美托洛尔对异丙基肾上腺素充血性心力衰竭大鼠模型tnf-α的影响

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/12美托洛尔对异丙基肾上腺素充血性心力衰竭大鼠模型TNF的影响【摘要】目的探讨美托洛尔对充血性心力衰竭心衰大鼠血浆肿瘤坏死因子TNF的影响。方法雄性SD大鼠80只，随机分为空白组N10及模型组N70，模型组皮下注射异丙基肾上腺素2次170MGKG1，6周后应用超声心动图检测，以左室射血分数45确定造模成功，将心衰大鼠模型随机分为心衰对照组N13、美托洛尔组N1418周后使用左心导管进行血流动力学检查，利用放免法检测血浆TNF的改变并观察心肌病理形态学特征。结果与空白组比较，心衰对照组心功能明显恶化，心室质量指数、左心室质量指数及血浆TNF显著升高P【关键词】充血性心力衰竭异丙基肾上腺素美托洛尔大鼠肿瘤坏死因子心室重构ABSTRACTOBJECTIVETOEXPLORETHEEFFECTOFMETOPROLOLONPLASMATUMOURNECROSISFACTORTNFINRATSWITHCONGESTIVEHEARTFAILURECHFMETHODS80MALESDRATSWERERANDOMLYALLOCATEDTOTHEISOPROTERENOLISOINDUCEDHEARTFAILUREGROUPN70RECEIVINGASUBCUTANEOUSINJECTIONOFISO170MGPERKILOGRAMOFBODY精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/12WEIGHTTWICEANDTHEHEALTHYNORMALGROUPN10RECEIVINGASUBCUTANEOUSINJECTIONOFMLOFNORMALSALINETWICEATTHE6THWEEK,THELEFTVENTRICULAREJECTIONFRACTIONSLVEFWEREMEASUREDBYECHOCARDIOGRAM,THEREMAININGRATS,WITHALVEF45,WERERANDOMLYDIVIDEDINTOTWOGROUPSHEARTFAILURECONTROLGROUPN13,METOPROLOLGROUPN14，8MG/KG1D1,IG,ATTHE18THWEEK,THEHEMODYNAMICPARAMETERSWEREDETECTED,INCLUDINGHR,LVEDP,LVSPANDDP/DTMAXLVWIWASMEASUREDAFTERLVMORPHOPATHOLOGICALEXAMINATIONTNFINPLASMAWASEXAMINEDBYRADIOIMMUNOASSAYRESULTSCOMPAREDWITHTHENORMALGROUP,THEHEARTFUNCTIONSIGNIFICANTLYDETERIORATEDVWI,LVWIANDTHEPLASMATNFSIGNIFICANTLYINCREASEDPKEYWORDSCONGESTIVEHEARTFAILUREISOPROTERENOLMETOPROLOLRATSTNFVENTRICULARREMODELING充血性心力衰竭CONGESTIVEHEARTFAILURE,CHF，心衰是各种心血管疾病最终的共同转归，严重威胁着人类的健康。目前研究认为心衰是由于神经内分泌细胞因子系统的激活而介导的心室重塑过程1。在心衰的发生发展过程中，血浆肿瘤坏死因子TNF具有降低心功能、促精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/12进心衰发展的作用23。本研究以心衰大鼠为实验模型，观察美托洛尔对血浆TNF的影响并探讨其意义。1材料和方法实验药物盐酸异丙基肾上腺素ISOPRETERENOL,ISOSIGMALOTNOI5627美托洛尔METOPROLOLASTRAZENECALOTNO0604045。造模及分组9周龄清洁级雄性SD大鼠80只，购于南京中医药大学实验动物中心。