猪伪狂犬病防控探讨---临床篇参考幻灯片

猪伪狂犬病防控探讨-临床应用篇,陈家锃博士/主任150662538122017年8月22日,1,个人介绍,1、预防兽医学博士，师从童光志所长、李一经院长和田志军研究员；2、从事高致病性蓝耳病HuN4-F112的研制及大量的临床试验工作；3、参加国家中长期项目（2008-2020），猪瘟和伪狂犬净化工作；,2,2011年所在团队最早发现了猪伪狂犬变异株，并开展疫苗的研制和伪狂犬疾病的防控工作,国际首次报道IF7.327,国内首次报道,VirulentPseudorabiesvirus(vPRV)（超强毒）PseudorabiesVirusVariant（变异株）,3,目前主要从事猪病的临床防控及实验室诊断工作擅长的领域：猪场的免疫程序评估及调整猪疫苗评估的动物实验设计病毒性疾病诊断及综合防控,4,每个猪场都面临伪狂犬感染的威胁不同猪场和感染的不同阶段的表现如何通过实验室确诊和防控伪狂犬如何科学地发挥伪狂犬疫苗的作用伪狂犬“五步法转阴”及注意事项,主要内容,5,一、每个猪场都面临伪狂犬感染的威胁,伪狂犬病毒的特性：1、病毒对外界的抵抗力强从发病猪排泄的病毒，3710天，2540天，15120天仍存活；2、伪狂犬的中间宿主多，散毒方式多样,猪最具耐受性，是自然界病毒唯一的贮存宿主。此外，牛、羊、马、狗、猫、鼠等都能被伪狂犬病毒感染并散毒,体内可在多个脏器内繁殖，繁殖快。散毒途径多样，可通过唾液、精液等方式散毒,6,自然感染的途径：经鼻感染和经口感染空气传播老鼠的传播苍蝇的传播虱子传播妊娠猪感染给胎儿的途径：交配时感染病毒的持续感染通过白血球传送病毒（病毒血症时间短，很难检测到）,通过神经节传播，很难防控病毒在初感染部位的鼻粘膜，咽喉头粘膜，扁桃繁殖，其次在其附近的淋巴结繁殖。在上部呼吸道繁殖的病毒借助三叉神经，嗅觉神经，舌咽神经到达中枢神经，引起脑炎。增殖的病毒如果到达肺部，在肺部迅速繁殖，引起肺炎。,7,少量的病毒即可感染大量排毒潜伏感染隐性感染,3、病毒在猪体内的特征：,8,接种病毒量和感染成立（岛田，2006）,伪狂犬病毒的最低感染剂量只有猪蓝耳的1/30,注：任何疾病都有感染的最小剂量，低于最小剂量后猪不会感染，更不会发病；,9,仔猪感染后短时间内会呈百万倍地排毒,PRV接种后病毒分离阳性率及病毒排泄量（岛田，2006）,感染3-5天的口腔试子和鼻腔试子排毒量4.0-8.0Log10TCID50，感染8-17天的口腔试子排毒量5.9-8.3Log10TCID50，感染18-25天的口腔试子排毒量6.0Log10TCID50，高峰时空气中的病毒量为5.3Log10TCID50按照极致计算，一头猪感染后的3-5天的排毒量可以感染100万头生猪,10,被感染猪不表现临床症状，病毒粒子本身检测不到，但感染猪终生带毒。病毒的遗传子潜伏在神经细胞内，当免疫低下时，遗传子再活性化引起在感染。被感染猪表现亚临床症状，这种带毒猪可持续一年以上排毒。