巨大芽孢杆菌的研究现状及应用

巨大芽孢杆菌 （Bacillus megaterium） 是一种好 氧产孢、 革兰氏阳性细菌， 至今已有一百多年的研 究历史. 我国对巨大芽孢杆菌的研究始于 20 世纪 五六十年代，作为解磷菌用于解磷细菌肥料的生 产.随着研究的深入， 巨大芽孢杆菌被广泛地应用 于净化水质、 农药降解、 微生物菌肥、 抗生素合成、 酶工业等1-3.本文就巨大芽孢杆菌在微生物肥料、 生物防治、 畜牧养殖、 水体净化和表达系统上的研 究和应用进行综述， 为巨大芽孢杆菌的进一步研究 和应用提供参考. 1巨大芽孢杆菌在微生物肥料上的 研究应用 氮磷钾是植物生长发育所必需的营养元素， 以 多种形式参与植物新陈代谢的不同生理生化过程. 但是， 全球耕地土壤普遍缺少氮磷钾元素， 尤其我国 的耕地土壤 74%缺磷， 60%缺钾， 限制了农业发展 4.最初， 通过施用磷、 钾肥来缓解这种状况， 但是磷 肥施入土壤后由于淋失、挥发或被土壤中的 Ca2+、 Fe3+、 Al3+等离子结合形成难溶性磷酸盐，使作物不 能吸收利用， 导致磷、 钾肥的利用率只有 20% 左右5. 长期依赖化学肥料提高农业生产力，不仅造成大量 不可再生资源浪费，还导致耕地土质变差、农产品 品质下降和环境污染. 如何挖掘土壤潜在的磷资 源，使难溶性磷转变为可被作物吸收利用的有效 磷， 降低化学肥料施用量， 发展绿色农业， 成为目前 农业研究的热点问题.大量的研究证明微生物的活 动能够影响土壤中磷的转化.因此， 对解磷微生物 的研究受到了农学、 微生物学和植物学研究者的重 视.巨大芽孢杆菌是一种解磷促钾细菌， 能够分解 土壤中的吸附态有机磷、 无机磷， 提高土壤肥力， 促 进作物增产6. 巨大芽孢杆菌作为解磷促钾细菌，是微生物肥 料中的常用菌种.不仅对卵磷脂、 土壤中植物不能吸 收利用的吸附态磷有明显的分解作用，提高土壤有 效磷含量， 还能与固氮菌、 解钾菌混合培养， 增强固 氮、 解钾能力.有研究显示， 巨大芽孢杆菌通过在作 物根际定殖，利用代谢的有机酸将固定在土壤中的 磷和钾转化为速效磷和速效钾起作用.同时， 菌体溶 解后， 自身释放出一些可溶性磷钾， 提高作物对磷钾 的吸收利用7.目前， 国内对巨大芽孢杆菌在微生物 肥料上的研究主要集中在菌株选育、 解磷效果、 发酵 条件优化及与固氮菌、 解钾菌相互作用等方面.张爱 华等5以巨大芽孢杆菌 PS-01P 菌株为出发菌， 通过 紫外线诱变， 得到 1 株高解磷能力的菌株.陈凯等8 研究发现巨大芽孢杆菌 P1 具有较强的解磷能力， 发 巨大芽孢杆菌的研究现状及应用 吕黎， 王蕾， 周佳敏， 罗志威， 丰来 （湖南泰谷生物科技股份有限公司/农业部植物营养与生物肥料重点实验室， 湖南 长沙410205） 摘要： 巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的功能型细菌， 具有营养要求低、 培养条件简便、 生长快等优点， 现 已广泛应用于工业和学术研究领域.针对巨大芽孢杆菌在微生物肥料、 生物防治、 畜牧养殖、 水体净化和表 达系统上的研究和应用进行综述， 为进一步研究和应用巨大芽孢杆菌提供参考. 关键词： 巨大芽孢杆菌； 微生物菌肥； 生物防治； 畜牧养殖； 水体净化； 表达系统 中图分类号： Q939.96文献标志码： A 农 业 科 学 研 究 Journal of Agricultural Sciences 2014年9月 Sep 14 第35卷 第3期 35 3 文章编号： 30747 （14） 30485 收稿日期： 2014-05-21 基金项目：现代农业科技资金专项 （K1308090-21） 作者简介：吕黎 （1985） ， 女， 硕士， 主要从事微生物工程和菌株遗传改良研究. 