手性化合物的动态动力学拆分研究进展

第 2 2卷 第 5期 2 0 0 8年 1 O月 分 子 催 化 J O U R N A L O F MO L E C U L A R C A T A L Y S I S ( C H I N A) V 0 l _ 2 2 N o 5 0c t 2 0o8 文章编号 ： 1 00 1 3 5 5 5( 2 0 0 8 ) 0 5 - 0 4 7 3 - 0 8 手性化合物的动态动力学拆分研究进展 杜志强 ， 王安明 ，王 华 ，周 成 ，杨 明 ，张 俊 ，祝社 民 ，沈树 宝 ( 1 南京工业大学制药与生命科学学院， 江苏 南京 2 1 0 0 0 9 ； 2 南京工业 大学材料科学与工程学院 ，江苏 南京 2 1 0 0 0 9 ) 关键词：动态动力学拆分； 手性；消旋 ； 过渡金属 中图分类号 ：0 6 4 3 3 2 文献标识码 ： A 获得光学纯手性化合物已成为精细化学 品和制 药行业的重要目标， 外消旋体的拆分是合成光学纯 手性化合物最主要的途径之一 I ， 其中动力学拆分 是常用的方法然而经典的动力学拆分方法 的缺点 是最大理论产率仅为 5 0 为了提高产率，经典的 动力学拆分方法需要一个底物的消旋化过程 ，理论 产率可以达到 1 0 0 经典 的动力学拆分与底物消 旋相结合的方法即为动态动力学拆分方法动态动 力学拆分技术 自出现以来 ， 研究人员将此技术应用 于各种手性物质 的拆分 J ，取得 了很大的进步 ， 我们将介绍近几年动态动力学拆分中底物消旋方法 的研究及工业应用 ， 并 阐述了消旋与拆分耦合 的现 状 ，对该 课题 的研 究 以及 发 展方 向进 行 探 讨 和 展望 1消旋方法 理论上讲， 动态动力学拆分方法( D K R ) 可以把 所有的底物都转换成某种单一的异构体并且产率达 到 1 0 0 ， 其中核心过程是底 物的原位消旋 J 目 前底物消旋的方法主要有化学法 、酶法消旋 1 1化学法消旋 化学法消旋是利用过渡金属络合物或者手性助 剂对未反应的底物异构体进行消旋 的一种方法 其 中酶 过渡金属配合物结合的反应 被广泛的应用 于动态动力学拆分中， 并且取得了较好的成绩该 系统适应 的底物范 围广 ，它能拆分各种 醇、二醇 、 胺及烯丙基酯等其中应用较多的过渡金属主要有 钌 、 钯 等 1 1 1钌催化 的消旋反应 目前 ， 钌催化的动态 动力学拆分已经广泛应用于酮类的加氢反应 当中 B a c k v a ll 等人 。 。 首先应用脂肪酶 钌复合物催化拆 分仲醇 ， 他们利用 4 - 氯苯基 乙酸 乙酯为酰基供体 ， 通过研究他们发现在非极性溶液 中结果最好 ，最后 得到产物 的光 学纯度 9 9 ，产 率为 5 0 随后 K i ml 1 1 等人应用钌胡 旨 肪酶复合体催化拆分了烯丙 基醇， 他们采用了两种商业化的钌复合物( p 异丙 基苯) 一 钌( ) 复合物 3和它的氢化类似物4 ， p 一 氯 苯醋酸盐作为酰基供体， 获得的单一对映体的产率 为8 0 以上， 对映体过量值( e e ) 为9 9 钌催化的消旋大多数都是在无氧无水条件下进 行的，N a m d u K i m等人 设 计 了一类新 型的催 化 剂( 图 1 ) ， 其可以在空气中稳定存在， 他们通过对 ( ) 苯基乙醇消旋研究发现催化剂 的最佳 配基 是 氯化物 ， 最佳的溶剂是 甲苯 ，在空气 中产物的产率 达到9 9 ， 对映体过量值( e e ) 达到9 9 并且在纯 氧条件下产物的对映体过量值 ( e e ) 都可以达到 6 7 他们还对复合体催化剂( 4 ) 做了批次实验， 前2次的产率和对映体过量值( e e ) 都是9 9 ， 第三 次产率为 9 5 ， 对映体过量值 ( e e ) 为 9 9 可见此 钌催化剂复合体催化的高效性和可重复性 1 1 2钯催化的消旋反应 R e e t z 等 