实验一-石蜡切片技术及HE染色(20111116)_第1页
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文档简介

免疫组织化学相关技术,实验一石蜡切片技术和HE染色,DepartmentofHistologyandEmbryology,授课教师：吴民华E-mail:904223480,实验目的1.掌握石蜡切片标本制作的基本步骤。2.掌握HE染色的原理及过程。重点：1.动物取材及固定。2.HE染色。,固定,脱水,透明,浸蜡,包埋,切片,取材,石蜡切片术（paraffinsectioning）,染色,封片,基本步骤：,一、取材,动物：小白鼠目的器官：肝、肾、脾实验用品：手术刀、剪、镊子、纱布、固定液（10%甲醛）等动物处死：颈椎脱臼法,1动物处死后固定2用纱布或脱脂棉蘸少量生理盐水或蒸馏水将动物胸腹部的被毛打湿3切开皮肤及皮下组织进行分离，打开胸腔、腹腔,取材步骤：,一、取材,1.取材的顺序2.取材大小3.取材严禁机械损伤4.注意器官的完整性5.同一固定液装多种组织时要注意加标签6.注明取材时间、组织名称、固定液名称、组织块数量等,取材的注意事项,二、固定,目的尽量保持组织的生前状态，防止组织的死后变化、自溶。增加组织的硬度，使组织不易变形，有利于固定后的处理。,1组织及固定液必须新鲜2固定液的用量一般为组织块体积的1020倍3固定的时间视组织块的种类、性质、大小而定,固定的注意事项,几种常用的固定液10甲醛固定液bouin固定液苦味酸饱和水溶液75ml3740福尔马林溶液25ml冰醋酸5ml丙酮4%多聚甲醛灌注固定,固定方法,三、脱水、透明及浸蜡,1.脱水流程：70%酒精6h80%酒精6h95%酒精1h95%酒精1h100%酒精1h100%酒精1h,2.透明：二甲苯30min二甲苯30min3.浸蜡：石蜡40min石蜡40min石蜡40min,三、脱水、透明及浸蜡,固定,脱水,透明,浸蜡,包埋,切片,取材,四、包埋（示教）,五、HE染色原理,苏木精（Hematoxylin）伊红（Eosin）,碱性染料,紫蓝色嗜碱性basophilia,酸性染料,红色嗜酸性acidophilia,胞核中染色质和胞质中的核糖体等,胞质中的膜性结构（线粒体、溶酶体、滑面内质网和细胞外基质,HE染色基本过程,1.脱蜡：二甲苯二甲苯2.复水:100%乙醇100%乙醇95%乙醇95%乙醇80%乙醇70%乙醇蒸馏水3.染苏木精4.分化与返蓝：盐酸酒精分化流水返蓝5.脱水：蒸馏水70%乙醇80%乙醇6.染伊红7.脱水、透明：95%乙醇95%乙醇100%乙醇100%乙醇二甲苯二甲苯,HE染色流程,1.脱腊，复水,二甲苯,二甲苯,100酒精,100酒精,95酒精,95酒精,80酒精,70酒精,蒸馏水,1010101055555,2.染色苏木精(水溶液）10自来水（PH7)30（返蓝）蒸馏水70酒精580酒精5伊红(95%酒精配
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