乙型、丙型、庚型肝炎病毒多重感染研究

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/10乙型、丙型、庚型肝炎病毒多重感染研究【摘要】目的探讨庚型肝炎感染患者是否存在双重感染和多重感染。方法应用庚型肝炎病毒HGVNS3区逆转录聚合酶链反应技术检测了HGV系列稀释的质控血清及ABBOTTGBVC参比样品中HGVRNA，并对90例丙型肝炎病毒HCVRNA阳性和12例乙型肝炎、丙型肝炎双重感染献血员进行了HGVRNA的检测。结果HGV系列稀释质控血清101105均为阳性；106为阴性。2份ABBOTTGBVC样品均为HGVRNA阳性。90例HCVRNA阳性样品中，8例HGVRNA阳性；12例乙、丙双重感染者中4例4/12HGVRNA阳性。结论不仅存在HCV及HGV双重感染，也存在多重感染。【关键词】肝炎病毒，庚型肝炎病毒，丙型逆转录聚合酶链反应STUDIESONMULTIPLEINFECTIONWITHHEPATITISB,CANDGVIRUSESDUSHAOCAI,TAOQIMIN,CHANGJINGHONG,ETALINSTITUTEOFHEPATOLOGY,PEOPLESHOSPITAL,BEIJINGMEDICAL精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/10UNIVERSITY,BEIJING100044【ABSTRACT】OBJECTIVETOSTUDYIFTHEREEXISTSSUPERINFECTIONANDMULTIPLEINFECTIONINTHEPATIENTSWITHHEPATITISGVIRUSHCVINFECTIONMETHODSREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCRTECHNIQUEINNONSTRUCTURALGENE3NS3REGIONOFHGVWASUSEDTODETECTHGVRNAINSERIALLYDILUTEDQUALITYCONTROLSERAANDHGVCREFERENCEPANELOFSAMPLESPROVIDEDBYABBOTTCOLTD,IN90CASESWITHPOSITIVEHEPATITISCVIRUSHCVRNA,AND12BLOODDONORSWITHSUPERINFECTIONOFHEPATITISBVIRUSHBVANDHEPATITISCVIRUSHCVRESULTSSERIALLYDILUTEDQUALITYCONTROLSERASHOWEDPOSITIVEFORHGVRNAATDILUTIONSOF101TO105,BUTNEGATIVEATDILUTIONSOF106TO108HGVRNAWASPOSITIVEINTWOSAMPLESOFHGVCSERUMPROVIDEDBYABBOTTCOHGVRNAWASPOSITIVEINEIGHTOFTHE90CASESWITHPOSITIVEHCVRNAANDINFOUROFTHE12CASESWITHSUPERINFECTIONWITHHCVANDHBVCONCLUSION精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/10THEREARENOTONLYSUPERINFECTIONOFHBVANDHCV,BUTALSOMULTIPLEINFECTION【KEYWORDS】HEPATITISGVIRUSHEPATITISCVIRUSREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION自从1995年美国SIMONS等及LINNEN等证实存在庚型肝炎病毒GBVC和HGV以来，引起了广大研究人员的极大重视。日本、西欧、澳大利亚、中国等均有庚型肝炎病毒的存在。通过基因序列分析研究证实，GBVC和HGV两者具有高度的同源性，为庚型肝炎病毒的不同株，一些流行病研究资料也证实，庚型肝炎病毒与丙型肝炎病毒具有相同的传播方式。本文对90例HCVRNA阳性的患者血清及10例抗HCV阳性的献血员进行了双重感染研究，结果如下材料与方法一、材料1血清样品90例HCVRNA阳性样品来自本院的门诊病人。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/10RNA质控血清来自我国河北地区HBSAG阳性献血员，并经日本自治医科大学证实HGVRNA阳性。参照血清07648F9及52953236血清均由ABBOTT赠送。NS5区PCR试剂盒来自本研究所。NS3区PCR试剂盒由本研究所生产，HGVNS3区外引物序列按文献报道合成，内引物正链5CATTCVAAGGCGGAGTGYGC3，负链5TCYTTACCCCTRTAATAGGC3。RNAPCR试剂盒由本研究所提供，按文献方法进行。