首次利用 过渡金属钯一 酶结合 的动态动力学拆分方法制备光 学活性胺，以钯 碳作外消旋催化剂， 用 N o v o z y m 一 4 3 5 作对映选择性的酰基化生物催化剂，乙酸乙酯 作酰化剂， 1 一 苯基乙胺被转化成( 尺 ) 一 N - ( 1 一 苯基乙 基 ) 乙酰胺 ，收率 6 4 ，对映体过量值( e e) 9 9 收稿 日期 ： 2 007 8 - 2 3 ；修回 日期 ： 2 0 0 7 1 1 1 1 基金项目： 十一五国家8 6 3 项目( N o 2 0 0 6 A A 0 2 7 2 1 1 ) ， 国家自然科学基金( 2 0 3 7 6 0 3 4 ) ， 江苏省 自 然科学基金( B K 2 0 0 6 1 8 1 ) 作者简介： 杜志强， 男， 生于1 9 8 3 年， 硕士生 通讯联系人 ， 教授 ，博导T e l ： 0 2 5 - 8 3 5 8 7 3 4 9； E m a i l ：z s b s h e n h o t ma i l c o rn 4 7 4 分 子 催 化 第 2 2卷 O c 图 1钌复合催化剂 3和4 F i g 1 R u t h e n i u m c o mp l e x e s c a t a l y s t 3 a n d 4 由于外消旋经过一个很慢的钯( 0 ) 促进的胺一 亚胺平 衡步骤， 反应进行了8 d ， 且有副产物苯乙酮生成， N ( 1 一 苯基 乙基) 一 N 一 ( 1 一 苯亚乙基 ) 胺和 N，N 一 二 ( 1 - 苯乙基) 胺生成 C h o i 等 用 P d N o v o z y m- 4 3 5结合的动态动力学 过程对上述方法进行了改进，他们用酮肟作为底物 ， 在通人氢气 的情况下以乙酸乙酯作 为酰化剂 ， 加入 异丙基乙胺抑制上述副产物的生成，一系列酮肟在 6 0反应 5 d被转化成相应的光学活性乙酰胺 ， 收 率 7 0 8 9 ， 对映体过量值 ( e e ) 9 4 一 9 8 随后 Wi l l i a ms 课题组_ 1 对钯与酶复合催化拆 分作 了研究 ，他们应用 P d () 分别与荧光假单胞 菌属脂肪酶和乙酰胆碱酯酶复合来催化苯基一 环 已 烯基 乙酰肼 ，最后他们研究发现脂肪酶 与钯复合 催化的结果最好 ， 产率达到 8 1 ， 对映体过量值达 到 9 6 值得一提的是 ，最近 K i m等人 采用 了一种 全新的钯催化剂拆分伯胺 ， 他们第一次使用 了钯纳 米催化剂 P d A I O( O H) 来 催化 消旋苯 基 乙胺 ( 图 2 ) ， 最后得到对映体过量值( e e ) 9 9 同时他们 以商业化的钯催化剂 P d A 1 0 作为对照， 结果发现 H 一 O 8 _ O H O 。 m 。 l i pa s e UJ f s ) - 1 8 图 2 l 一 苯基乙胺的动态动力学拆分 F i g 2 Dy n a mi c Ki n e t i c Re s o l u t i o n o f 1 - P h e n y l e t h y l a mi n e P d A I O( O H) 催化的消旋过程 比商业化的 P d A 1 ： 0 快许多， 在1 2 h 之后对映体过量值减少到2 9 ， 而 2 4 h 之后就接近零( 9 8 1 2 2 一 氨基酸衍生物的消旋酶 虽然 自然界 中 a 氨基酸的生物合成具有高度的立体特异性 ，主要 是 L 型， 但是最近 D型的类似物在生物资源中被发 现 这些资源大多是具有高利用价值的自然产物 除了通过镜像的从头合成代谢途径， D型氨基酸异 构体可以通过生物催化消旋和拆分来获得， 也就是 通过消旋酶催化 的动态 动力 学反应来获得 目标产 物 氨基酸衍生物的消旋酶主要有谷氨酸酯消旋 酶、 氨基酸消旋酶、 精氨酸消旋酶等等 谷氨酸酯消旋酶的底物范围很小，主要用于 D 