通信作者：丰来， 硕士， 主要从事微生物工程与酶制剂研究， Email:fenglai 酵培养优化实验表明，该菌对碳源、氮源及 Mg2+、 Mn2+、 Ca2+等离子较敏感，通过各因素的优化搭配， 可提高其发酵菌量， 优化后的最佳培养基组分为： 玉 米粉 20 g，黄豆粉 10 g， K2HPO41.5 g, MgSO4 7H2O 1.5 g， CaCO31.5 g， H2O 1 000 mL， pH=7.5，培养温度 32 ， 培养时间 32 h， 活菌数达 60 108cfu /mL， 芽 孢比率达 90%以上. 张维娜等 9 以巨大芽孢杆菌 JD-2 为研究对象， 发现 JD-2 具有较强降解有机磷、 无机磷的能力，以 106cfu /g 的起始浓度接入土壤， 便能达到较理想的解磷效果. 巨大芽孢杆菌能够增加作物产量的研究已有报 道.在油菜的种植中施用适量巨大芽孢杆菌菌剂， 能 够增加土壤有机质含量， 促进根系生长， 降低油菜中 的硝酸盐含量， 提高油菜生物量和增加产量10-11.微 生物之间存在着协同、 竞争、 拮抗等作用， 探讨其具 体关系有助于进一步开发多功能微生物肥料. 常慧 萍等12从小麦根际分离出固氮菌、 解磷菌和解钾菌， 其中解磷菌能够促进固氮菌和解钾菌的生长繁殖. 肥效试验显示， 圆褐固氮菌、 巨大芽孢杆菌制成的混 合菌剂较各单一菌剂具有更好的肥料效果，能显著 促进玉米株高、 干质量和根长13.另外， 江丽华等14采 用固定化细胞技术对巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌和 硅酸盐细菌混合菌液进行固定化处理，处理后混合 液的保存期延长， 特别有助于芽孢杆菌的保存.将固 定化细胞技术引用到农业领域，改变了微生物存活 期短的现状. 巨大芽孢杆菌解磷机理的研究方面，据文献报 道不同微生物存在不同的解磷机理，有些微生物解 磷是通过质子起作用； 有些是通过有机酸起作用； 有 些是通过分泌解磷酶类起作用；还有一些菌株在生 长过程中产生一些螯合物， 可溶解难溶性磷.而关于 巨大芽孢杆菌的解磷机理， 多数学者认为是通过 “酶 解作用” 和 “酸解作用” 实现的. “酶解作用” ， 即巨大 芽孢杆菌在降解有机磷时分泌出碱性或酸性磷酸 酶、 脱氢酶等物质使有机磷酸盐矿化， 成为植物可以 吸收利用的可溶性磷.研究显示， 在有效磷浓度低于 一定值使微生物感受到低磷胁迫时，胞内碱性磷酸 酶会被诱导合成并不断积累，其酶量可达到胞内总 蛋白的 6%15. “酸解作用” ，即微生物在代谢过程中 分泌有机酸， 如乳酸、 氨基酸、 柠檬酸等， 这些酸一方 面直接溶解土壤中难溶性磷酸盐，另一方面通过螯 合作用与 Fe3+、 Al3+、 Ca2+等离子结合，溶解难溶性磷 酸盐释放出磷. 2巨大芽孢杆菌在生物防治上的研 究应用 芽孢杆菌作为植物病害生物防治的主要生防细 菌，通过在生长发育过程中产生多种拮抗性或竞争 性的代谢产物，以直接或间接方式阻碍或杀死病原 菌.早期， 研究较为深入的生防芽孢杆菌主要有枯草 芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌、 侧孢芽孢杆菌及苏云金芽 孢杆菌等， 这些细菌多数是从植物的根际土壤、 植株 或叶片等处分离得到的， 接种后易于在植物上定殖， 生防效果持久稳定.近年来， 有研究报道巨大芽孢杆 菌是一种抑菌谱较广的生防菌株16， 对不同植物的 真菌和细菌病害具有防治作用， 如毛竹枯梢病17、 水 稻纹枯病18、 烟草灰霉病19、 香蕉灰斑病19、 甘薯黑斑 病19等， 其中， 对真菌病原菌的抑制能力强于对细菌 病原菌的抑制.秦健20通过研究发现， 巨大芽孢杆菌 产生的抑菌物质为伊枯草菌素 （Iturin A2） ， 该物质在 酸性和弱碱性环境以及在胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋 白酶 K 的作用下抑菌活性稳定； 而高温处理会破坏 其稳定性，如 121处理 20 min 后，抑菌活菌为 23.20%.张新建等21将外源几丁质酶基因导入巨大 芽孢杆菌，发现该工程菌株对病原真菌的拮抗能力 明显提高，其中对小麦纹枯病菌和棉花枯萎病菌的 防效能力分别为 70.34%、 58.51%，相比原始菌株， 防效分别提高 27.54%和 21.28%.