将大鼠随机分为2组模型组70只，皮下注射ISO170MGKG1,分2次,间隔24H，空白组10只，皮下注射生理盐水NSML4。造模6周后，应用彩色超声监测仪型号HPSONOS5500,探头频率MHZ以二维成像模式在左室短轴切面位于乳头肌水平测量相关指标，测定值均为5个心动周期测定的均值。左室射血分数LVEF45即为造模成功5。将造模成功大鼠随机分为心衰对照组NSMLKG1D1灌胃,N13和美托洛尔组美托洛尔8MGKG1D1灌胃,N14，同室常规饲养18周，饲养环境222，常规饲料喂养，自由饮水，观察大鼠的饮食、毛色、活动、紫绀、水肿等一般性状，每周称体质量BW。血流动力学检测18周实验结束，将各组大鼠腹腔注射麻醉，以自制充满肝素生理盐水的导管，经颈动脉插入左室腔，并连接压力换能器。分别测量左心室收缩压LVSP、精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/12左心室舒张末期压LVEDP、左心室内压最大上升和下降速率DPDTMAX，所有信息由BL410生物机能检测系统记录并采用BLNEWCENTURY软件进行分析。检测结束后颈动脉放血，低温离心，分离血浆，密封，20冷存备用。血浆TNF检测采用放免法检测血浆TNF，放免试剂盒购于解放军总医院科技开发中心放免所批号20070203。操作严格按照试剂盒说明书进行。心脏组织病理学检查采血完毕，采用脱颈法处死所有动物，迅速摘取心脏，肉眼观察后，剪去周围大血管，在冰生理盐水中洗净血液，滤纸吸干，称重。沿房室交界处去除左右心房，用电子天平精确度1G称取心室质量VW，再剪去右心室游离壁，保留左心室及室间隔，称取左心室质量LVW。分别计算心室质量指数VWI，VW/BW、左心室质量指数LVWI，LVW/BW。所有标本于10甲醛中固定24H4，常规取材、脱水、石蜡包埋，沿左室长轴线每隔1MM横断面切取5张层厚4M切片，切片经苏木精伊红染色、MASSON三色染色。光学显微镜下观察心肌纤维有无肥大、变性、坏死间质有无充血、水肿、炎细胞浸润、结缔组织增生心内膜、心外膜有无充血、水肿、炎细胞浸润。各种病变按由轻到重的程度分别评分为1、2、3、4分，无病变为0分6，累加每组每只动物精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/12所有分数，并进行统计学处理。统计学处理采用SPSS软件进行统计学分析。计量资料以S表示，组间均数比较采用T检验，率的比较采用2检验，以P2结果一般性状与空白组相比，心衰对照组大鼠普遍出现毛色暗黄，纳食减少，体质量增加缓慢，口鼻紫绀、有血性分泌物，明显气喘，足爪水肿，活动减少，抓取反应差。与心衰对照组相比，美托洛尔组大鼠心衰症状明显好转。血流动力学检测结果见表1。心衰对照组与空白组相比HR、LVEDP显著增加PTNF、心脏质量指数检测及病理评分结果见图1。心衰对照组与空白组相比血浆TNF、VWI、LVWI及病理评分显著升高P心脏组织病理学结果空白组心脏表面光滑，颜色红润心衰对照组心脏表面黯淡，颜色暗紫。光学显微镜下示心衰对照组心肌细胞肥大，部分心肌细胞有嗜酸变性和或坏死，病变呈灶性或弥散性分布，主要位于左心室壁，部分大鼠心肌间质结缔组织增生，增生的结缔组织呈条索状或斑块状美托洛尔组病变较心衰对照组明显减轻。苏木精伊红染色结果显示图2AC，空白组心肌细胞排列整齐，心肌纤维呈短柱状，可见横纹，心肌细胞核呈卵圆形，较大，着色较浅，位于肌纤维中央，未见心肌细胞肥大现象心衰对照组可见肌纤维及间质发生坏死，心肌纤维增粗、拉长，胞精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/12核着色深，细胞排列疏松，横纹不清楚或消失，局部组织纤维化，间质内有炎性细胞浸润等而美托洛尔组较心衰对照组明显好转。MASSON染色结果显示图2DF，空白组未见明显胶原组织增生心衰对照组心肌细胞周围胶原组织明显增多，部分心肌组织被胶原组织取代，出现心肌纤维化，左心室心肌间质纤维胶原明显增多、增粗美托洛尔组心肌细胞周围胶原组织含量和纤维化程度较心衰对照组明显减弱。