型谷氨酸酯的制备， 谷氨酸酯外消旋体中的 L型异 构体可以被谷氨酸酯消旋酶氧化成为 D型( 图4 ) ， 其中分子氧作为氧化剂 这样 D型的谷氨酸酯很容 D GI u L L - Gl u 一O 2 + H 2 0 ) ( L-G -u d a s e a k e 啪 l u t H2 02 州 H3 图4利用谷氨酸消旋酶来生产 D 一 谷氨酸的过程 F i g 4 P r o d u c t i o n o f D gl u t a mi c a c i d i n v o l v i n g g l u t a ma t e r a c e ma s e 易分离出来 酸合成酶和氨基酸消旋酶， 以外消旋氨基酸和吲哚 色氨酸是人体的必需氨基酸， K S o d a 等人 。 作为原材料( 图5 ) ， D型氨基酸可以很好的分离出 采用了两步法来生产 L 色氨酸 ， 反应 中利用了色氨 来 ， 最后 他们还在2 0 0 L 反应器 中试验 大肠 杆菌全 NH2 H o 入 洲 l I o t r y p t o p h a n s y n t h a s e 7 - 帕 洲 O D Se r 图 5利用氨基酸消旋酶合成 L 色氨酸的动态动力学拆分过程 F i g 5 S y n t h e s i s o f L t r y p t h o p h a n i n a d y n a mi c k i n e t i c r e s o l u t i o n p r o c e s s u s i n g a mi n o a c i d r a c e ma s e n S 时 m 咖 郇 m 4 7 6 分 子 催 化 第 2 2卷 细胞催化 ， 得到一个 比较好的结果 ， 产量为 1 1 0 g L 2消旋与拆分反应的耦合 为了解决动力学拆分的最大理论产率问题， 人 们需要在经典的动力学拆分方法 中增加一个未反应 的对映体的循环过程主要的方法有分离、 对映体 的消旋、 重复拆分 但是分离只是简单的将未反应 的对映体分离 ，没有充分利用底物，只能缩短反应 时间， 最大的理论产率仍然没有改变； 再如重复拆 分， 由于酶只能将一种特定的对映体反应， 而不能 与另一构象的对映体反应， 重复拆分只是使产率更 加接近最大产率， 并不能改变最大产率为5 0 的缺 陷 相比于前两者， 对映体的消旋反应很好的解决 了这个问题( 图 6 ) ， 消旋化过程主要是利用过渡金 属或手 性助剂 、 消旋酶 等对 未反应 的底物进行 消 Ch i r a l c a t a l y s t +P K 。 s R； ， s 图6去消旋化过程中的底物消旋 F i g 6 S u b s t r a t e r a c e mi s a t i o n i n d e r a c e mi s a t i o n 旋， 再通过酶进行拆分， 理论产率可以达到 1 0 0 B a c k v a l l 等人认为消旋与拆分的耦合应该符 合4个基本条件( 1 ) 拆分的对映体选择性很强； ( 2 ) 消旋 反应过程 的速率必须很 快；( 3 ) 过渡金属 或者消旋酶不能与产物反应；( 4 ) 拆分与消旋过程 必须能在相同的反应条件下兼容 不同种类的催化剂催化底物时 ， 反应过程中消 旋与拆分的耦合方式大不相同， 过渡金属催化的消 旋反应往往是在拆分反应之前或者与拆分反应同时 进行比较有代表性的是 K i m拆分伯胺的反应， 反 应的第一步是将底物进行消旋， 条件是纳米钯催化 剂在 甲苯中于 7 0下反应 2 4 h ， 最后产物经 H P L C 检测， 构型的伯胺的对映体过量值 ( e e ) 达到 9 8 将第一步得到的产物进行预处理后加入固定 化酶后进行拆分， 再此实验中第一步和第二步的反 应条件相同 ， 所以可以在第一步的时候加入固定化 的脂肪酶， 但是在实验过程中要考虑纳米钯催化剂 