生物技术题库

一、名词解释1.生物技术：也称为生物工程，是指人们基于现代生命科学，将先进的工程技术和其他基础学科的科学原理相结合，按照预先设计的设计改造生物体或加工生物材料，为人类生产所需的产品或达到某种目的。2.植物组织培养：是指在无菌条件下，将分离的植物器官、组织、细胞、原生质体等材料接种到人工培养基中，使其发育成完整植物的过程。3.植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物所必需的所有遗传信息，并且在特定条件下表达可以产生独立的个体。4.去分化：也称为去分化，在体外培养条件下，停止分化的细胞、组织和器官逐渐失去其原始结构和功能，以恢复其分生组织状态，形成无组织结构的细胞簇的过程。5.再分化：在体外培养条件的刺激下，无组织结构的去分化细胞团再分化为具有不同结构和功能的细胞、组织和器官的过程，即再分化。6.培养基：是植物组织培养的物质基础。其组成是植物生长发育所必需的各种物质的来源，主要包括营养元素、植物生长调节剂、碳源、维生素、有机添加剂等。7.外植体：在植物组织培养中，用于培养的植物材料通常被称为外植体，包括植物器官、组织、细胞等。7.重组DNA技术：指将一个生物体(供体)的基因和载体在体外进行剪接和重组，然后转移到另一个生物体(受体)中，根据人们的意愿稳定地遗传和表达新产品或新性状的体外DNA操作过程，也称为分子克隆技术。8.基因工程：将目标基因插入载体(质粒、病毒)，然后将携带目标基因的载体转移到受体物质细胞中，使目标基因在受体细胞中表达。从而使受体生物体显示出靶基因的特征。(1)限制性内切酶是一种能够识别双链DNA中特定核苷酸序列并在特定位点切割双链DNA的内切酶。平端：当限制性酶在其识别序列的中心轴切割两条DNA时，产生平端。(3)粘端：当限制性酶在其识别序列的中轴两侧分别切割两条DNA时，产生粘端。(4)异构酶：可以识别相同序列(切割位点可以相同或不同)但来源不同的两种酶。(5)同尾酶：虽然一些限制性内切酶具有不同的识别序列，但它们在切割DNA后产生相同的粘性末端。这种酶被称为同尾酶。9.限制酶活性：在适当的反应条件下，1克特定的DNA底物在1小时内完全水解，所需的限制酶量为一个活性单位。10.限制性物理图谱：在脱氧核糖核酸上的一些限制性酶切位点的图谱，可用作脱氧核糖核酸片段的特殊标记。也被称为DNA物理图。11.限制性内切酶的切割频率：切割频率是指预测的限制性内切酶在DNA分子中的切割点数。12.回文序列：双链DNA中的反向重复序列，当序列的双链打开时形成发夹结构。这个序列被称为回文序列。13.克隆载体：将外源基因携带到宿主细胞中，并在宿主细胞中进行DNA扩增，使得外源基因能够有效表达。14.表达载体：是添加表达元件(如启动子、限制性内切酶、终止子等)的载体。)到克隆载体的基本骨架上，以使目标基因得以表达。15.目标基因：指作为目标基因(目标基因或插入基因)的待研究基因。待分离、修饰、扩增或表达的基因。1.标记辅助选择(Marker-assisted Selection，MAS):它是借助遗传标记来区分特定主基因或数量性状基因座的基因型，并在此基础上将其应用于育种实践。2.细胞学标记：即植物细胞的染色体变异。包括染色体核型的变化(染色体数目、结构、有无卫星、着丝粒位置等)。)和条带模式(c带、n带、g带等。)。3.分子标记：广义的分子标记是指可以遗传和检测的DNA序列或蛋白质。分子标记的狭义定义仅指DNA标记，这一定义现在被广泛采用。4.基因组文库：通过将目标生物体的所有基因组DNA切割成一定长度的DNA片段并将其克隆到特定载体上而形成的集合。5.单核苷酸多态性：单核苷酸多态性，一种由单核苷酸在基因组水平上的变异引起的DNA序列多态性。6.动物细胞培养：指分离细胞在无菌条件下的分裂和生长，但细胞在整个培养过程中不分化，不再形成组织。7.遗传标记：指可追溯的染色体或染色体上某一片段或基因能在家族中传递的任何遗传特征，是遗传多样性的代表。8.动物生物反应器：利用转基因活体动物高效表达某些外源蛋白的器官或组织，实现功能蛋白工业化生产的技术。9.共显性：杂合子的一对等位基因有各自的表达效果。当这对等位基因是杂合子时，两个表达基因共存，这使得区分纯基因型和杂合子基因型变得容易。10.cDNA文库：通过将处于特定发育阶段的目标生物或特定组织和器官的所有mRNA逆转录成cDNA并克隆到载体上而形成的集合11.