潜伏感染猪和隐性感染猪成为污染源,11,PRV的侵入途径-种猪引进和育肥猪散毒是已知的主要传染源,（美国农务省的调查结果）,一点式饲养散毒风险大,伪狂犬阴性场引进后备必须经过检测确定为伪狂犬阴性!,12,综上所述，大多数猪场都存在伪狂犬发病的风险；中小规模猪场的风险尤为突出；,小结,伪狂犬病毒感染剂量低，中间宿主多，猪感染后排毒量巨大，进入猪场途径多，猪场内传播快，公猪传播途径容易被忽视；,13,变异株的流行导致发病率持续上升,2011年以前，由于疫苗普遍接种（很多猪场仔猪只做一针的情况下）临床典型病例已较少；配合鉴别诊断技术，很多猪场实现了伪狂犬转阴或者净化；,14,变异株的流行导致发病率持续上升,自2011年底自北向南猪场陆续出现伪狂犬；经过鉴定不同省份分离的毒株都是高度同源的变异株；,2011年底最初发生的省份,至2015年伪狂犬变异株的分布,15,PRVHeN1和S株对小鼠的LD50测定,PRVHeN1和SC株Vero细胞培养液的毒价测定分别为107.6TCID50/0.1mL;106.8TCID50/0.1mL。将原液稀释为106.0、105.0、104.0、103.0、102.0、101.0TCID50/0.1mL；30只5周龄BALB/c小鼠，随机分为6组，每组5只，皮下注射各稀释度病毒0.1mL；逐日观察小鼠症状及死亡情况。PRV-HeN1株对小鼠的LD50经计算为102.4TCID50/只。PRV-SC株对小鼠的LD50经计算为103.8TCID50/只。,变异株伪狂犬的致病力更强，致死剂量为国家校检毒株SC株的1/30,16,Tong,etal.,Vet.Microbiol.181(2015)236240.,变异株对仔猪的致死率更高,17,注：1、实验设计、免疫剂量和攻毒剂量均参照BarthaK61疫苗质量标准；2、绵羊对伪狂犬感染是致死性的3、免疫是单针肌注免疫,现有质量标准的疫苗对变异株(HeN1)的攻毒保护效果欠佳,18,2014年7月-2015年的检测数据统计,19,2016年检测数据统计数据,20,伪狂犬变异株的临床症状变化,初次感染场特别是野毒抗体阴性场，损失惨重。母猪以流产、死胎木乃伊胎为主；仔猪出生后3-5天神经症状，腹泻、呕吐，死亡率100%；伪狂犬野毒抗体呈阴性猪场，迅速转阳，一个月内gE抗体阳率超过50%。感染后1年产房逐渐平稳（但持续感染的影响在继续）神经症状比例减少，腹泻比例增高；保育及育肥猪干咳及继发感染严重；,21,长期免疫抑制or传胸混感？,可致死大量育肥中后期猪母猪屡配不孕，返情率高产房仔猪顽固持续性腹泻猪群精神抑郁具有攻击性,22,规模化场和中小规模的猪场表现的问题不同,规模化场具有较强的处置能力与诊断能力反复加强免疫种猪4次/年，仔猪3次/年加大剂量免疫种猪3头份/次，仔猪2头份/次实际效果：注射时应激大，多次注射，操作麻烦；可控制临床主要症状（如流产及仔猪神经症状等），但偶有干咳、腹泻等症状120-150日龄猪群转阳率高居不下。,23,中小规模场主要问题误诊为其他疾病,呼吸道症状和繁殖障碍（母猪流产、返情）容易误认为是蓝耳和圆环,24,伪狂犬引起的腹泻与PEDV症状相近，容易被经验所蒙蔽,检测中心二月份采集很多疑似PEDV的病料，最终检测结果为伪狂犬引起的腹泻,25,近年来伪狂犬发病率高，带毒率高，已成为危害我国生猪养殖的最重大疫病之一；伪狂犬病在呼吸道、消化道、繁殖障碍类疾病中的病原检出率较高，部分症状与蓝耳和PEDV类似；伪狂犬变异株发病重要的特点：必然的几个阶段：流产-木乃伊和神经症状-顽固性腹泻和育肥干咳-长期感染散毒导致育肥期猪群的死亡；感染后的猪场呈亚临床发病，主要问题是仔猪顽固性腹泻和保育及育肥猪干咳。