图1血浆TNF、心脏质量指数检测及病理评分结果3讨论TNF主要是由单核巨噬细胞分泌的具有多种生物学效应的细胞因子，是导致CHF心肌损伤的重要的前炎症细胞因子，其可引起左室收缩功能降低、心室重塑、氧自由基释放增加、心肌及内皮细胞凋亡等一系列病理生理改变7。血浆TNF升高可导致心肌收缩力减弱、心脏扩大、左心室重构及运动耐量下降，从而促使心衰进一步加重，以致造成恶性循环。TNF也对成熟的心肌细胞及乳头肌细胞有浓度依赖性的负性肌力作用，用TNF持续灌注大鼠心脏，可导致时间依赖性的心室功能降低并使心脏扩大，可能与TNF可通过巨噬细胞、血管内皮细胞和心肌细胞中诱生型一氧化氮合酶INOSMRNA的表达，导致心肌NO产物增多，减弱心肌细胞的收缩功能有关89TNF也精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/12可诱导氧化应激，使与心肌TNF及细胞表面受体结合激活与凋亡有关的基因过度表达，启动细胞凋亡，诱导心肌细胞凋亡发生，而导致心室扩张、间质纤维化10。此外,研究还发现TNF可通过核转录因子NFB激活心肌组织金属蛋白酶，引起心肌重构，导致心功能减退11。研究发现心衰患者经美托洛尔治疗后血浆TNF水平降低，心脏功能改善，左室重构逆转12。其机制可能是受体阻滞剂美托洛尔可通过上调心肌细胞膜受体的数量而增加对儿茶酚胺的敏感性，降低肾素血管紧张素和儿茶酚胺的水平，阻断氧化应激，清除氧自由基，防止心肌细胞内CA2超负荷，抗心肌细胞凋亡，改善心肌舒张期的充盈和顺应性，减少恶性心律失常的发生，从而达到改善心功能、逆转心室重塑、延缓心衰进程的作用1316。本实验结果显示应用大剂量ISO皮下注射后模型组大鼠心衰表现明显，很好地复制了心力衰竭的临床表现造模18周后血流动力学检测发现心衰对照组与空白组大鼠相比心功能明显下降美托洛尔组与心衰对照组大鼠相比心功能明显改善。心脏病理形态学观察发现心衰对照组与空白组大鼠相比，心肌弥漫性坏死、纤维化及左室重构明显美托洛尔组与心衰对照组相比心肌弥漫性坏死和纤维化明显好转，表明心衰大鼠经美托洛尔治疗后心肌纤维化和左室重构明显好转。与此同时,心衰对照组血浆TNF水平较精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创8/12空白组显著升高P本研究发现，ISO诱导CHF大鼠的血浆TNF显著上调并且心室重构明显，而美托洛尔干预能够降低血浆TNF及改善心室重构，提示血浆TNF在CHF的发病机制中发挥着重要作用。表明美托洛尔能够改善CHF大鼠的心功能及心室重构，该作用可能与降低血浆TNF浓度有关。【参考】1SAKATAY,YAMAMOTOK,MANOT,ETALACTIVATIONOFMATRIXMETALLOPROTEINASESPRECEDESLEFTVENTRICULARREMODELINGINHYPERTENSIVEHEARTFAILURERATSITSINHIBITIONASAPRIMARYEFFECTOFANGIOTENSINCONVERTINGENZYMEINHIBITORJCIRCULATION，2004，10917214321492VONEYNATTENM,HAMANNA,TWARDELLAD,ETALRELATIONSHIPOFADIPONECTINWITHMARKERSOFSYSTEMICINFLAMMATION,ATHEROGENICDYSLIPIDEMIA,ANDHEARTFAILUREINPATIENTSWITHCORONARYHEARTDISEASEJCLINCHEM，2006，5258538593SUEMATSUN,TSUTSUIH,WENJ,ETALOXIDATIVESTRESSMEDIATESTUMORNECROSISFACTOR精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创9/12ALPHAINDUCEDMITOCHONDRIALDNADAMAGEANDDYSFUNCTIONINCARDIACMYOC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