临床微生物项目与样本采集规范

临床微生物项目与样本采集规范,汇报提纲,2,02,03,微生物新项目组合,微生物项目采集规范,01,微生物新技术,3,1,微生物新技术,MALDI-TOF-MS16S rRNA和真菌ITS/D2（28S)测序,微生物新技术,4,微生物质谱仪,16S rRNA,6,判断16S rRNA序列扩增是否成功：经琼脂糖凝胶电泳在1500bp附近出现条带，说明16S rRNA已经扩增成功。由于16S rRNA序列长度一般1500bp左右。,7,GCATGCGGCGTGCTATACATGCAAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATTGGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGTTTGAAAGATGGCTTCGGCTATCACTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCTGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTAGGAACCAGCCGCCTAAGGTGACAGAGATGG,16Sr DNA测序获得序列,8,BLAST比对,9,苛养菌、厌氧菌、少见菌,10,杭州艾迪康少见菌分享,11,眼科医院角膜组织-链格孢霉,12,纤毛菌血培养,13,女性.65岁，尿液标本,苛养菌、少见菌 艾迪康微生物实验室,14,伤口分泌物，泥土味很重，咬琼脂，G+杆菌。链霉菌,15,16,2,微生物项目组合,临床标本的分类,17,临床微生物检验项目,18,临床微生物检验项目,19,临床微生物检验项目,20,若只送阳性菌株鉴定的情况，请按16S测序（自主定价）或微生物质谱。,21,22,3,微生物项目采集规范,临床医生最不能接受的微生物报告结果:1.阳性率低！2.三种菌以上，疑是标本污染！,23,正确的采取、处理与运送标本,1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作，将污染情形降至最低。4.采样后立即送检（最好在2h内,保存不超过24h ），甚至床旁接种尤其是厌氧培养，棉拭子标本宜用运送培养基，尽量不要以棉花拭子收集样本。5. 标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。6.送检标本应注明来源，检验目的，临床诊断7.混有正常菌群的标本如痰、尿、伤口拭子，不可置肉汤培养。8.安全：标本收集时，注意安全防护；标本收集后，须避免他人被感染。,24,微生物样本采样基本原则,一、血培养操作规范,25,26,27,血培养阳性率统计,28,血培养检出率,29,血培养污染和假阳性,CLSI建议方针对于每位需要血培养的患者需采取2至3套（一瓶需氧瓶和一瓶厌氧瓶为一套）。婴幼儿则只采集一瓶需氧瓶培养。对于成年患者的血培养，只采单一的血培养是不允许的。因为单一血培养的结果的临床意义很难解释。采血培养后的2至5天内，不需要重复采血培养，因为治疗后的2至5天内血液中的感染细菌不会马上消失。,30,血培养的套数,31,32,血培养假阳性的危害,1、增加患者抗生素用量，破坏其微生态环境2、延长了住院天数3、延误病情诊断4、增加经济负担防止皮肤寄生菌或环境微生物污染,33,关于采血的一些问题,34,血培养送检指征（需100%送检率）,采血培养应该在使用抗生素之前进行，如已应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5小时采集血液，不知发热规律应在寒战或发热后半小时后进行。,35,采血时机,36,37,血培养采集流程,38,血培养采集流程,39,血培养采集流程,40,血培养采集流程,41,血培养采集流程,42,血培养采集流程,（除血液、骨髓、脑脊液外）的无菌体液胸水、腹水、关节腔积液、鞘膜积液、盆腔积液、心包积液等全身各个部位的体液穿刺采集方法同血培养；严格无菌操作，抗菌药物使用前采集,二、穿刺液操作规范,43,采集足够的量（10ml），同时注入需氧和厌氧瓶；若标本量少（2ml），可以只注入需氧瓶；若2ml，直接床旁接种巧克力平板和血平板；再留至少0.5ml样本于无菌管内用于标本涂片。,44,项目组套一套血培养（一套为血培养及鉴定（需氧培养）+厌氧菌培养及鉴定（厌氧培养）+一般细菌涂片,45,若标本量少（3ml），注入儿童瓶；若3ml，直接床旁接种巧克力平板和血平板；再留至少0.5ml样本于无菌管内用于标本涂片。,三、脑脊液操作规范,46,项目组套一般细菌涂片+一般细菌培养及鉴定+真菌培养及鉴定+常规药敏定量试验(MIC),47,采集方式：漱口后，用力咳出采集时间：用药前送检：置无菌容器或运送培养基内立即送检,48,四、痰液标本采集和运送,49,50,一般细菌涂片+一般细菌培养及鉴定+真菌培养及鉴定+嗜血杆菌培养及鉴定+常规药敏定量试验(MIC),呼吸道组套,51,不可避免地受到污染唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 109/ml。