汉坦病毒实验活动风险评估报告

汉坦病毒实验活动风险评估报告一、生物学特性(a)类型和病毒分类汉坦病毒被归类为Bunyaviridae和Hantavirus的RNA病毒。这种病毒的名字来自汉坦病毒(Hantaan virus)中的原型病毒汉坦病毒(hanta an virus)。汉他病毒根据血清型和基因型分为22个病毒种类。汉他病毒在临床上引起两种急性传染病。一是肾综合征出血热、出血、急性肾功能障碍、免疫功能障碍(HFRS)、流行性出血热(epidemic hemmorrhagic fever，epidemic hemmorrhagic fever)另一种是hanta virus pullmonary syndrorome，HPS，这种病的特点是肺部浸润和肺间质水肿的迅速发展，呼吸困难、衰竭。我国尚未报告HPS病例。以下主要是对HFRS的说明。(b)来源1976年，韩国学者李虎王等人首次成功地在黑黑线姬鼠身上发现了肝他病毒抗原，接着用A549和veroe-6细胞分离了汉他病毒株(78-116株)。该菌株在汉坦河附近的肾脏综合征出血病区分离，因此被称为汉坦病毒，成为汉坦病毒的代表性病菌。(c)传染性HFRS主要是宿主动物和感染源是啮齿动物，啮齿动物中主要是老鼠科的老鼠，仓鼠科的白足鼠属。目前，汉坦病毒已从世界各地的啮齿动物(鼠标、老鼠、田鼠)中分离出来。(d)通信路径HFRS的传播途径还没有完全确定，目前认为可能的方法有三类：呼吸系统、消化道、通过伤口途径进行动物源性传播、垂直(胎盘)途径和昆虫媒介(螨虫媒介)。其中，动物性传播通过唾液、尿液、粪便等传播病毒的动物排出病毒污染环境，人或动物通过呼吸系统摄取通过消化道感染的动物，或直接接触感染，感染病毒的孕妇可以通过胎盘将病毒传给胎儿，毒孕鼠也可以将病毒传给胎儿。HFRS患者的血和尿中可以分离病毒，但人类-人类水平的HFRS传播很少，最近仅在一个群体的例子中发现了人类间传播的证据。(e)感性人群一般易感性，但隐性感染较多，在流行地区银星感染可能达到3.5%-4.3%，比较少数的发病，对男性来说，壮年农民、工人、动物学家、现场生物工作者都会得这种病。发病率高，四季都有可能发生，正常人口的隐性感染率取决于病毒类型和生产、生活条件，病后可获得持续免疫力，一般2次发病病例很少。(6)潜伏期HFRS潜伏期为几天 6周以上，一般为2周左右，疾病发展迅速，典型病例有发热、出血、肾脏损伤三大疾病，典型的临床经过分为发热期、低血压休克期、尿期、多尿期、恢复期。(7)剂量-效果关系根据传染病和研究室的研究结果，汉坦病毒感染量越大，就越容易导致人员感染，感染程度上存在人体差异。(8)致病性汉他病毒感染会引起肾综合征出血热(HFRS)和汉他病毒肺综合征(HPS)等两种严重的疾病。发病机制尚未深入研究，目前肺被认为是本病的主要靶器官，肺毛细血管内皮细胞是HPS相关病毒感染的主要靶细胞，感染后各种细胞因子的作用，导致肺毛细血管通透性增加，导致大量血浆流出，流入肺间质和肺泡内，引起心源性肺水肿。重症患者死于37d，幸存者没有后遗症，迅速恢复。(9)可变性目前还没有有关汉坦病毒变异的确切科学信息。(10)环境稳定性汉坦病毒抵抗力不强。56 60 到1h，紫外线照射(50厘米，1h)均可禁用病毒，4 20 时相对稳定，37 以上，pH 5.0以下，容易关闭。(11)药敏用利巴韦林等抗病毒药早期抑制了病毒。(12)消毒剂灵敏度汉他病毒对酸(pH3.0)、醚、氯仿、丙酮、苯等脂质溶剂敏感，对酒精、碘化等消毒剂敏感，而苯扎溴铵等普通消毒剂对病毒灭活也有效果。(13)物理灭活汉坦病毒散热弱，在4 20 比较稳定，在5630分钟或100 1min 1分钟和紫外线照射(50厘米，1h)下也可以禁用。(14)在宿主体内进行体外生存将发烧患者的血清、血细胞、尿液等分离为Vero-E6细胞或A549细胞，接种汉他病毒。(15)与其他生物和环境的互动动物性传播途径主要通过呼吸道，也可以通过消化道和受损皮肤。