论山楂叶粗品多糖的分级纯化及纯度测定

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/6论山楂叶粗品多糖的分级纯化及纯度测定摘要将山楂叶中的水溶性多糖成分提取出来，然后通过SEVAGE法来除去其中的蛋白质，用透析法来除去低分子量物质，再通过离子交换柱和凝胶柱洗脱来进行进一步的分离纯化。通过电泳、凝胶柱层析和高效液相凝胶色谱法来测定多糖精品的纯度，证明其纯度很高。关键词山楂叶粗品多糖纯化纯度测定一、对山楂叶粗品多糖的分级纯化材料与方法在这里，我们是用过离子交换柱和凝胶柱来达到纯化多糖样品的目的。采用的离子交换柱为CM纤维素柱，凝胶柱则为SEPHADEXG100。我们采用的是先过离子柱洗脱再过凝胶柱洗脱。1材料11仪器精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/6玻璃柱,玻璃柱，BSZ100自动分布收集仪，收集管,756MC紫外分光计12试剂5MM的NAAC溶液，1N的NACL，01NNACL溶液，水为经过脱气过滤处理的去离子水。01G蒽酮与50ML浓硫酸混合成的蒽酮硫酸液，均为分析纯。13其它材料CM纤维素填料SEPHADEXG100凝胶填料两者均为进口。2实验方法21过CM纤维素离子交换柱先将CM纤维素填料装入玻璃柱中，以5MM的NAAC洗精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/6脱液将两个液相泵与柱联接成一真空系统，以05ML/MIN的流速平衡一天，之后即可上样，采用梯度洗脱，母液为5MM的NAAC溶液，梯度液为1N的NACL溶液，上样量为5ML，流速05ML/MIN，隔15MIN收集一管，从第20管开始进行梯度洗脱。每隔两管用蒽酮硫酸法监测以管号为横坐标，620NM处紫外吸收值为纵坐标作图，分别按相关峰位收集并冻干。之后取主要产物过SEPHADEXG100柱进行进一步的分离。22过SEPHADEXG100凝胶柱将SEPHADEXG100凝胶填料装柱，再通过01NNACL洗脱液把A泵与柱连接起来，以03ML/MIN流速平衡一天，之后即可上样，上样量为5ML，用01NNACL缓冲溶液以03ML/MIN流速洗脱，隔15MIN收集一管。以蒽酮硫酸法监测，分别按相关峰位收集并冻干。结果与分析1过CM纤维素离子交换柱结果山楂叶粗品多糖KS经过CM纤维素柱梯度洗脱，分别精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/6按相关峰位收集并冻干之后，得到四个组分KS1、KS2、KS3、KS4。其中，KS1占14，KS2占25，KS3占52，KS4占9，均为白色絮状物。这里，KS3是主要组分。2过SEPHADEXG100凝胶柱洗脱结果当KS3经过SEPHADEXG100柱洗脱，按相关峰位收集并冻干之后，可分成两个组分KS3、KS3。KS3占28，KS3占72。这里，根据含量比例大小的比较，KS3为主要产物。图2山楂叶多糖粗品过CM纤维素柱洗脱曲线FIG2ELUTIONPATTERNSOFCRATAEGUSPINNATIFIDALEAVESCRUDEPOLYSACCHARIDEEXTRACTONCMCELLULOSECOLUMN图3山楂叶多糖过SEPHADEXG100凝胶柱洗脱曲线FIG3ELUTIONPATTERNSOFCRATAEGUSPINNATIFIDALEAVESCR精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/6UDEPOLYSACCHARIDEEXTRACTONSEPHADEXG100COLUMN二、纯度测定这里，纯度的测定方法我们是采用了醋酸纤维薄膜电泳法、SEPHADEXG200凝胶过柱法和高效液相凝胶色谱法；分子量的测定则是采用了高效液相凝胶色谱法。材料与方法1仪器DYY型水平电泳槽、美国产BIORAD电泳仪、冰箱，WATERS液相色谱仪、RID6A示差检测器，柱为MACROSEPHEREGPC，LC10ATSHIMADZU液相泵、756MC紫外分光计，WATERS510