研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。,52,咳痰途经口咽部,如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，白细胞小于10个，应不做或仅在特殊要求时做培养。如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌物污染明显”。,53,咳痰标本不合格，退检吗？,对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续23天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检；,54,痰培养的送检次数,采集时间：用药前采集方法：脓血和黏液；对不易获得粪便患者及幼儿，可用直肠拭子采集后置保存液或输送培养基中送检。送检：置无菌容器或运送培养基立即送检避免在服用硫酸钡、油、镁或结晶物后立即采集标本；如服用过这些物品，至少在5d后再采集标本。,55,五、大便培养标本采集规范,注意事项,56,一般细菌培养及鉴定+沙门菌和志贺菌培养及鉴定+真菌培养及鉴定+常规药敏定量试验(MIC)一般细菌培养及鉴定监测患者肠道菌群失调；真菌培养及鉴定监测患者有无抗生素用量过渡，有无丝状真菌引起的肠道腹泻；沙门志贺培养及鉴定为肠道常见致病菌。,项目组合,57,推荐使用男性或女性专用拭子，置运送培养基送检。男性前列腺：用肥皂和水清洗阴茎头，通过直肠按摩前列腺，用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内。男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm，旋转拭子，至少停留20s，而使之容易吸收。,58,六、生殖道标本采集规范,女性阴道：擦除过多的分泌物和排出液，用2支无菌拭子从阴道穹隆部黏膜处获取分泌物。 1支需要涂片,1支拭子做培养。宫颈：用无润滑剂的扩阴器使宫颈可见，用拭子从宫颈上拭去黏液和分泌物，丢掉拭子，用新的无菌拭子紧帖宫颈内道轻轻采样。后穹窿：送抽吸液。,59,60,生殖道分泌物培养（女）：包括阴道分泌物、宫颈分泌物、后穹窿分泌物支原体+衣原体+一般细菌培养及鉴定+常规药敏定量试验(MIC)+念珠菌培养及鉴定；生殖道分泌物培养（男）：包括前列腺液、精液、尿道分泌物一般细菌培养及鉴定+常规药敏定量试验(MIC)一个项目一个标本,61,因淋病奈瑟菌对温度相当敏感。应以专用拭子采集的标本，应尽快送检（或床旁接种），不可置于冰箱保存。直接接种标本于淋球菌专用培养基培养。,62,一般细菌培养及鉴定+常规药敏定量试验(MIC)+真菌培养,63,七、泌尿标本采集的规范,1 有典型的尿路感染症状；2 肉眼脓尿或血尿；3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性；4 不明原因的发热，无其他局部症状；5 留置导尿管的病人出现发热；6 膀胱排空功能受损；7 泌尿系统疾病手术前。,64,尿液培养标本送检指征,正常人尿液是无菌的，而尿液细菌培养最大的问题是杂菌污染。正常人外尿道有大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌又是尿路感染中常见的病源菌，但定量培养时计数不会超过103CFU/ml， 泌尿系感染时定量培养在104105CFU/ml 。,65,您知道吗？,标本采集应力争在未使用抗生素之前注意避免消毒剂污染标本 清洁中段尿中段尿（晨尿最佳）约10 20ml直接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种，或24小时内冷藏保存。留置导尿管收集尿液：穿刺导尿管吸取尿液，不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在更换新尿管时留取尿标本。耻骨上膀胱穿刺：评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法直接导尿：可减污染，准确反映膀胱感染情况。,66,尿培养样本采集方法,采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。 做厌氧培养时应膀胱穿刺采集尿。,67,尿培养样本采集规范,申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过24小时。,68,特别注意,采集方式：用碘酒，酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液采集时间：用药前送检：置运送培养基立即送检,69,八、伤口创面和脓液 封闭性脓肿,项目组合一般细菌培养及鉴定+药敏+真菌培养及鉴定+药敏 深部伤口：请选择一般细菌培养及鉴定+药敏+真菌培养及鉴定+厌氧菌培养,70,标本采集要记牢，无菌采集是提前；若已早用抗生素，停后用前观时候。发热要做血培养，双侧双瓶少漏网