,小结,26,三、如何利用实验室检测防控伪狂犬,常用的伪狂犬检测方法：ELISA：gB抗体，gE抗体中和抗体检测病原检测：普通PCR与荧光定量PCR病理切片,27,三、如何利用实验室检测防控伪狂犬,伪狂犬疫苗是少有的可通过抗体检测区分野毒和疫苗毒的疫苗,目前大多数伪狂犬疫苗是缺失gE基因的，因此疫苗免疫不会产生针对gE基因的抗体，因此可以通过鉴别诊断技术确定猪场的感染情况。那么检出野毒抗体意味着什么？是不是猪群在发病或者仔猪感染？,28,野毒抗体检测的误区,阳性猪场检母猪的抗体伪狂犬一旦感染终生带毒，野毒抗体持续为阳性母猪，不可能通过免疫将野毒阳性的母猪转阴，更不能因为母猪野毒抗体是阳性就判断猪场有问题；阳性场90日龄之前的仔猪判断为伪狂犬感染伪狂犬的母源抗体持续期长，母猪野毒抗体阳性仔猪必为阳性，但不能确诊为野毒感染；,29,野毒抗体检测的应用范围,接种PRVHeN1后，第5天部分猪PRVgE抗体开始阳转，第7天全部阳转。猪场检测PRV野毒是否正在流行应以检测后备猪(14-18周)gE抗体为主，超过15%为正在流行。阳性的母猪可产出阴性的后备，通过这一指标可评价疫苗的保护效果,阳性场,30,野毒抗体检测的应用范围,野毒阴性场可用于监测新引进种猪：凡阳性必淘汰，剩余公猪可反复间隔2周检测，均为阴性可用；仔猪按日龄采血，确定猪场的感染阶段，采取针对性措施；,31,普通PCR和荧光定量PCR样品：扁桃体（持续带毒），肺脏（呼吸道症状），脑组织（神经症状），鼻腔试子（育肥期检测），精液（如血清抗体gE阳性，必检）感染压力评估时用荧光定量PCR误区：伪狂犬的病毒血症期极短，血清样本往往检测不到病原；公猪精液的病原检测容易被忽视病原检测是测序的基础,病原检测的误区及应用范围,32,四、伪狂犬疫苗的作用及正确应用,1、伪狂犬病疫苗可有效保护强毒的攻击而免于临床发病。2、弱毒疫苗的保护效果比灭活苗好且免疫持续期长3、伪狂犬活苗注射免疫会受到母源抗体的干扰，滴鼻免疫是有效的免疫途径（1）不受母源抗体干扰；（2）建立黏膜免疫阻止病原经过呼吸道传播途径；4、伪狂犬的母源抗体持续期特别长，在感染压力比较大的场，为尽早肌注免疫，建议在妊娠中后期母猪不要免疫伪狂犬疫苗；5、伪狂犬是少有的几个可以做紧急免疫的疫苗，断奶后仔猪出现伪狂犬引起的干咳及腹泻症状或瘙痒症状，紧急注射伪狂犬可有效缩短病程和发病率；6、对育肥猪注射伪狂犬疫苗，特别是一点式猪场；,33,五、伪狂犬“五步转阴”法,34,伪狂犬温和净化的关键点,1、疫苗株要能有效压制散毒-不扩大感染压力2、快速产生主动保护-通过佐剂缩短空窗期3、阳性母猪可产阴性后备-阴性后备补充4、控制公猪精液传播-预防再次感染母猪群5、按照产次自然淘汰-逐渐降低猪群的风险6、生物安全灭鼠工作-保卫净化成果7、配套的检测方法-评估猪场感染压力,35,感染压力分析,保证后备的阴性,阳性母猪随产次自然淘汰,定期抗体监测,1,2,3,4,5,伪狂犬“五步转阴”步骤,活跃度评估,压制散毒,后备净化期,稳定自然淘汰期,验收监测期,公猪淘汰及疫苗压制（包括育肥）、生物安全,36,第一次种猪伪