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文档简介

医学免疫学实验,实验二小鼠脾细胞的分离制备及其活力检测,材料器材：离心机、手术剪、镊子、平皿、10ml离心管，5ml注射器等动物：昆明小鼠（25g左右，雄性）试剂：碘伏、红细胞裂解液、Hanks液、0.4%台盼兰染液,方法取小鼠一只，置于蜡盘上，颈椎脱臼处死，用碘伏消毒小鼠腹部后，打开腹腔，取出脾，去除周围的结缔组织，放入含有5mlHanks的平皿中用眼科剪将脾一端剪一小口后，将含有5mlHanks液的注射器从脾的另一端刺入脾，缓缓注入Hanks液，即可见脾细胞悬液流入平皿，注意在注射Hanks液同时不断转动针头方向，直至脾变苍白为止,用干净吸管吸取细胞液到10ml离心管中，平衡后，离心（1500rpm10min），将离心管盖子打开，快速弃上清液，往管底的细胞中加入1ml的红细胞裂解液，充分混匀20秒，立即加入9ml的Hanks液，混匀，离心（1500rpm10min），弃上清，将细胞定容到1ml,吸取0.1ml的细胞悬液到干净的试管中，加入等量的0.4%台盼兰染液，混匀，吸取1滴的细胞液到玻片上，加上盖片，显微镜观察：死亡细胞染成蓝色，活
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