表明， 通过分子生 物学的手段， 可提高巨大芽孢杆菌的生防效果. 此外， 腾春红等22分离出 1 株抗除草剂 2、 4- 滴 丁酯的巨大芽孢杆菌，并将该菌的抗性基因转入大 豆， 获得抗 2、 4- 滴丁酯的大豆.这为解决大豆田多 年生杂草问题提出了新措施， 也启示我们， 存在将微 生物的生防基因转移到作物中的可能性，以降低农 资成本. 3巨大芽孢杆菌在畜牧养殖上的研 究应用 随着我国畜牧养殖业的飞速发展，畜牧场的污 水、 畜禽排泄物及恶臭气体不仅对畜禽带来副作用， 还严重污染环境， 其中畜禽排泄物、 污水、 垫料等腐 败分解释放出的氨气、 硫化氢、 硫醇类等恶臭气体， 轻则降低空气质量， 重则引发呼吸道等疾病.此外， 畜禽消化道、 呼吸道及体表皮脂腺、 汗腺等也会散发 吕黎等：巨大芽孢杆菌的研究现状及应用 出难闻的气味，这些恶臭气体成为全球最大的污染 来源23.因此， 寻找能够抑制恶臭气体产生的物质越 来越受到人们的重视.张艳云等24研究发现， 在日粮 中添加巨大芽孢杆菌 （浓度为 2106cfu/g） 可降低 冬季密闭鸡舍空气氨浓度 53%74%，硫化氢浓度 55%90%.霍永久等25报道， 巨大芽孢杆菌制剂可 以减少猪粪氨气释放量.李晓刚23， 26通过试验发现， 基础日粮中添加巨大芽孢杆菌不仅可以减少蛋鸡排 泄物和肠道中氨气、 硫化氢的产生和排放， 还能提高 蛋鸡对饲料营养物质的利用率， 减少日采食量， 提高 产蛋率， 并显著增加血清中钙和磷的含量.巨大芽孢 杆菌是通过减少蛋鸡排泄物和肠道中氨氮、 尿素氮、 尿酸、 总氮、 可溶性硫化物、 总硫的浓度， 降低细菌脲 酶和半胱氨酸脱巯基酶的活性，从而减少排泄物和 肠道中氨气、 硫化氢的产生和排放.有研究表明巨大 芽孢杆菌可以分泌具有降解羽毛角蛋白和酪蛋白的 水解酶， 对于释放羽毛废弃物中的角蛋白和酪蛋白， 生产动物饲料蛋白产品具有重要的意义27.因此， 巨 大芽孢杆菌不仅可以改善畜牧养殖环境，而且可以 变废为宝， 提高畜牧养殖效益. 4巨大芽孢杆菌在水体净化上的研 究应用 目前， 对巨大芽孢杆菌的研究正方兴未艾， 从传 统的菌种筛选、 发酵条件优化、 生理生化功能及在微 生物肥料上的应用，发展到一些特殊功能的研究和 改造， 如水体净化、 基因功能和蛋白表达等.巨大芽 孢杆菌在水体净化上的报道较少，主要集中在对水 体中有机物和氮磷的降解及修复水体富营养化等方 面. 有研究表明巨大芽孢杆菌可分泌生物表面活性 剂， 有效提高原油的降解效率， 这对海洋中原油的污 染净化具有重要的意义28.匡群等29报道， 巨大芽孢 杆菌对养殖水体中的亚硝酸盐有较强的降解能力， 并且能够降解水体中的难溶性磷，提高可溶性正磷 酸盐的水平.可见， 巨大芽孢杆菌不仅能提高养殖水 体的质量，对正磷酸盐偏低的水体也具有一定的应 用价值.王琳等2利用巨大芽孢杆菌对富营养化景观 水体进行处理， 结果显示， 巨大芽孢杆菌能够有效去 除水体中的有机物、 氮、 磷， 控制藻类生长， 起到净化 富营养化水体的作用.由此可见， 巨大芽孢杆菌在水 体净化上具有一定的作用，可开发为水质微生态制 剂应用到水源匮乏的养殖区域， 降低养殖成本， 提高 养殖效益. 5巨大芽孢杆菌在表达系统上的研 究应用 20 世纪 90 年代，国外学者就开发出巨大芽 孢杆菌的原核蛋白表达系统，研究发现该系统与 传统的原核表达系统 （如大肠杆菌表达系统、 枯草 芽孢杆菌表达系统） 相比， 具有外源蛋白分泌能力 强且不产内毒素；载体质粒稳定且不产生或很少 产生胞外蛋白酶；胞外蛋白易于提取且提取成本 低； 使用的诱导剂廉价等优点.与哺乳动物表达系 统相比， 不存在培养时间长、 支原体和病毒污染难 控制等问题.基于该表达系统的优点， 我国学者也 展开了对该表达系统的研究， 如内切葡聚糖酶30、 中性植酸酶31、 耐碱性木聚糖酶32、 碱性 琢- 淀粉 酶33等均在巨大芽孢杆菌中得到高活性表达.其 中，中性植酸酶和耐碱性木聚糖酶分别是从枯草 芽孢杆菌、 短小芽孢杆菌中克隆得到的酶基因， 转 化到巨大芽孢杆菌， 经过诱导， 获得外源蛋白的高 活性表达.