蜂蜜中甘露糖的测定

GH/T 20 0 ICS 中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准 GH/T GH 蜂蜜中甘露糖含量的测定 高效液相色谱法 Determination of Mannose in Honey HPLC Method （征求意见稿） -发布 -实施 中华全国供销合作总社 发布中华全国供销合作总社 发布 GH/T 20 1 前前 言言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。 本标准的起草单位：秦皇岛海关技术中心 本标准主要起草人： GH/T 20 2 蜂蜜中甘露糖含量的测定蜂蜜中甘露糖含量的测定 高效液相色谱法高效液相色谱法 1 范围 本方法规定了蜂蜜中甘露糖含量测定的高效液相色谱法。 本方法适用于蜂蜜中甘露糖含量的测定。 本方法对于蜂蜜中甘露糖的测定低限：500 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用水溶解，乙腈定容后，经 0.45m 滤膜过滤，液相色谱-蒸发光散射检测法测定，外标法定 量。 4 试剂和材料 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 水：GB/T6682 规定的一级水。 4.3 甘露糖标准物质：CAS：3458-28-4，纯度99%。 4.4 甘露糖标准储备溶液：称取 2 g 甘露糖标准物质（精确至 0.001g） ，置于 100mL 容量瓶中，加入 60 mL 水溶解，用乙腈定容至体积，摇匀。 4.5 甘露糖标准工作溶液：分别吸取甘露糖标准储备溶液 25uL、50uL、100uL、250uL（4.4）至 10mL 容量瓶中，用乙腈+水（40：60）稀释至体积，分别配制成 0.005%、0.01%、0.02%、0.05%浓度的甘露 糖标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。 5 仪器和材料 5.1 高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。 5.2 分析天平：感量 0.1mg 和 0.001g 各一台。 5.3 注射器：2.5mL。 5.4 有机相过滤膜：0.45m。 5.5 样品瓶：1.5mL。 5.6 容量瓶：10mL，100mL。 6 试样制备与保存 6.1 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60的水 浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出 0.5 kg 作为试样。制备好的试样置于样品 瓶中，密封，并做上标记。 6.2 试样的保存 GH/T 20 3 将试样于常温下保存。 7 测定步骤 7.1 样品前处理 称取 10 g 试样（精确至 0.001g）置于 100 mL 烧杯中，加入 30 mL 水，用玻璃棒搅拌使试样完全溶 解，转移至 100mL 容量瓶中，然后再用 310 mL 水洗烧杯并转移至上述 100mL 容量瓶中，用乙腈定容 至体积，混匀。用 0.45m 滤膜将样液过滤入样品瓶中供液相色谱测定。 7.2 测定 7.2.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：Amide 1.7m 150 mm2.1 mm i.d（或相似规格） ； b) 流动相：乙腈（含 0.1%三乙胺）+水（梯度洗脱，见表 1） ； c) 流速：0.25 mL/min； d) 柱温：60； e) 漂移管温度：75； f) 气体压力：40 psi g) 喷雾器模式：加热，动力水平为 60%； h) 进样量：3 L。 表 1 梯度洗脱条件（A，0.1%三乙胺-乙腈溶液；B，水） 时间（min） 流速（mL/min） A(%) B(%) 初始 0.25 92 8 15 0.25 92 8 16 0.25 65 35 20 0.25 65 35 21 0.25 92 8 25 0.25 92 8 7.2.2 液相色谱测定 用配制的甘露糖标准工作溶液(4.6)绘制以峰面积 log 值为纵坐标，工作溶液浓度 log 值为横坐标的 标准工作曲线， 保证样品溶液中甘露糖的响应值均应在标准工作曲线的线性范围内， 样品溶液与标准工 作溶液等体积进样进行测定。在上述色谱条件下，其参考保留时间为 9.2 min。 7.3 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.4 空白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 结果按照色谱工作站自动计算或按式（1）计算： X = C V 104 （1） m 式中： GH/T 20 4 X试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg） ； C从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为克每百毫升（g/100mL） ； V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL） ； m所称试样的质量，单位为克（g） 。 注：计算结果应扣除空白值 9 精密度 两次平行测定的差值不超过其算数平均值