结核斑点试验操作简要_第1页
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文档简介

结核斑点试验操作步骤-21.先分离淋巴细胞1、 每个病人标本准备15ml离心管2支，编号1#，2#。2、 在1#管加3ml Ficoll；2#加4ml血和3ml 1640 3、 将2#管中液体7ml慢慢加入1#中（让血加在Ficoll上面），-18C 1000g离心22min。4、 将离心好的1#管中的淋巴细胞层由上向下慢慢吸取约5ml（尽量将细胞吸取干净），加入到新的15ml离心管中，并加1640至10ml，颠倒混匀后600g离心7min。18C5、 离心后尽快倒掉上清，先加1ml 1640培养液，吹打把细胞打开。再加1640至10ml，混匀。6、 350g离心7min。倒掉上清，加入500lAIM-V培养液，震荡混匀。2.细胞计数及稀释7、 计数细胞：取100l台酚蓝于96孔板中，再加入25l步骤六液，吹打混匀，取出10l加在细胞计数板上，显微镜下计数活细胞。3.抗原AB刺激特异性T淋巴细胞使之产生特定的细胞因子8、 根据标本数取本试剂盒中的微孔板，每份样本用4个检测孔，顺序标记各孔：阴性对照、抗原A、抗原B、阳性对照。（每条微孔板也标记好序号）。9、 按顺序加入阴对（ AIM-V）、抗原A、抗原B、阳对，各50l，每孔加100ul配置好的细胞液。（A和阴对用一个枪头，B和阳对用一个枪头），全部加完后，标注时间，放入CO2培养箱培养16-20小时。4酶联免疫检测10、 次日准备1PBS液，用200l PBS洗板，重复洗4次.（洗去除因子外多余细胞及因子）11、 根据标本量先计算好酶结合物工作液所需的量，以1:200的比例将酶结合物（酶标抗体）原液与PBS液混合，制成酶结合物工作液，每孔加50l。4-8度孵育1小时。12、 每孔用PBS液洗涤4次，然后加显色液50
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