郭德军等34在综述中指出， 利用巨大芽 孢杆菌获得的多种酶的高效活性表达，与表达基 因本身使用的密码子和宿主密码子的偏爱性有 关， 因为和巨大芽孢杆菌亲缘关系较远的基因， 如 人和鼠的某些基因，在巨大芽孢杆菌中表达量并 不高.而李勇等35根据巨大芽孢杆菌表达系统优 化牛凝乳酶基因序列，将优化后的基因序列与穿 梭质粒 pHIS1525 连接，转化到巨大芽孢杆菌， 得 到了牛凝乳基因在巨大芽孢杆菌中的高效表达， 并证实该重组酶与原酶的酶学性质基本相同.这 是国内外少有关于在巨大芽孢杆菌中高效表达动 物性外源蛋白的报道，显示出该表达系统良好的 应用前景.近年来， 有研究报道， 巨大芽孢杆菌是 异源表达的优良寄主，可有效分泌来源于八叠球 菌 ATCC 13881 S- 层蛋白 SsLA 的血凝素 （HA） 表 位蛋白36.此外， 有研究显示， 通过添加 5 mmol/L 的色氨酸、 天冬氨酸、 组氨酸、 谷氨酸和赖氨酸可 以增加巨大芽孢杆菌中绿色荧光蛋白的表达37. 有文献报道过表达木聚糖酶基因的巨大芽孢杆菌 可用于增强造纸过程中纸张的亮度，并在保证纸 张亮度和质量的基础上减少氯化物的使用量； 若 与其他纤维素酶混合使用，还可增加回收造纸污 泥的糖化率， 减少造纸的成本38. 6总结 巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的功能型细菌. 它能够利用多种碳源如 LB 培养基、 NA 培养基等， 营养要求低， 培养条件简便， 适合工业化生产.它是 有机磷分解菌， 产生的芽孢抗逆性强， 制成的菌剂易 于运输和保存， 是微生物菌肥理想的菌株.制成的微 生物肥料应用于多种作物，既能改善土壤微生物环 境， 增加土壤肥力， 提高作物生物量和增加产量， 又 能防治多种病虫害，提高作物品质. 作为功能型细 菌，在畜牧养殖上也具有一定作用，能改善养殖环 境， 减少畜禽病害发生； 同时能够净化水体， 为我国 水产养殖业的发展和降低养殖成本作出贡献. 在分子生物学领域， 巨大芽孢杆菌已成为多种 外源蛋白表达的宿主系统.该原核表达系统具有分 泌外源蛋白能力强且不产生内毒素和碱性蛋白酶； 载体质粒稳定， 不易丢失； 分泌的外源蛋白易于分 离和纯化， 提取成本低等优点.我国学者成功地在 该表达系统中， 实现多种酶如内切葡聚糖酶、 中性 植酸酶、 牛凝乳酶等的高效表达.巨大芽孢杆菌上 述的多种功能， 表明该菌具有良好的发展和应用前 景. 参考文献： 1PATRICIA S V, REBEKKA B, TOBIAS F, et al. Bacillus megaterium from simple soil bacterium to industrial protein productionhostJ.AppliedMicrobiologyand Biotechnology, 2007,76(5):957-967. 2王琳， 李季， 张鹏岩.巨大芽孢杆菌对富营养化景观水体 的净化效果J.生态环境学报， 2009， 18 （1） ： 75-78 3罗岩， 孙君社， 张京声， 等.巨大芽孢杆菌产亚硝酸还原酶 活性测定条件优化J.中国酿造， 2011 （6） ： 27-31 4孙丽范. 利用耐盐碱解磷、 解钾、 固氮菌发酵菌糠制备菌 肥的研究D. 天津： 天津大学， 2012 5鲍朋， 许章峰. 巨大芽孢杆菌在生物肥料上的研究现状与 展望方向J. 农技服务， 2013， 30 （6） ： 601-602 6王金玲， 刘晓平， 赵凤艳， 等. 解磷巨大芽孢杆菌液体发 酵培养条件的优化J. 中国农学通报， 2013， 29 （15） ： 68- 72 7王旭辉， 丁亚欣， 谈俊生物菌肥促生机制研究J现代农 业科技， 2010 （4） ： 307-309 8陈凯， 李纪顺， 杨合同， 等. 巨大芽孢杆菌 P1 的解磷效果 与发酵条件研究J. 中国土壤与肥料， 2010 （4） ： 73-76. 9张维娜， 孙梅， 陈秋红， 等. 巨大芽孢杆菌 JD-2 的解磷效 果及对土壤有效磷化的研究 J. 