被啮齿动物粪便污染的空气以气溶胶或粒子的形式吸入人体，感染疾病。(16)预防和治疗方案1预防措施一般采取预防措施主要包括灭鼠、灭鼠、灭虫、灭虫、消毒和个人防护措施。动物学家和现场生物学家们不想碰老鼠和粪便。医护人员接触患者时要注意隔离。目前，HFRS疫苗主要使用细胞培养灭活双价疫苗(韩炭型，韩糖型)。疫苗在人体接种后可以产生特定抗体，对预防HFRS效果很好。汉坦病毒汉坦型和汉坦型疫苗对汉坦病毒肺综合征的各种病毒没有相互免疫作用。因此，有必要继续开发有效的疫苗。2治疗方法还缺乏特异性治疗。HFRS早期患者一般在床上休息，接受以“液体疗法”(注射调节水及电解质平衡)为主的综合症状治疗。利巴韦林有一定的功效。利巴韦林可以在病程初期使用，使用心肺机后没有效果。目前的治疗方法都属于支持治疗，特别是呼吸周期支持，可以日常使用氧疗和机械通气疗法。国内开发的“注射用抗肾病综合征出血热病毒单克隆抗体”在完成第三期临床试验后，结果显示，安全性和疗效正确，优于常规治疗剂。2.与实验相关的活动风险评估和风险管理(1)实验室感染因素的类型、来源和风险1.感染因子的种类以汉坦病毒特性和本中心实验检测能力的范围为基础，本实验可能的感染因子是汉坦病毒病原体本身。2.感染因素的来源(1)用于检测汉他病毒抗体的血液样本，包括全血、血清和血浆。(。(2)样品收集和样品测试过程中涉及的所有实验场所。(3)实验操作中可产生的含病毒气溶胶。感染因素造成的危险(1)污染的实验设备、仪器等污染实验室环境。(2)实验室废弃物对环境产生污染。(3)带有实验室病毒的气溶胶污染实验室环境。(2)实验室日常活动中的风险评估和控制1.实验方法(1)危险点识别国家标准、采用行业以外未确认的其他实验方法，或者在使用国家标准之前未进行技术确认，则操作时可能存在安全风险。(2)风险管理措施应尽量采用国家标准、行业标准或完全验证的实验方法，在使用新的或变更的国家标准、行业标准之前，进行严格的技术确认。2.收集样品(1)主要实验设备和设备一次性血针、真空采血血管、消毒海绵紧急一次性武器箱。(2)采血员的出血不成熟、不规则、HFRS患者的血液污染皮肤、粘膜，或被包含HFRS的血液污染的针扎进皮肤，有感染汉坦病毒的危险(虽然可能性很小)。(3)使用风险管理和测量一次性采血针和真空采集血管，取样人员接受常规采血训练，掌握采血技术。采血前要做好个人防护(防护服、乳胶手套、口罩)，认真、慎重、小心地操作，将抽血的针直接放入武器箱，禁止用手直接触摸使用的针头，或者重新插入使用的针头；采完血后直立在测试架上，防止翻转；将消毒棉棒等污染物质放在医疗废物专用包里统一消毒。样品包装和运输(1)主要实验设备和设备真空密封采矿血管、95千帕样品运输罐(UN2814运输罐)、a类样品运输箱(UN2814冰箱)、运输车辆。(2)主要危险点识别包装不符合生物安全要求时，样品的翻转、泄漏会导致污染扩散。(3)风险管理措施严格按照生物安全要求，样品使用a类要求包装和运输。a类3容器包装如下：第一层使用真空采血管样本，应防止泄漏。第二层采用95千帕样品运输罐，可容纳和保护一层容器，密封不易破裂，压力泄漏，易于消毒。第三层采用a级标本运输箱，易于保管、保护、固定和消毒第二层集装箱。样品必须用中心车辆运往实验室。4.接收样品(1)主要危险点识别运输过程中，如果样品管道意外破裂或血液泄漏，可能会对样品接受者造成污染。(2)将风险管理措施样品带到实验室，由检验员接收，仔细检查样品和检验清单。收到样品前，请进行个人防护(戴防护服、戴手套、戴口罩)，在生物安全柜中打开容器，检查样品管是否破损或泄漏。如果样品管道破损或样品泄漏，请立即将保存的样品移出，对样品管道和服装容器等与污染有关的所有器具进行消毒。同时，按“二级生物安全实验室建设和管理”实验室事故处置场处置。5.样品测试(1)主要实验设备和设备离心机、生物安全柜、吸管、洗衣机和微板阅读器等设备。