是否会对酶的拆分产生影响，最后得到 目的产物对 映体过量值( e e ) 9 9 但是消旋酶催化 的过程通常是先拆分然后通过 消旋酶进行消旋得到单一对映体的产物， D e g u s s a 公司_ 2 目前 N 乙酰氨基酸生产线就是采用 了双酶 法来生产单一对映体的 N 一 乙酰氨基酸( 图7 ) 首先 利 用L 氨基酸酰基转 移酶来催化N一 乙酰一 D L - 氨基 N ac yl ar ni no aci d r ac em a se A c y I t N H 人 R CO 2 H H 2 R 、 C o 2 H 图 7利用双酶系统对 N 一 乙酰氨基酸的动态动力学拆分过程 F i g 7 D y n a mi c k i n e t i c r e s o l u t i o n o f N a c y l a mi n o a c i d u s i n g a t w o e n z y me s y s t e m 酸， 最后得到的产物是 L 氨基酸和未参加反应的 N 一 乙酰 D - 氨基酸然后通过结 晶进行分离 ， 最后没 有反应的N 乙酰 D 氨基酸在 N 一 乙酰氨基酸消旋酶 的作用下消旋 ， 形成 N 一 乙酰一 L - 氨基酸 3动态动力学拆分手性化合物制备 3 1手性醇的拆分 单一手性的仲醇是一种非常重要的中间体， 可 用于制备单一手性药物、 农用品等， 而且具有高光 第 5期 杜志强等 ：手性化合 物的动态动力学拆分研究进展 学纯度的某些仲醇还是制备高质量液晶不可缺少的 原料制备单一手性仲醇的比较常用 的方法是采用 酶或化学催化剂来催化动力学拆分 Wi l l i a m s等人 首先报 道了应用多种 过渡金 属作为消旋剂， 与荧光假单胞菌脂肪酶复合催化拆 分仲醇 他们在拆分 1 一 苯基乙醇时利用 R h ( c o d ) C 1 ： 作为消旋剂 ，乙烯基醋酸盐作为酰基供体 ，最 后获得产物 ( R) - a 一 甲基醋酸盐 的对映体过量值 Ph ( e e ) 为7 6 ， 产率为 8 0 结果不是很理想， 但是 证实了过渡金属与酶动态拆分仲醇的可行性之 后， B a c k v a l l 等人 又对这一方法进行了重要的改 进， 利用二聚体钌复合物与固定化、热稳定的脂肪 酶在9 0 o 【= 复合催化拆分仲醇， 并使用 p 一 氯苯酯作 为酰基供体解决了外消旋剂与酰基供体不兼容的问 题， 最后转化率高达 1 0 0 ，单一产物的产率为 9 2 ， 对映体过量值( e e ) 为9 9 5 ( 图8 ) 1 ( 2 too l ) No v o z y m - 43 5 ROAc Ac e t o p h e n o n e Bu OH， 7 0 OAc P R= v i n y l ： 5 0 y i e l d， 9 9 e e R= p- c h l o r p h e n y l ： 1 0 0 y i e l d， 9 9 e e 图8脂肪酶一 钌复合催化系统对 1 一 苯基乙醇的动态动力学拆分 F i g 8 T h e DK R o f 1 - p h e n y l e t h a n o l b y a l i p a s e r u t h e n i u m s y s t e m K i m和 P a r k 等人 最近的研究扩大了反应产 物的规模， s 构型和 R 一 构型的产物都可以用动态动 力学的方法获得他们对溶剂、 酰基供体、 酶的处 理方法进行 了研究 ， 结果表明在 T H F溶剂 中最好 ， OH t o l u e n e 2 5 ， 3 d 采用了枯草芽胞杆菌蛋白酶作为酰基化试剂，丁酸 三氟乙酯作为酰基供体， 而氨基环戊二烯钌复合物 作为消旋剂K i m和 P ark等人还对获得两种不同构 型的拆分方法进行 比较( 图 9 ) ， 结果获得的单一对 OCOP r 三 OCOP r OH 