吉林农业科学， 2012,37 （5） ： 38-41. 10王梦亮， 韩立伟， 王俊宏， 等. 氮肥及巨大芽孢杆菌对油 菜生长和硝酸盐含量的影响 J. 长江农业， 2012 （8） ： 57-59. 11柳艳艳， 骆洪义， 王凤忠， 等. 巨大芽孢杆菌 BM002 生 物有机肥对油菜生长发育的影响 J. 山东农业科学， 2012， 44 （7） ： 63-66. 12常慧萍， 祝凌云， 姚丽娟， 等. 小麦根际固氮菌、 解磷菌 及解钾菌的互作效应 J. 中国土壤与肥料， 2008 （4） ： 57-59. 13姜明. 圆褐固氮菌、 巨大芽孢杆菌复合菌肥的制作及应 用效果J.安徽农业科学， 2010， 38 （28） ： 15705-15706. 14江丽华， 王梅， 张文君， 等. 固氮、 解磷、 解钾混合菌株协 同固定化技术J.中国农学通报， 2010， 26 （12） ： 18-21. 15吉蓉. 土壤解磷微生物及其解磷机制综述J. 甘肃农业 科学， 2013 （8） ： 42-45. 16王梅， 刘兆辉， 江丽华， 等. 巨大芽孢杆菌固定化包埋材 料的初步研究J. 江西农业学报， 2009,21 （12） ： 57-58. 17郭晓军， 李潞滨， 李术娜， 等. 毛竹枯梢病拮抗细菌巨大 芽孢杆菌 6-59 菌株的产芽孢条件优化J. 植物保护学 报， 2008， 35 （5） ： 443-447. 18农倩， 陈雪凤， 黎起秦， 等 水稻内生细菌 B196 的鉴定 及其对水稻纹枯病的防治作用J 中国生物防治学报， 2011， 27( 1) : 99- 103 19秦健， 袁高庆， 王雅， 等. 巨大芽孢杆菌 B196 菌株发酵 滤液的抑菌谱及其稳定性 J. 西南农业学报， 2012,25 （5） ： 1694-1697. 20秦健. 巨大芽孢杆菌 B196 菌株产抗菌物质的发酵条件 优化及分离鉴定研究D. 南宁： 广西大学， 2013. 21张新建， 黄玉杰， 杨合同， 等. 通过导入几丁质酶基因提 高巨大芽孢杆菌的生防效果 J. 云南植物研究， 2007， 29 （6） ： 666-670. 22腾春红， 刘永双， 李相全， 等. 2、 4-滴丁酯抗性细菌巨大 芽孢杆菌 （Bacillus megaterium)的分离和鉴定J. 作物杂 志， 2013 （1） ： 117-119. 23李晓刚. 巨大芽孢杆菌降低蛋鸡排泄物中氨和硫化氢 机理的研究D.扬州： 扬州大学， 2012. 24张艳云， 霍永久， 戴承墉， 等巨大芽孢杆菌制剂对蛋鸡 舍氨和硫化氢产生量的影响C第二届全国畜禽和水 产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会， 2008 25霍永久， 张艳云， 施青青， 等芽孢杆菌 1259 制剂对生长 肥育猪生产性能及猪粪氨气产生的影响J江苏农业科 学， 2012， 40(2)： 129-161 26李晓刚， 顾欢， 孙龙生， 等. 巨大芽孢杆菌 1259 对蛋鸡 生产性能、 养分消化率及血清指标的影响J. 江苏农业 科学， 2012,40 （3） ： 171-173. 27AGRAHARIS,WADHWAN.Isolationand characterization of feather degrading enzymes from Bacillus megaterium 吕黎等：巨大芽孢杆菌的研究现状及应用 Research status and application of Bacillus megaterium Lu Li， Wang Lei， Zhou Jiamin， Luo Zhiwei， Feng Lai （Key Laboratory of Plant Nutrition and Biological Fertilizer, Ministry of Agriculture, P.R. China, Hunan Taigu Bio-Tech Co.Ltd, Changsha 410205, China） Abstract: