蟾酥对青霉、曲霉、根霉生长抑制作用的研究

1/4蟾酥对青霉、曲霉、根霉生长抑制作用的研究【摘要】用不同浓度的蟾酥药液，采用圆形滤纸法就其对青霉、曲霉、根霉的生长是否有抑制作用进行研究。结果表明蟾酥对青霉、曲霉、根霉的生长没有抑制作用。【关键词】蟾酥青霉；曲霉；根霉；抑菌圈蟾酥对致病菌是否有抑制作用仍在不断的探索当中，现在已证明蟾酥对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌及痢疾杆菌有抑制作用。但对青霉、曲霉、根霉等真菌是否有同样的抑制作用仍未见报道。本实验通过圆形滤纸片法研究蟾酥对青霉、曲霉、根霉三种真菌生长是否具有抑制作用，目的是为进一步的深入研究提供依据。1材料与方法材料蟾酥的制备蟾蜍购置于牡丹江地区。洗净其体表后,运用竹刺挤浆法挤净蟾蜍耳后腺的白色液体,涂于洁净的玻璃板上,待阴干后将其刮下研成细粉状置于洁净的玻璃瓶内,放在干燥、阴凉处保存，备用。蟾酥的主要成分蟾酥的成分很复杂，包含两大类物质，一类是生物原氨基，这类物质一部分由邻苯二2/4酚衍生物组成，一部分由吲哚系碱类组成，如S羟色胺、蟾酥特尼定、蟾酥流堇等组成。另一类物质是蟾毒配基B和蟾酥毒素。菌种本实验选用的菌种为根霉、曲霉、青霉，属于真菌，由牡丹江师范学院生物系微生物实验室提供。马铃薯培养基PDA的制备自然PH值马铃薯培养基的配方马铃薯去皮00G，蔗糖20G，水1000ML。主要仪器高压灭菌锅，食用菌接种器SS2801，恒温培养箱JT752，电子天平BP2110。实验方法蟾酥药液的制备用电子天平分别称取120MG和200MG的蟾酥药粉加10ML的蒸馏水,分别配成12MG/ML和20MG/ML的不同浓度的蟾酥药液,封好,备用。灭菌将备用的锥形瓶、移液管、拖菌耙、培养皿、蒸馏水、直径1CM圆形滤纸片封好，放在高压锅内灭菌，温度121，时间30MIN。菌悬液的制备取活化的青霉、曲霉、根霉在食用菌接种器上的酒精灯火焰旁，用灼烧冷却后的接种环在试管内挑取少量菌苔，并迅速放入试管中，分三个试管分别放入，不断的摇动，封好。达克宁稀释液也依此法制备。3/4涂菌和放滤纸片在无菌的条件下，将已融化并冷却至45左右的马铃薯培养基倒入无菌的培养皿中，待凝固后，再用无菌的移液管分别吸取不同的霉菌稀释液滴入装有培养基的培养皿中,然后用玻璃耙子将菌平推于培养皿的培养基上,再将剪好的园形滤纸片侵入12MG/ML和20MG/ML的蟾酥药液和达克宁药液的稀释液中,待滤纸片浸润后,立即拿出,每个培养皿中放三个滤纸片,滤纸片在培养基上呈三角形放置,然后将培养皿用灭菌的纸包好,倒置于恒温的培养箱中,温度30,时间24H。同理，以达克宁药物作为对照的也照此方法处理。24H后观察其效果。转贴于论文联盟HTTP/结果通过观察四次实验的结果可以看出,当蟾酥的药液浓度为12MG/ML时,蟾酥对青霉、曲霉、根霉三种真菌的抑制作用并不明显，几乎对其生长没有抑制作用，因此又将蟾酥药液的浓度提高到20MG/ML，进一步进行验证实验，结果表明当浓度为20MG/ML时，对三种真菌的生长仍没有明显的抑制作用。通过四次反复的验证都没有发现蟾酥对三种真菌有抑制作用。讨论真菌的细胞壁的主要成分为壳多糖，它是N乙酰糖分子以糖甘键连接而成的多聚糖，由此推测，蟾酥与真菌细胞壁可能不发生作用，不能破坏真菌细胞的细胞壁，4/4由于细胞壁的保护，其他的成分也就无法进入细胞发生反应，真菌由此保护了自己的正常生长。蟾酥不能透过细胞壁进入细胞膜，在蟾酥的成分中含有另一类物质，蟾毒配基B和蟾酥毒素，这类物质是胆固醇的类似物，属于肽类毒素，而肽类毒素的基本上是双组分结构，即一个效应链，另一个结合链，只有A链具有毒性，B链的作用是与膜上的受体结合使A链进入细胞内部，单一的A链和B链都没有活性。蟾酥的这一成分要想发挥作用就必须先实现B链与膜上受体的结合，蟾酥对细菌的破坏作用就是因为蟾酥破坏细菌的细胞壁后，肽类毒素的B链可以和细胞膜的主要成分磷脂结合，使细菌的细胞膜受到破坏而破裂，加速了细菌的死亡。但对于真菌来说，蟾酥不能破坏真菌的细胞壁，有了细胞壁的阻隔，蟾