荧光素标记抗体方法_第1页
荧光素标记抗体方法_第2页
荧光素标记抗体方法_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

荧光素标记抗体技术(一)原理 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。(二)操作步骤将纯化的IgG抗体对PH99.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中称取适量IFTC，加入二甲亚砜(DMSO)(FITC1mg/1ml DMSO)使终浓度为1mgFITC1mlDMSOFITCIgG比例:如IgG浓度为1mgml，FITCIgG比例约为50gFITCmgIgG；如IgG为510mgml，则比例为25gFITCml IgG在10ml小烧杯中先放入抗体按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h用PD10柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定FP比值。第二个荧光素峰为游离荧光素计算:2.87A495FPA280-0.35A495合适的FP值为24。(三)试剂器材1.纯化的多克隆抗体或单克隆抗体。2.FITC(Fluorescein-5-Lsothiocyanalte)或其它荧光色素。3.PBS、DMSO4.PH99.5碳酸盐缓冲液: Na2CO34.3g，NaHCO3 8.6g加蒸馏水至500ml。5.PD10柱(Sephadex G25柱)6. 磁力搅拌器，紫外分光光度计等(四)注意事项1.FITC保存于4暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。2.FITC-DMSO液要临用时配制。3.碳酸盐缓冲液要新鲜配制。（学习的目的是增长知识
人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论