离子交换层析法...ppt

第九章离子交换色谱、仪器设备简介、离子交换池集装置、第九章离子交换色谱、第一节离子交换色谱基本原理第二节离子交换色谱基本原理第三节离子交换剂分类和特性第三节离子交换剂和缓冲液选择第四节离子交换木脚色谱工作方法第五节离子交换木脚色谱应用、第一节离子交换色谱基本原理、第一、 离子交换剂的组成及其特性2，离子交换剂的选择性3，离子交换剂色谱原理图，一，离子交换剂的组成及其特性，聚苯乙烯磺酸阳离子交换树脂的制备，离子交换树脂的几何结构图，二，离子交换剂的选择性，一，平衡常数2，选择性与离子电荷和水合离子半径的关系3，选择性平衡移动还具有质量法则KBA值 1，即Rb ra，KBA值=1，即Rb=ra，KBA值1，即Rb，1价离子：Li na k Rb cs 2价离子：Mg2 Ca2 Sr2 Ba2 1价负离子：f-cl-br-I-其他价阳离子：疏水，2 .亲水，(1)阳离子交换剂(2)阴离子交换剂，(1)纤维素离子交换剂，(2)交联葡聚糖离子交换剂，(3)琼脂糖离子交换剂，(1)。疏水离子交换剂，R-so-3 HNA=R-so 3na h R-po(OH)2na=R-poohona h R-n(CH3)3oh-Cl亲水性离子交换器，纤维素磷酸酯CM-纤维素DEAE-纤维素CM-交联葡聚糖CM-SepharoseCL-6B，2，离子交换器特性，颜色和形状交联吸收率或膨胀率也交换容量稳定性比重，交换容量，交换容量(mg/g或mmol/g、mg/ml或mmol/ml)测定交换容量：强酸性和强酸性都测定了解脱盐能力；弱酸和弱碱类型及酸碱测定能力。影响交换容量的因素：网屏、离子强度、pH值。强酸性阳离子交换介质交换容量的测定，采取一定量的离子交换介质，去除离子水胀，冲洗干净，清除1 mol/l的直出处理，中性去除离子清洗，1 mol/l的HCl处理，离子清洗中性去除。然后收集1 mol/l的NaCl洗脱液，通过已确定的NaOH滴定洗脱液中的氢离子浓度计算吸附氢离子的毫摩尔量，除以离子交换介质的质量，得到交换容量。计算公式包括，碱型负离子交换介质交换容量的测定方法，采取一定量的离子交换介质，去除离子接受解，冲洗，1摩尔l/l的HCl处理，将离子清洗去除为中性，1摩尔l/l的引出处理，将离子清洗去除为中性。然后收集1 mol/l的NaCl洗脱液，通过精制HCl滴定洗脱液中氢氧根离子浓度，将吸附氢氧根离子的毫摩尔量除以离子交换介质的质量，获得交换容量。计算公式：凝胶或纤维素弱碱性阴离子或弱酸性阳离子交换介质交换容量的测定方法，取一定量的离子交换介质，冲洗，1 mol/l的NaCl处理，离子清洗用中性去除，缓冲液平衡，用已知蛋白质浓度样品吸附柱，直到柱内介质吸附量饱和。用一定浓度的NaCl或其他洗脱剂收集洗脱液，测定洗脱液中蛋白质的浓度，然后计算交换容量，如下：第三节离子交换器和缓冲液的选择，1，离子交换器的选择2，缓冲液的选择，1，离子交换器的选择，需要考虑的影响因素1。嗯，阳离子交换器选择2。选择强、弱离子交换器3。选择其他离子交换器4。选择不同的基质离子交换器，需要考虑的因素，高不溶性和松散的多孔结构或巨大的表面积要求，更多的交换器和稳定的理化性质交换组，分离电荷和电强度等影响因素pH对分子大小和共存物质的影响1。嗯，选择阳离子交换剂，电泳结果决定pI决定稳定pH范围碱性分子在部分酸性环境中稳定：细胞色素c酸性分子在分碱性环境中稳定：核酸，HCG，离子交换剂选择度，2，选择强，弱离子交换剂，3，选择其他离子交换剂，选择某种离子交换剂这取决于离子交换剂对所有半离子的结合力。要增加交换容量，一般需要选择结合力较小的半温子。因此，强阳性和强阴性要在交换器上分别选择h型和OH型。弱酸性和弱碱离子交换器应分别选择Na型和Cl型。4 .选择不同的基质离子交换剂，选择基质的物理和化学性质目标物质的物理和化学性质溶液的成分和杂质含量，第二，选择缓冲液，选择缓冲液pH值2，选择缓冲液离子成分3，选择缓冲液离子强度，第一，选择缓冲液pH值，第二要求：启动缓冲液将样品的活性成分和离子交换剂组合在一起，并使用PH与靶pI的关系(pH=pI1)选择性吸附选择弱阳离子交换剂时，PH高于PK。选择弱阴离子交换剂时，pH低于PK。2，缓冲液离子选择，对缓冲液离子的pK值使用的pH，使用阳离子交换剂时，应使用负离子缓冲液。例如，使用磷酸盐、醋酸酯、柠檬酸盐负离子交换剂时，要使用阳离子缓冲液。例如，tris缓冲液离子对分离物的活性、测定、溶解性没有影响。3，缓冲液离子强度选择，起始缓冲液结合样品的活性成分和离子交换剂，一般小于0.1mol/L。洗脱液从离子交换器中去除活性成分。通常为0.15mol/L(或使用pH洗脱)。第四节离子交换木脚色谱的工作方式，1，离子交换剂处理、转换和再生2，分离物质交换3，物质洗脱和收集，1，离子交换剂处理和转化，一般程序：水泡，悬浮液，酸碱浸泡，中性疏水离子交换剂清洗2-4倍变化和再生：从一个半温过渡到另一个半温的过程。阳离子交换剂转换为钠类型需要NaOH。要转换成氢型，必须用HCl处理。使用铵离子需要用NH4OH或NH4C1处理。目的：离子交换器需要的离子或组分，第二，分离物质的交换，布局柱色谱的实际交换量只能按理论交换量的25%-50%计算。放置方法、柱色谱系统组装、柱色谱系统连接、3、物质洗脱和采集、梯度搅拌机和形成的梯度梯度梯度转移离子强度梯度洗脱pH值梯度洗脱、生成拔模溶液的三个装置和形成梯