9 4 i s o l a t e d y i e l d 9 9 5 o A Ie e OH 9 5 i s o l a t e d y i e l d 9 95 e e 图 9 m一 异羰基苯 1 - 乙醇的动态动力学拆分 F i g 9 D y n a mi c Ki n e t i c Re s o l u t i o n o f m- B u t a n o y l o x y p h e n y l 一 1 一 e t h a o l 映体在产率和对映体过量值方面都比较接近 3 2手性胺的拆分 R e e t z 等 首次利用过渡金属钯一 酶结合的动 态动力学拆分方法制备光学活性胺此后 B i c k v a l l 等人 报道了利用钌复合物催化胺的消旋， 在 甲 苯中1 1 0下催化消旋未反应的对映体 S h a r f u d d i n 等人 利用脂肪酶拆分酰基亚胺， 他们采用异丙 烯基醋酸盐作为酰基试剂， 以正己烷作为溶剂， 6 0 7 0下反应， 最后通过对很多物质拆分研究得 到的对映体过 量值 ( e e ) 均大 约为 9 9 最近 B a c k v a l l 等人 又对伯胺的拆分进行了研究 他们 利用 自己设计的钌复合物 5 c 和 C A L B共同作用拆 分伯胺， 以甲苯作为溶剂， 加入适量 N a C O ， 以酰 基酸作为酰基供体( 图 l 0 ) ， 最后得到的最好产率 4 7 8 分 子 催 化 第2 2 卷 为9 5 ， 对映体过量值( e e ) 为9 9 NH2 4 mo 1 5 c R1 r a c 1 a - k NHAc C AL - B, Na 2 CO t 3 R o l u e ne ,9 0 C R 2 a - k R 图1 0伯胺的动态动力学拆分 F i g 1 0 D y n a mi c Ki n e t i c Re s o l u t i o n o f P ri ma r y Ami n e s 3 3氰醇的拆分 光学活性氰醇以及由它转变而成的 一 羟基酸 ， 羟基酯 ， O t 一 羟基酮和 B 一 羟基胺等一系列光学活性 异构体都是重要的农药和医药中间体 熊健等人 研究了有机相中脂肪酶催化苯乙 氰醇 的转酯化反应 ，拆 分苯 乙氰醇 考察 了酶、溶 剂 、 溶剂水含量 、 外加苯 甲醛和苯 甲酸以及底物浓 度等因素对反应的影响， 反应2 0 h以后底物转化率 为 5 0 ， 对映体过量值( e e ) 大于9 9 K o r d i k 等 人 研究 了 一 氰醇的拆分 ， 应用 C A L B作为生物 催化剂， 钌复合物作为消旋剂， 对氯乙酸酯作为酰 基供体， 取得了良好的结果 3 4萘普生酯的拆分 萘普生是一种非 甾类 消炎 、镇痛、解热药 ，对 关节炎等结缔组织疾病有独特的疗效其药理活性 与分子的手性密切相关 ， s 对映体 的药理活性是 R 一 对映体的2 8 倍 而其化学合成产物为 尺 和 s 对映 体的混旋物， 所以其拆分研究受到极大的重视I 3 目前已有很多人研究 了萘普生的拆分，徐 毅 等人选择 了一种便于底物一 产物分离的微水一 有 机两相体系， 将圆柱状假丝酵母脂肪酶( C C L ) 固定 于硅藻土上 ， 合成了一种能提高酶催化反应速度的 萘普生氯乙酯 反应2 4 h转化率即可达到3 5 ， 反 应速度远大于萘普生甲酯 ， 并初步探讨 了水量对酶 催化反应的影响， 发现当水在载体表面形成单层分 布时 ， 酶催化反应速度最快鞠培培 等人研究了 拟低共熔体系中脂肪酶水解拆分萘普生酯， 利用圆 柱状假丝酵母脂肪酶( C C L ) 在拟低共熔体系 中拆分 萘普生甲酯制备高效药性的 型萘普生药物， 拆分 效率高达4 5 8 ， 比有机相酶促反应提高了一倍以 上然而大多数局限于萘普生酯 的动力学拆分 ，辛 嘉英等人 的研究实现 了萘普生酯的动态动力学 拆分， 