血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程

33、血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：血清肌酸激酶同工酶测定(缩写CK-MB), 组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。临床医生根据需要提出检验申请。2 标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1 常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2 标本保存2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2 标本保存时间：室温（1525）下可稳定4h，普通冰箱中（28）稳定8h。-20保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置48冰箱内保存7天。2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。3 方法原理试剂中抑制CK同工酶CK-M的抗体，完全抑制CK-M的活性而不影响另一种CK同工酶CK-B的活性。CK-B在两个工具酶的参与下，通过下面三个反应式所表示的反应，最后使NADP转化成在340nm波长处有光吸收的NADPH，在340nm波长处连续监测NADPH吸光度的增加速率，推算出CK-B的活性。所得结果乘以2即得CK-MB的活性。4 试剂及其他用品4.1 试剂盒名称：利德曼肌酸激酶同功酶（CK-MB）试剂盒，北京利德曼生化技术有限公司出品。4.2 试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2-8可稳定至有效期。试剂开瓶后，在仪器冰箱试剂仓中可保存28天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，或起始吸光率0.8时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3 试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备4.4 试剂盒主要成分：组 成R1:R2=4:1混合后溶液的浓度 咪唑缓冲液:100mmol/L PH=6.7 醋酸镁10mmoll/L N-乙烯半胱氨酸（NAC） 20mmol/L EDTA 2mmol/L NADP 2mmol/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）1500U/L 己糖激酶（HK） 2500U/L 抑制CK-MM的人抗体 2000U/L 葡萄糖 20mmol/L 肌酸磷酸30mmol/L 二腺苷-5-磷酸 10umol/L AMP 5mmol/L ADP 2mmol/L 5 校准品与校准模式 校准品：不使用校准品，以NADPH的双波长（340/380nm）摩尔吸光系数计算CK-MB活性6 质控品与室内质控规则6.1 质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3 质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4 质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断7 适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。8 标本检测步骤装载试剂 进行校准 进行质控 输入标本检测项目 加载标本 标本测定 结果复核 报告。 9 主要分析参数参见说明书。10 结果计算计算公式：CK-MB(U/L) 公式中A/min即单位时间中吸光度降低的值，VT为总反应体积ml（试剂总量标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，为NADPH的340/380nm测定的毫摩尔消光系数。K值即因子。仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围11.1 结果的报告11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1000U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12 操作性能12.1 精密度：批内CV0.55%，批间CV4.51%。12.2 线性范围：0-1000U/L(ORDAC为115-286U/L)。12.3 方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响12.4 灵敏度：肌酸激酶同功酶浓度为500U/L时，吸光度变化率A340nm/min为0.0540.066。13 参考范围及医学决定水平参考范围：0-20 U/L 14 临床意义14.1 CK-MB是诊断急性心肌梗死（AMI）重要的酶学指标，血清CK-MB水平升高曾是AMI的实验诊断“金标准”指标，但现在已被心肌肌钙蛋白取代。另外，临床上认为CK-MB的质量测定值也比酶活性更具诊断意义。14.2 在急性心肌梗塞胸痛发作46h，病人血清CK-MB先于总CK活性开始升高， 24h达高峰，至48h基本回复至基线水平。CK-MB持续不降，或下降后又再度上升，提示有心肌梗塞扩展或有新的梗塞病灶。14.3 如果胸痛患者在48h内无CK-MB升高，或CK-MB小于CK总活性的2%，即可排除急性心肌梗塞的诊断。临床上常以CK-MB超过CK总活性的3%（离子交换柱层析法）或10%（免疫抑制法）作为急性心肌梗塞的诊断依据。14.4 用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。14.5 各种类型的心脏手术后可引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。14.6 进行性肌营养不良病人血清CK-MB水平也常升高。15 结果审核以及分析与相关项目的联系15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2 认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3 相关项目：审核与心肌酶谱其他酶的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16 无威胁生命的“紧急值”及报告规定17 有关引用程序与文件17.1 Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操作程序。17.3检验结果审核程序。17.4标本送检和