生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定ppt

实验一生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定,教学内容：,一、实验原理,1.可溶性还原糖,生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖及不能溶解的糖。斐林试剂为0.1g/mL的NaOH和 0.05g/mL的CuSO配制而成的淡蓝色Cu(OH)2沉淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条件下Cu(OH)2被还原为砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为:,-CHO+Cu(OH)2,-COOH+Cu2O砖红色,2.脂肪的鉴定,苏丹(苏丹)为一种脂肪染色剂(易溶解于酒精，不溶解于水)。苏丹染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹染液遇脂肪的颜色反应为红色。其反应式为:,脂肪,苏丹 （苏丹）,橘黄色（红色）,3.蛋白质的鉴定,将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为:,双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应：-CO NH -（类似双缩尿H2NOC - NH - CONH2结构）酸性条件下与Cu2+作用形成紫色络合物双缩尿反应,选材：含糖量较高的白色或近于白色，苹果、梨最好 。,二、实验步骤与现象,1.可溶性还原糖,制备组织样液：,制浆：去皮、切块、研磨,过滤：（用单层纱布）,取液：（mL）,显色反应,mL组织样液,刚配制的斐林试剂mL,现象：,呈现蓝色,开水加热min,变成砖红色,2.脂肪的鉴定,取材：花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片,制片：,选取最薄的薄片移至载玻片中央,在薄片上滴加苏丹 染液2 3滴，染色min,滴加体积分数为50%的酒精溶液12滴，洗去浮色,吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片,观察：,先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察,结果：,有被染成橘黄色的脂肪微粒,3.蛋白质的鉴定,选材与制备组织样液：,黄豆组织样液（或鸡蛋白稀释液）,黄豆浸泡 去皮切片研磨过滤滤液,显色反应,mL组织样液,双缩脲试剂mL,现象：,无色,双缩脲试剂滴,紫色或紫红色,三、实验成功的关键与注意事项：,1.实验成功的关键在于实验材料的选择：,在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。 在做糖和蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。,(1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuSO溶液)分别配制、储存，使用时，再临时配制，将45滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。 (2) 鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。,A.可溶性还原糖,2.注意事项：,(3) 在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡34小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。 (4) 染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影响实验效果），观察时找最薄处最好只有12层细胞。,B.脂肪的鉴定,(5)在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，如果稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。 (6)双缩脲试剂的使用，应先双缩脲加试剂A(0.1g/mL的NaOH溶液)，造成碱性的反应环境，再加试剂B(0.01g/mL的CuSO溶液)。,C.蛋白质的鉴定,例1将小麦种子分别置于20和30培养箱中培养4天，依次取等量的萌发种子分别制成提取液和提取液。取3支试管甲、乙、丙，分别加入等量的淀粉液，然后按下图加入等量的提取液和蒸馏水，45水浴保温5分钟，立即在3支试管中加入等量斐林试剂并煮沸2分钟，摇匀观察试管中颜色。结果是(),A甲呈蓝色，乙呈砖红色，丙呈无色B甲呈无色，乙呈砖红色，丙呈蓝色C甲、乙皆呈蓝色，丙呈砖红色D甲呈浅砖红色，乙呈砖红色，丙呈蓝色,其中适合于鉴定糖的是 ，理由是梨的组织细胞 ，你打算用什么试剂鉴定? 。 小麦种子不如花生种子更适合用来鉴定脂肪，这是因为 ，你打算用什么试剂鉴定? . 适合于鉴定蛋白质的是 ，理由是 ，鉴定所用的试剂是 。,3. 讨论: 做生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验时，需要根据实验需要选择不同的实验材料。清根据下表所列各种材料回答问题：,梨,颜色为白色，并且糖含量较高,斐林试剂或班氏试剂,脂肪含量不如花生高，也不容易做切片,用苏丹或苏丹试剂,黄豆和花生,蛋白质含量高,双缩脲试剂,1、某些单子叶植物，如韭菜、鸢尾的叶子内含有大量的可溶性还原糖，但这些单子叶植物的叶子不宜作实验材料，原因是：,这些叶子的颜色较深，对还原性糖与斐林试剂的颜色反应起遮蔽作用,、下列哪组试剂在使用过程中，必须加热：A.斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中B.苏丹染液在鉴定动物组织中的脂肪时C.双缩脲试剂鉴定蛋白质时D.碘化钾溶液鉴定淀粉时 （）,课堂练习:,、某学生在鉴定脂肪的实验中，在显微镜下观察花生子叶切片，当转动细调节器时，有一部分细胞看的清楚，另一部分较模糊，这是由于 （ ）A.反光镜未调节好 B.标本切的厚薄不均C.细调节器未调节好D.显微镜物镜损坏,、苏丹溶液的配制的方法是： 称取0.1g苏丹干粉，溶于100mL酒精的体积分数为95溶液中，待全部溶解后再使用，为什么用酒精而不用蒸馏水？,苏丹染液易溶解于酒精中 ，不易溶解于水。,、鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂的正确做法是A先加A液，混合后再加B液摇匀观察（）B先加B液，混合后再加A液摇匀观察CA、B混合后加入，摇匀观察DA、B液同时加入样液，摇匀后观察,、在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选择中，错误的是（）A、甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于白色，因此可用于进行可溶性还原糖的鉴定B、花生种子含脂肪多且子叶肥厚，适用于脂肪鉴定C、大豆种子蛋白质含量高，可用于蛋白质的鉴定D、 鸡蛋清含蛋白质多，是蛋白质鉴定的理想材料,五、作业：,1将可溶性糖、脂肪、蛋白质鉴定原理及结沦填写在实验报告册上。 2斐林试剂主要用来鉴定可溶性还原糖，其主要成分为NaOH和CuSO4的混合液，用你已有的化学知识判断，这两种物质混合以后能发生了什么化学反应? ，请解释为什么斐林