他们设计了一种膜反应器 ，巧妙地将碱催化 萘普生酯的原位消旋过程与脂肪酶的拆分过程结 合， 形成一个动态的拆分过程， 反应 3 6 0 h ， 转化率 达到 6 0 时，对 映体过量值 ( e e ) 仍保 持在 9 6 左右 4结 语 近十年来 ， 动态动力学拆分方法在反应效率和 应用范围取得了很大 的进步 ，酶与过渡态金属 ， 或 者酶与消旋酶催化的拆分在生产单一对映体中的作 用越来越重要但是， 这两种动态动力学拆分方法 也有很多不足之处 4 1过渡金属催化的消旋与酶拆分的反应条件 一 般具有很大差异 ，较难实现反应 的同时进行一 般来说 ，温度升高 ，消旋化速度加快 ， 但酶在高温 下容易变性， 反应条件很难统一这要求研究和改 进酶的热稳定性 ， 开发更多种类 的嗜热酶目前提 高酶的热稳定性 的方法主要有 固定化方法 、基因工 程、蛋 白质工程以及极端微生物的筛选 4 2酶与过渡金属催化消旋反应的底物适应性 很低 ，只能催化一种或者一类物质 ， 并且 回收率很 低现在主要 目标是开发一些新的酶催化系统 ，来 扩大酶催化底物 的广泛性，利用蛋 白质工程技术， 对现有的酶进行适 当的改造 ，扩大酶的底物适应范 围， 同时还要利用各种技术提高酶的稳定性( 例如 酶的固定化) ， 使其能多批次使用， 争取扩大其适 应范围和回收率 4 3消旋酶应用的主要瓶颈是酶的来源很少， 并且产量很低消旋酶主要来源与一些特殊 的微生 物和植物的种子 ， 但产量很低 ，目前应该利用微生 物筛选技术或基因工程技术对现有的微生物或者酶 进行改造，获得酶的高产菌株并对现有 的分离提 取技术进行改进 ， 获得更高产量的酶 4 4目前 ，在拆分与消旋 的耦合过程方面的研 究还比较少， 主要是简单的按照反应条件的不同而 进行耦合，由于酶和金属催化剂或者酶与酶之间可 能会相互影响， 进而影响拆分和消旋的效率， 所以 建议在拆分或者消旋 的过程中采用膜将两个反应体 系分离 ， 这样既可 以节省时间又不互相产生影响 ， 大大缩短了反应时间 若在消旋和拆分的过程中与 产物的分离进行耦合， 这样可以加快反应的速度， 节省时间， 提高效率 第 5期 杜 志强等 ： 手性化合物的动态动力学拆分研究进展 4 7 9 动态动力学拆分已经成为制备光学纯物质最重 要的工业生产方法之一消旋酶催化 的消旋反应较 于过渡金属有很多优点 ，随着 生物工程 、酶工程 、 蛋白质工程等技术的发展， 会有越来越多的消旋酶 被发现和改进 4 2 J ，这将成 为 以后动态动力学拆分 主要发展方向之一 相信在不久的将来， 动态动力 学拆分将会广泛的应用在制药 、 农业和精细化学品 行 、 【 中 参考文献： 1 B e l e n M M， B a e k v a l l J E C u r r e n t O p i n i o n i n C h e m i c a l B i o l o g y J ， 2 0 0 7 ， 1 1 ： 2 2 6 2 3 2 2 K i m M J ， A h n Y， J a i w o o k P C u r r e n t O p i n io n B i o t e c h n o l o g y J ， 2 0 0 2 ， 1 3： 5 7 8 5 8 7 3 Mo h a r e m T E ， Wi l l i a m s J M J C u rr e n t O p i n i o n i n C h e m i c a l B io l o g y J ， 1 9 9 9 ， 3 ：1 1 1 5 4 Wa r d R S T e t r a h e d r o n ：A s y mm e t r y J ，2 0 0 5 ，6 ： 1 4 7 5 1 4 9 0 5 A n d r a o s J o h n P h y s C h e m A J ，2 0 0 3 ，1 0 