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文档简介

1、0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4冰箱中。需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。 “PBS”缓冲液PH7.67.47.27.0H2ONaClNa2HPO4NaH2PO410008.52.20.110008.52.20.210008.52.20.31000 ml8.5 g2.2 g0.4 g2、磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)试剂: NaH2PO42H2O Na2HPO412H2O配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB),根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。(1)0.2mol/L的 Na2HPO4;称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。(2)0.2mol/L的 Na2HPO4:称取NaHPO4.12H2O 71.632g(或 Na2HPO47H2O 53.6g或 Na2HPO42H2O 35.6g)加重蒸水至1000ml溶解。(3)0.2mol/L pH7.4的PB的配制:取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO412H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB(pH约为7.47.5)。若pH偏高或偏低,可通过改变二者的比例来加以调整,室温保存即可。0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.78.0)pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.7 3、0.1mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)的配制方法一1、 首先配制0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PB)试剂:NaH2PO42H2O Na2HPO412H2O配制方法:先配制0.2mol/L的NaH2PO4(A液)和0.2mol/L的Na2HPO4(B液),两者按一定比例混和即成0.2mol/L磷酸盐缓冲液。A液:称取NaH2PO42H2O 31.2g,加双蒸水充分溶解定容至1000ml;B液:称取Na2HPO412H2O 71.632g,加双蒸水充分溶解定容至1000ml;2、 0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PB)的配制:A液为碱性,B液为酸性;取A液和B液在pH计的监测下按一定比例进行混和,可得到所需的不同pH的0.2mol/L的PB。pH7.4所需A液和B液为19.0ml和81.0ml0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.78.0)(PB)pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.7 3、 0.1mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS):试剂:0.2mol/L PB 500ml NaCl 8.59.0g(约0.15mol/L) 双蒸水 加至1000ml配制方法:取0.2mol/L PB 500ml,加入300ml双蒸水及NaCl 8.59.0g,充分搅拌溶解后加入双蒸水定容至1000ml。一般情况下,0.2mol/L PB的pH值稍微高些,稀释成0.1mol/L PBS时,常可达到要求的pH;若需调整pH,通常是调PB的pH。4、 参考: 朱立平,陈学清主编,免疫学常用实验方法,北京:人民军医出版社,2000.3方法二1PBS(0.1M,pH 7.4)贮存液配方(10倍浓缩)NaCl 80g Na2HPO4.12H2O 32.3g NaH2PO4.2H2O 4.5g 加蒸馏水至 1000ml或者NaCl 80gNa2HPO4.2H2O 11.5gKH2PO4 2gKCl 2g加蒸馏水至 1000ml贮存液室温下保存一个月2PBS工作液(0.01M,pH 7.4)取贮存液10倍稀释后24小时内使用 方法三溶液A:0.2mol/LNaH2PO4(27.8g NaH2PO4;或者36.14g 2水合NaH2PO4 溶于1000ml水中)溶液B:0.2mol/LNa2HPO4(53.65g 7水合Na2HPO4或者71.7g 12水合Na2HPO4溶于1000ml水中)溶液A与B按下表比例混合后,用水稀释至终体积为200ml体积A(ml)体积B(ml)pH87.712.36.085.015.06.181.518.56.277.522.56.373.526.56.468.531.56.562.537.56.656.543.56.751.049.06.845.055.06.939.061.07.033.06

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