞,小淋巴细胞,4、浆细胞系统原浆（plasmablast）幼浆（proplasmacyte）浆细胞（plasmacyte）,原浆细胞,幼浆细胞,浆细胞,5、单核细胞系统A.原单（monoblast）B.幼单（promonocyte）C.单核（monocyte）D.吞噬（maerophage）,A,B,C,原单核细胞,幼单核细胞,单核细胞,6、巨核细胞系统原巨（megakaryoblast）幼巨（promegakaryocyte）颗粒巨（granular megakaryocyte）产板巨（thrombacytogenous megakaryocyte）裸核（naked nucleous）,原巨核细胞,幼巨核细胞,颗粒型巨核细胞,产血小板型巨核细胞,推片,推片、染片的质量,正常骨髓象（油镜）,缺铁性贫血骨髓象,溶血性贫血骨髓象,巨幼细胞性贫血骨髓象,地中海贫血,慢性ITP骨髓象（高倍镜）,幼红细胞形态异常,核间桥（细胞内）,核间桥（细胞外）,核出芽,不对称双核,三核幼红,多核幼红、点彩,不对称核分裂象,核碎裂,幼红细胞多伪足,核畸形,巨大成熟红细胞,原粒I型 ：核圆形平坦，染色质疏松核仁明显胞浆中无颗粒.,原粒II型：在