7： 2 3 7 4 2 38 7 6 P e l l i s s i e r H e l e n e T e t r a h e d r o n J ， 2 0 0 3 ， 5 9 ： 8 2 9 1 8 3 2 7 7 P ami e s O，B a e k v a l l J E T r e n d s i n B iot e c h n o l o g y J ， 2 0 0 4，2 2：1 3 01 3 5 8 R i e r m e i e r T h o ma s HT e t r a h e d r o n L e t t J ， 2 0 0 5， 4 6 ： 3 4 0 33 4 0 6 9 C h o i Y K， J o n g S H， J u n g J Y， e t a 1 O r g C h e m J ， 1 9 99。6 4：8 4 238 42 4 1 0 P e r s s o n B A， B te k v a l l J E A m C h e mS o c J ， 1 9 9 9，1 2 1 ：1 6 4 51 6 5 0 1 1 L e e D， Hu h E u n A O r g L e t t J ， 2 0 0 0， 2： 2 3 7 7 2 3 79 1 2 K i m N，K o S B O r g L e t t J ，2 0 0 5 ，7 ：4 5 2 3 4 5 2 6 1 3 R e e t z M T ，S c h i mo s s e k K C h i m J ，1 9 9 6 ， 5 0 ： 6 6 8 66 9 1 4 C h o i Y K，K i m M J ，A h n Y K i m MO r g L e t t J ， 20 01，3：4 0 994 1 0 3 1 5 K i m M J C u r r e n t O p i n i o n i n B i o t e c h n o lo g y J ，2 0 0 2 ， 1 3： 5 7 85 8 7 1 6 K i m M J ， K i m W H， Ha n K O r g L e t t - J ， 2 0 0 7 ， 9 ： l 1 5 71 1 5 9 1 7 X i e Y C ，L i u H Z ，C h e n J Y I n t e r P h a r m J ， 2 0 0 0。1 9 6：2 12 6 1 8 L i u Y i ( 刘毅) ， Wu X i a o y a n ( 吴晓燕) ， J i a o Q i n g c a i ( 焦庆才) C h e m ( 化学通报) J ， 2 0 0 5， 1 2 ： 9 3 5 93 8 1 9 T u r n e r N J C u rr e n t O p i n io n i n C h e m ic a l B io l o g y J ， 2 0 0 4，8：1 1 41 1 9 2 0 G a d l e r P ，G l u e c k S M，K r o u t i l WB i o c h e m S o c T r a n s a c t io n s J ， 2 0 0 6 ， 3 4 ：( p a r t 2 )2 9 6 3 0 0 2 1 G e o ff r e y C F，S t a m p e r A A，Mo r o l l o D R B i o c h e m J ， 1 9 9 8 ， 3 7 ： 1 0 4 3 81 0 4 4 5 2 2 S i l v i a M，Wo l f g a n g K，K u r t F ，e t a 1 C h e mC o mm J ， 2 0 0 5 ，1 9 04 1 9 0 5 2 3 C h o i W J ，L e e K Y，K a n g S