RPA――PCR技术的革命

RPAPCR技术革命指的是RPA，为什么RPA是技术革命，与应用有关，RPA是什么？ PCR技术诞生已经过去30年了。 从古典PCR、实时定量PCR到现在的数字PCR，该技术不断变化，但我们的视野不灭。 RPA (recombinasepolymerasempleification )的全名重组酶聚合酶扩增技术被称为替代PCR的核酸检测技术。 RPA技术主要依赖于能够结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶单链DNA结合蛋白(SSB )链取代DNA聚合酶这3种酶。 这3种酶的混合物在常温下仍有活性，最佳反应温度为37C左右。 RPA的原理、预应用程序分析、2006、引物设计RPA分析的要点是扩大引物和探针的设计。 PCR引物通常应达到30-38个碱基，因为RPA引物比普通PCR引物长。 引物过短会降低重组率，影响放大速度和检测灵敏度。 在设计RPA引物时，改性温度并不是影响扩增引物的重要因素。 RPA的引物和探针设计不如传统的PCR成熟，用户需要自己触摸条件进行优化。 speed 10 to 15 mintedtectiontitysentitysinglemoleculecostcapaccessssaslittlernohardwareisrequiredsinscompicitystabilictionformat onroverstosscontandtemproterfulticationsportityhindelinstrumentationordisposabletests RPA为什么是技术革命、RPA的具体应用、Clinical、foodsafa Bloodbankscreening、Environmental、animal health recombinasepolymerasempleification (RPA ) OFC amv-35 sproomotardnosterforrapproditidectionofgeneticalymodifidcops，ChaoXu1，liangli 1，2，Wu junjin 12 andyusongwan 1，2， *1biotechnologyresearchinstitute，chineseacademyofagriculturalsciences，Beijing100081，China； E-Mails:xuchao1667(C.X.)； 李良 (l.l.)； jinwu jun (w.j.)2inspricectionandtestingcenterforenvironmriscassessmentofeneticommicroorganisms (Beijing )，ministryofagriculture 1.introduction theinternationalserviceforhecquitionityofagri-biotechnicalapplications (isaa ) estimatesthatmillionoffarmerscultivatedgeneticallymodified (GM ) cropsovermorethan 170 millionchecktaresacross 27公司in 2013； themajorgmcropspecieswerecanola，maize，cotton， andsoybean1 .althoughthepolymerasehainreaction (PCR ) isofthemostwidelyusedamplificationmethodsforgmoscreeningdetection 3， thenetperfordelicatecompentecompentandcomplecicatedproceduresimittheuseofscompantificationinpoint-of-useandfield andhighligheee osionaddfereferearinformatingtandnecessary 4、themostfrequentlyusedmethodfordetectinggmomaialisscreeningforthecamv-35 s promotect fromthecauliflowermosaicvirus (camv ) andthee3non-transatedregionofthenopalinesynhasegene (t-nos ) fromagrobacteriummefaciens 11 . in this wedescriversitiondelovepmentofareal-timerpassaytodetectp-35 sandt-nossequencesforpurposesofgmoscreendingandetection 2.2.sensitivityvityoftherpassays， 2.3.applicationtopracticalsampleanalysis 3.1.materials 3.2.extractionofgenomicdna 3.3.oligonucleotideprimersandprobesperallatimefect deaforwardprimer， areverseprimer anda probe.3.4.rpaassaysrparactionswerepreformedinatotalvolumeof 50lusingatwistampexokit (twist rid、Cambridge、UK )， 29.5lofttwistamprehydrationbuffer 420 nmeachrpaprimer，120nMRPAprobe，14mMmagnesiumacetate， and1logenomicdna.mix freeze -直连矩阵体系结构adddmingsiumacetateandrehydratedmaterialtwistabescannerdevice (39 cfor 15至25 mm ) fluorescenemeasurementsweretakenevery 20 s，aprobitregexpression，3.experiencesection，4.ConclusionsInth