人工种子：是指利用细胞全能性将体细胞胚或分生组织包埋起来，使其能够发育成完整的植物，这种植物是通过在含有营养物质的外壳中进行体外培养而产生的，并具有形成颗粒的保护能力，这些颗粒能够在适当的条件下发芽和发芽。12.胚状体：指在植物组织培养过程中，非合子细胞通过胚胎发生和发育形成的胚状体结构，具有发育成完整植物的能力。第二，填空1.克隆载体是将目的基因携带到宿主细胞中进行复制或保存的载体，包括质粒载体、噬菌体载体、粘粒载体和染色体载体2.切割双链DNA分子中相邻两个核苷酸残基之间磷酸二酯键的所有酶，从而导致核酸分子即核酸酶的水解切割。根据它们的水解方法，它们可分为核酸外切酶和核酸内切酶，根据它们的底物，它们可分为核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶。3.细菌细胞中限制性内切酶的识别位点受到甲基化酶的保护，限制性内切酶对甲基化的识别位点无效，因此其DNA不会被切割。因此，能够识别同一位点的限制性内切酶和甲基化酶一起形成了一个限制性修饰系统。4.第二类限制性内切酶切割双链DNA分子后产生的末端片段具有粘性末端和平端。5.Ti质粒均包含以下四个区域：T-DNA区、病毒区、Con区和Ori区。6.培养基组成：1。大量元素2。微量元素3。有机成分4。植物生长调节剂。培养基的其他成分6。酸碱值7。母液：指培养基的浓缩液，也称为储备液。一般来说，培养基的原始配方扩大了10倍、20倍、100倍甚至更多倍。纯度较高的蒸馏水通常用于制备母液和培养基。简短回答问题1.原则1。AFLP标记技术：由于不同物种基因组大小不同，基因组DNA限制性酶切产生的限制性片段分子量也不同。特异性双连接头用于连接酶切的DNA片段作为扩增反应的模板，模板DNA用含有选择性碱基的引物扩增。选择性碱基的类型、数量和序列决定了扩增片段的特异性，因此只有那些与引物选择性碱基匹配的限制性位点侧翼的限制性片段才能被扩增。扩增产物用放射性同位素标记，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据凝胶上有无DNA指纹检测多态性。2.Northern杂交原理：如果外源基因正常表达，其转录产物特异性的mRNA将在转化植物的细胞中产生。提取总核糖核酸或核糖核酸，并进行凝胶电泳。膜将被转移并与标记的探针杂交，形成DNA-核糖核酸杂交体。通过探针上的标记可以检测到靶基因。北方杂交程序：探针制备探针选择：应使用同源的DNA探针检测从外源基因转录而来的基因，杂交后应形成DNA-RNA杂交体；也可以使用CDNA探针。获得探针序列人工合成聚合酶链反应方法质粒酶消化探针标记切口翻译方法从转化植物中提取总核糖核酸。核糖核酸纯度分析：A260/A280=1.7-2.0，1.7，被蛋白质或苯酚污染。A280/A2302.0如果“2”表示异硫氰酸盐污染和异丙醇再沉淀，则核糖核酸浓度计算：核糖核酸(微克/毫升)=A260稀释因子40微克/毫升分离柱色谱电泳-甲醛变性电泳使核糖核酸通过其链中碱基的氢键形成二级或三级结构，而甲醛与碱基结合后形成线性，这与电泳过程中的分子量标记成正比。(5)薄膜转移-干燥-杂交-信号检测-分析。3.3 .杂交原理：如果目标基因表达正常，转基因植物中含有一定量的目标蛋白。总蛋白是从转基因植物中提取的。将两个蛋白质样品溶解在洗涤剂和还原剂溶液中。蛋白质经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，分离出的蛋白带原位转移到固相膜上。将膜在高浓度的蛋白质中孵育以阻断非特异性位点，加入特异性抗体，将膜上印记的靶蛋白与一级抗体结合，然后加入能与一级抗体特异性结合的标记二级抗体，最后检测二级抗体上标记化合物的性质。4.可使用的遗传标记应满足以下条件：高度多态性；它是共同主导的。它对农艺性状的影响很小。经济方便，易于观察和记录。5.基因组文库：通过将目标生物的所有基因组DNA切割成一定长度的DNA片段并将其克隆到特定载体上而形成的集合。根据使用的载体，基因组文库分为以下类型。质粒文库、噬菌体文库、粘粒文库、人工染色体文库。6.基因组文库的构建步骤：1。提取目标植物基因组DNA，选择片段化的2个载体，制备3个与载体连接的DNA片段。