免疫PCR试剂盒由本研究所提供，按文献报道方法进行。EIA试剂盒上海科华生物公司产品。、抗HBEEIA试剂盒为本研究所产品。二、方法NS3区PCR采用异硫氢酸胍裂解法，HGVRNA提取方法及PCR程序如下1提取RNA取血清20L加裂解液含异硫氢酸胍80L，混匀后置室温5分钟，加入氯仿异戊醇49140L，稀释液含精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/10RNASIN80L，10000R/MIN离心10分钟，吸取上清液100L，加入等体积异丙醇或20保存，12000R/MIN离心15分钟，吸去上清，沉淀物含HGVRNA。2逆转录在上述含HGVRNA原管内加入逆转录反应混合液含AMVBUFFERDNTP及HGV引物10L，7012分钟后，加入AMV反转录酶34个单位，4240分钟后即可进行PCR扩增。3第一次PCR在逆转录原管内加入第一次PCR反应混合液含缓冲液、引物及1单位TAQ酶20L，石蜡油封顶，超薄管扩增程序9430秒，5530秒，7245秒35个循环。4第二次PCR取第一次PCR产物3L，加第二次PCR反应液含缓冲液引物DNTP及1单位TAQ酶30ML，在同一条件下扩增35个循环。NS5区PCR引物设计与操作方法按文献方法进行。产物的检测采用聚丙烯酰胺PAGE电泳技术检测PCR产物，NS5区第精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/10一次PCR产物380BP，第二次PCR产物为210BP；NS3区第一次PCR产物158BP处有CDNA带，及第二次PCR产物83BP处有CDNA带为HGVRNA阳性。结果例HCVRNA阳性患者中HGVRNA检测结果90例HCVRNA阳性患者中8例HGVRNA阳性，阳性率为。RNA质控血清灵敏度检测结果取参照血清100L加入无菌小牛血清900L定为101，依次稀释至106。结果表明，原血清101104为强阳性，105为阳性，106为HGVRNA阴性附图。参照血清HGVRNA检测结果应用HGVNS3区套式PCR技术检测，ABBOTT的两份样品52953236及07648F9均为阳性。M分子量标志物HAEPGEM3DNA17分别为原血清、101、102、103、104、105、106811为HGVRNA阳性患者血清样品电泳条件为6聚丙烯酰胺凝胶、电极液TAE附图HGVRNA质控血清灵敏度检测结果例HBSAG阳性的携带者中HGVRNA及HCVRNA检测结果精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/102、3、4、5、7、10、11、12均为HBVDNA第一次PCR阳性，其中1、9为第二次PCR阳性，6、8为二次PCR均为阴性。HCVRNA为5端非编码区检测结果，HGVRNA以HGVNS3区及NS5区两者同时阳性为判断标准附表。附表12例HBSAG阳性携带者HGV、HCVRNA检测结果样品号HBSAGHBEAG抗HBEHBVDNA抗HCVHCVRNAHGVRNA12345678精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创8/109101112未测讨论本文应用HGVNS3区套式PCR技术检测了美国ABBOTT赠送的两株GBVC样品，并检测经日本证实为HGVRNA阳性样品为本研究所的质控血清，结果表明在83BP处均有较强的CDNA带，表明本试剂盒采用的NS3区套式PCR具有一定优势，不仅能检出美国的GBVC株，同时也能检出经日本检出的中国珠。90例HCV感染患者的HGVRNA检测结果表明，有HCVHGV双重感染的存在。结果表明，在12例HBV、HCV双重感染的献血员样品中检出HGVRNA阳性4例，均未检测到HDV、EBV、HAV、HEV及CMV，提示至少存在HBV、HCV双重感染，这种感染和多重感染是否对肝病的慢性化、肝硬化及肝癌有促进作用，有待进一精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创9/10步研究证实。作者单位北京医科大学人民医院肝病研究所100044参考文献1SIMONSJN,LEARYTP,DAWSONGJ,ETALISOLATIONOFNOVELVIRUSLIKESEQUENCESASSOCIATEDWITHHUMANHEPATITISNATMED,1995,15645692LINNENJ,WAGESJ,ZHANGKECKZY,ETALMOLECULARCLONINGANDDISEASEASSOCIATIONOFHEPATITISGVIRUSATRANSFUSIONTRANSMISSIBLEAGENTSCIENCE,1996,2715055083陈红松，王宇，魏来，等中国人庚型肝炎病毒部分基因的克隆及序列分析北京医科大学学报