(2)确定主要风险点1)在血液离心力的过程中，离心管意外破裂，血液样本溢出，污染离心机腔，或在高速离心力的情况下形成气溶胶，污染环境。(2)添加风格操作不当，血液样本飞溅或添加到板孔外部，污染人或实验环境。3)洗板或阅读板时溅出液体，污染设备表面或工作台。(3)风险控制措施1)检查人员严格进行实验前个人防护(戴防护服、戴手套、戴口罩、脚背不暴露，复盖脚背、防滑、防漏工作鞋)。样品主容器和样品采集、液体移动工作必须在生物安全柜中进行，动作轻微，防止内容物飞溅；吮吸板块，读取结果时轻轻拿起酶板，防止液体溅出。2)使用生物密封离心机、离心压力和带螺旋管罩的离心管进行离心前平衡，选择正确的离心速度和离心力。3)在任何可能喷出潜在传染性物质的手术中，要好好保护脸部、眼睛、嘴。发生液体溅出、溢出等事故或明显暴露在感染源的情况下，应立即向部门负责人报告，及时处理事故发生和处理，必要时进行适当的医学评价、观察和治疗，并保存书面记录。6.储存范例(1)主要实验设备和设备生物安全柜、吸管、螺旋盖PV冷冻保管管和密封制冷保管箱。(2)主要危险点识别阳性样本，错误的阳性质量控制产品，使用错误的阳性样本，恶意使用造成的污染扩散。(3)风险管理措施严格做好个人保护，样品保管必须在生物安全柜内工作，动作要轻。所有样品都保存在螺丝盖PV冷冻保管管内，放在密封的塑料冷冻保管箱内-20以下，妥善保存，实行严格的双重锁管理，及时将所有样品送到上级实验室。7.发送阳性样品(1)具有主要实验设备和设备螺旋盖的塑料管道、95千帕样品运输罐(UN2814运输罐)、a类样品运输箱(UN2814冰箱)、运输车。(2)如果主要危险点识别包装未标准化，或者运输方式没有安全性，则容易发生污染扩散或样品丢失。(3)严格执行风险管理措施阳性样品三层包装(收集相同产品)，携带“可能感染人的高致病细菌(有毒)种或样品运输许可证”，由电车运输，由专业人员全程护送。实验室清洁消毒(1)主要实验设备和设备70%75%酒精，西康清洁消毒剂1。(2)主要危险点识别工作结束后，如果不及时消毒台面或生物安全柜，下一个工作人员可能会受到污染或感染。(3)危险控制措施完成后，应立即消毒与检查相关的工作台、地面、生物安全柜，使用100倍稀释的西康清洗液1擦拭，用消毒药清洗，然后干燥20min以上。生物安全柜用70%75%的酒精擦拭消毒，考试和消毒结束后，脱下手套，脱下防护服，用肥皂和水正确洗手。9.实验室废物处理(1)主要实验设备和设备医疗废物专用包、硬高压和漏电保护垃圾桶、高压灭菌器。(2)主要危险点识别剩余阳性样本管是高风险污染源，存在血液采针处理环境污染不足、人员被刺、甚至感染位置病原体微生物的危险；废物的非标准处理会污染环境。(3)实验室产生的所有废弃物，包括风险管理措施抗体检查取样和不再需要的样品、酶反应板和其他项目，均视为污染物。废弃物应放置在贴有“生物缺陷”标志的医疗废物专用口袋的坚固高压和防漏垃圾桶内，121高压灭菌1520min将从实验室出来，集中放置在医疗废物室，可以对合格的医疗废物处理单位进行现场收集、集中处置。装有武器的一次性武器箱禁止与上述垃圾一起重新打开；处理废弃物，做好交接记录，定期整理所有相关记录，保管。(c)实验室日常活动中的其他风险评估和预防措施1.电气(1)主要危险点识别电源关闭或电压不稳定导致电气设备故障的危险。由于停电，正在工作的生物安全柜、微型平板阅读器、洗衣机等生物安全保护设备、测试设备的工作突然中断，实验活动中断，传染性物质泄漏，有污染工人和环境的危险。(2)预防措施实验室，在双插槽主电源和重要设备设备设备上配备应急电源(UPS)，以防止因电源中断而引起的生物安全风险，并顺利进行测试工作。2.电气操作(1)确定与实验室活动相关的电气工作，包括主要危险点实验室工作区的电气设备启动、关闭、安装和维修。设备层内UPS、空调单元等电气设备的启动、关闭、维修等。在这种电气操作过程中，可能会发生电击、电击、电故障等危险。(2)预防和控制措施1)电气设备设计和制造符合相关安全标准。如果实验室工作