H，e t a 1 S e p a r a t i o n a n d P u r ifi c a t io n T e c h n o lo g y J ， 2 0 0 7 ， 5 3 ：1 7 81 8 2 2 4 C h a d h a A，B a s k a r B T e t r a hed r o n ：A s ymmet ry J ， 2 0 0 2，1 3：1 4 6 11 4 6 4 2 5 S t r a u s s U T，F a b e r KT e t r a h e d r o n ：A s ymmet ry J ， 1 9 9 9，1 0： 4 0 7 9 4 0 8 1 2 6 Y a g a s a k i MO z a k i A Mo 1 C a t a 1 ： E n z y m e J ， 1 9 9 8，4：11 1 2 7 O i k a w a T， Wa t a n a b e M， Ma k i u r a H， e t a 1 B io s c i B i o - t e c h n o 1 B i o c h e m - J ，1 9 9 9 ， 6 3 ： 2 1 6 8 2 1 7 3 2 8 B a e H S ， Ho n g S P， Lee S G， e t a 1 J Mo 1 C a t a 1 B： E nz y m e J ， 2 0 0 2 ， 1 7 ： 2 2 3 2 3 3 2 9 Ma y 0，V e r s e c k S ，B o mm a r i u s A O r g P r o c e s s R e s D e v J ， 2 0 0 2 ， 6： 4 5 2 4 5 7 3 0 D i n h P M， H o w a r t h J A， Wi l l i a m s J M J ， e t a 1 T e t r a h e d r o n L e t t J ，1 9 9 6 ， 3 7 ： 7 6 2 3 7 6 2 6 3 1 P e r s s o n B A，L a r s s o u A L E，B e k v a l l J E ，e t a 1 A m C h e m S o c J ， 1 9 9 9， 1 2 1 ：1 6451 6 5 0 3 2 K i m M J ，C h u n g Y，C h o i Y K，e t a 1 A m C h e m S o c J ， 2 0 0 3 ， 1 2 5 ： 1 1 4 9 41 1 4 9 5 3 3 P h m i e s 0， H e r ma n n s N， B a e k v M 1 J E T e t r a h e d r o n L e t t J ， 2 0 0 2 ， 4 3 ： 4 6 9 9 4 7 0 2 3 4 S h a r f u d d i n M，A t s u s h i N，Y u k o I ， e t a 1 T e t r a h e d r o n ： A s ymmet ry J ， 2 0 0 3 ， 1 4 ： 1 5 8 11 5 8 5 3 5 P a e t z o l d J ，B a e k v M 1 J E A mC h e mS o c J ， 2 0 0 5，1 2 7：1 7 6 2 01 7 6 2 1 3 6 X i o n g J i a n( 熊健) ，J i Z h e n g( 季峥) ， wu J i a n p i n g ( 吴坚平) ， e t a 1 C h i n B io p r o E n g i n ( 生物加 工过程) J ， 2 0 0 5 ， 3 3 ： 3 33 7 3 7 K o r d i k C P， R e i t z A B ， Me d C h e m J ，