噬菌体用于体外包装4个重组感染宿主细胞(大肠杆菌)5个转化细胞的筛选放射性标记探针杂交筛选文库7 .分离差异表达基因的基因差异显示技术：其基本原型：使用真核成熟基因的3”聚腺苷酸结构，寡核苷酸(dT)12MN(其中M是锚基，用于增加引物的Tm值，并且M是A、C、G和T中的任何一种)作为作图引物，结合到基因的聚腺苷酸上。在逆转录酶的作用下，核糖核酸被反转录成核糖核酸-核糖核酸的杂交分子。这个过程是差异逆转录。然后，在由10BP随机引物和OLIHO(DT)12MN组成的引物对中，以MRNA-CDNA为模板进行PCR扩增。对聚合酶链反应产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过放射自显影或显色反应可获得差异表达基因的扩增条带。聚合酶链式反应：在单链DNA、引物、聚合酶等条件下进行。脱氧核糖核酸聚合酶可以从引物中沿着单个脱氧核糖核酸的5“3”合成它的互补链，而聚合酶链反应仪可以使这一反应持续到条件不再存在。8.聚合酶链反应原理：逆转录聚合酶链反应是一种逆转录聚合酶链反应，它以核糖核酸为模板，在逆转录酶的作用下合成第一条核糖核酸。当靶基因的CDNA序列已知时，该方法可用于分离靶基因。2.高温高压灭菌注意事项：1。提前向灭菌锅加入适量的水。要在罐中灭菌的培养基应该是水平的，而不是倒3。不要把锅灌得太满。锅里的冷空气应该排出。5.灭菌条件应严格控制。6.消毒完成后，进行排气一、培养基类型1。含盐量高的培养基：MS培养基2。硝酸钾含量高的培养基：B5 N6 SH培养基3。中等无机盐含量的介质：含h介质等。适合花药培养4。无机盐含量低的介质：主要的WS介质等。适合生根培养2.培养基的配置及注意事项1。准备称重仪器，根据培养基配方和配置数量计算成分，取出母液，按顺序2排列。在可加热的容器中加入培养基量的三分之一的蒸馏水，按量加入琼脂，按计算好的母液分别加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物和其他物质，最后加入适量蔗糖，搅拌均匀，高温高压灭菌后必须加入生长调节剂。加入蒸馏水定容，搅拌均匀，标记孔4。调节酸碱度，通常为5.8。5.分装时，注意不要让培养基粘在内壁瓶口上，并做好标记。6.密封培养基。分装后，一般用硫酸纸、耐高温塑料盖和密封膜密封培养基，防止污染。1.人造种子的结构人工种子由胚状体、人工胚乳和人工种皮组成。胚状体：包括愈伤组织、顶芽、腋芽、不定芽、原球茎、小鳞茎和其他在组织培养过程中产生的繁殖体人工胚乳：通常由提供胚状体营养的蒴果组成。其营养成分主要包括矿物质元素、维生素、碳源、激素等。有时会添加杀虫剂、杀真菌剂、除草剂和一些有益微生物。人造种皮：是胶囊外面的膜，是人造种子的最外面部分。它同时需要机械保护和通风，但它不能使水和养分外流。2.基因的时空表达是细胞分化和个体发育的根本原因吗？基因：号染色体上具有特定结构和功能的DNA片段。不同的基因表达不同的蛋白质，所以不同的生物表现出不同的特征。也就是说，基因决定了生物体的特征。基因通常包括5非翻译区、起始密码子、转录区、终止密码子和3非翻译区。3.基因的本质：1:个不同的基因有相同的物质基础2:基因是可切割的3:基因可以被转移4:基因对应多肽5:遗传密码是通用的6:基因可以通过复制将遗传信息传递给后代。八、分子标记技术4.分子标记特征：以DNA的形式直接表达，可以在生物体发育的所有阶段的所有组织中检测到。它与成长和发展无关，它的材料也不受限制。(2)信息量大，覆盖整个基因组；(3)多态性高，自然界存在许多等位基因突变，不需要专门创造特殊的遗传材料；(4)中性，不影响目标性状的表达，与不健康性状无必然联系；许多分子标记表现出共显性，可以识别纯合基因型和杂合基因型，提供完整的遗传信息。在真核生物中，基因组DNA多态性比各种基因的遗传多态性多得多，因为基因组中有大量未编码的DNA序列，它们的变异不受自然选择的限制或较少受到自然选择的限制。5.SSR标记的定义和主要特征定义：也称为微卫星或短串联重复多态性(STRP)。它使用大量存在于真核生物基因组中的简单串联重复序列。特征：数量丰富，广泛分布于整个基因组；人和动物，植物(2)微卫星DNA的两端大多是高度保守的单拷贝序列，微卫星DNA的长度多态性有更多的等位基因变异；共显性标记可以区分杂合子和纯合子；1.实现细胞全能性的两个条