Bacillus megaterium is a potential kind of functional bacteria, it has some advantages: nutritional requirements are low; culture conditions are easy; it multiply very fast and so on, so it is used in industry and academic fields. The research status and application of Bacillus megaterium on microbial fertilize, biological control, livestock breeding, water purification and expression system were summarized in this paper, which will provide the theoretical basis for further study ofBacillus megaterium. Key words: Bacillus megaterium;microbial fertilizer; biological control; livestock breeding;water purification; expression system （责任编辑、 校对魏乐） SN1 isolated from Ghazipur poultry waste site J. Prikl Bioklhim Mikrobiol, 2012, 48(2): 199-205. 28THAVASI R, JAYALAKSHMI S, BANAT I M.Effect of biosurfactant and fertilizer on biodegradation of crude oil bymarineisolatesofBacillusmegaterium, Corynebacterium kutscheri and Pseudomonas aeruginosa J. Bioresour Technol, 2011, 102(2): 772-778. 29匡群， 孙梅， 张维娜， 等. 巨大芽孢杆菌 JSSW-JD 的生物 学特性及对养殖水体氮磷的影响 J. 江苏农业科学， 2013， 41 （4） ： 222-225. 30陈惠， 胥兵， 廖俊华， 等. 内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢 杆菌中的表达及其酶学性质研究 J. 遗传， 2008， 30 （5） ： 649-654. 31牟琳， 王红宁， 邹立扣. 巨大芽孢杆菌表达外源蛋白的 特点及其研究进展J.中国生物工程杂志， 2008， 28 （4） ： 93-97. 32包怡红， 刘伟丰， 何永志， 等. 耐碱性木聚糖酶基因在巨 大芽孢杆菌中的表达及其酶学性质 J. 微生物学报， 2009,49 （10） ： 1353-1359. 33金辉， 廖思明， 王青艳， 等. 碱性 -淀粉酶基因在巨大 芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究J. 生物技术通报， 2011 （11） ： 154-159. 34郭德军， 李岩松， 王欣， 等. 巨大芽孢杆菌表达系统的特 点及其研究进展J. 生物技术， 2010， 20 （6） ： 92-95. 35李勇. 牛凝乳酶基因在 Bacillus megateriumWH320 中的 表达研究D. 南宁： 广西大学， 2012. 36KNOBLOCH D, OSTERMANN K, R魻DEL G. Production, secretion,andcellsurfacedisplayofrecombinant Sporosarcina ureae S -layer fusion proteins in Bacillus megateriumJ. 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Bioresour Technol, 2012,125:182-187. 巨大芽孢杆菌的研究现状及应用巨大芽孢杆菌的研究现状及应用 作者：吕黎， 王蕾， 周佳敏， 罗志威， 丰来， Lu Li， Wang Lei， Zhou Jiamin， Luo Zhiwei， Feng Lai 作者单位：湖南泰谷生物科技股份有限公司/农业部植物营养与生物肥料重点实验室,湖南 长沙,410205 刊名： 农业科学研究 英文刊名：Journal of Agricultural Sciences 年，卷(期)：2014(3) 参考文献(38条)参考文献(38条) 1.PATRICIA S V;REBEKKA B;TOBIAS F Bacillus megaterium from simple soil bacterium to industrial protein production host 2007(05) 2.王琳;李季;张鹏岩 巨大芽孢杆菌对富营养化景观水体的净化效果 2009(01) 3.罗岩;孙君社;张京声 巨大芽孢杆菌产亚硝酸还原酶活性测定条件优化 2011(06) 4.孙丽范 利用耐盐碱解磷、解钾、固氮菌发酵菌糠制备菌肥的研究 2012 5.鲍朋;许章峰 巨大芽孢杆菌在生物肥料上的研究现状与展望方向 2013(06) 6.王金玲;刘晓平;赵凤艳 解磷巨大芽孢杆菌液体发酵培养条件的优化 2013(15) 7.王旭辉;丁亚欣;谈俊 生物菌肥促生机制研究 2010(04) 8.陈凯;李纪顺;杨合同 巨大芽孢杆菌P1的解磷效果与发酵条件研究 2010(04) 9.张维娜;孙梅;陈秋红 巨大芽孢杆菌JD-2的解磷效果及对土壤有效磷化的研究 2012(05) 10.王梦亮;韩立伟;王俊宏 氮肥及巨大芽孢杆菌对油菜生长和硝酸盐含量的影响 2012(08) 11.柳艳艳;骆洪义;王凤忠 巨大芽孢杆菌BM002生物有机肥对油菜生长发育的影响 2012(07) 12.常慧萍;祝凌云;姚丽娟 小麦根际固氮菌、解磷菌及解钾菌的互作效应 2008(04) 13.姜明 圆褐固氮菌、巨大芽孢杆菌复合菌肥的制作及应用效果 2010(28) 14.江丽华;王梅;张文君 固氮、解磷、解钾混合菌株协同固定化技术 2010(12) 15.吉蓉 土壤解磷微生物及其解磷机制综述 2013(08) 16.王梅;刘兆辉;江丽华 巨大芽孢杆菌固定化包埋材料的初步研究 2009(12) 17.郭晓军;李潞滨;李术娜 毛竹枯梢病拮抗细菌巨大芽孢杆菌6-59菌株的产芽孢条件优化 2008(05) 18.农倩;陈雪凤;黎起秦 水稻内生细菌B196的鉴定及其对水稻纹枯病的防治作用 2011(01) 19.秦健;袁高庆;王雅 巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液的抑菌谱及其稳定性 2012(05) 20.秦健 巨大芽孢杆菌B196菌株产抗菌物质的发酵条件优化及分离鉴定研究 2013 21.张新建;黄玉杰;杨合同 通过导入几丁质酶基因提高巨大芽孢杆菌的生防效果 2007(06) 22.腾春红;刘永双;李相全 2、4-滴丁酯抗性细菌巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的分离和鉴定 2013(01) 23.李晓刚 巨大芽孢杆菌降低蛋鸡排泄物中氨和硫化氢机理的研究 2012 24.张艳云;霍永久;戴承墉 巨大芽孢杆菌制剂对蛋鸡舍氨和硫化氢产生量的影响 2008 25.霍永久;张艳云;施青青 芽孢杆菌1259制剂对生长肥育猪生产性能及猪粪氨气产生的影响 2012(02) 26.李晓刚;顾欢;孙龙生 巨大芽孢杆菌1259对蛋鸡生产性能、养分消化率及血清指标的影响 2012(03) 27.AGRAHARI S;WADHWA N Isolation an