医学综述论文：雌激素对去卵巢大鼠骨丢失的骨形态计量学及组织学的影响

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/13医学综述论文雌激素对去卵巢大鼠骨丢失的骨形态计量学及组织学的影响【摘要】目的了解大鼠卵巢性激素缺乏致骨丢失的组织学改变以及四种不同雌激素制剂对其的影响。方法将50只SD大鼠随机分为6组，去势组9只在去势手术后3周处死大鼠；对照组9只开腹后关腹；去势利维爱组、去势盖福润组、去势倍美力组、去势维尼安组各8只在去势手术后3周予相应的药物治疗，术后6周药物治疗后3周处死各组大鼠，进行骨形态计量学、骨密度BMD测定，并行病理及电镜下观察。结果1去势后3周大鼠骨量参数较对照组显著减少P。去势倍美力组和去势维尼安组骨小梁的体积与去势组相似。BMD在各治疗组均有增加，以去势利维爱和去势盖福润组增加较多PTHEIMPACTSOFSEXHORMONESONHISTOMORPHOMETRICANDHISTOLOGICALAPPEARANCESOFBONEINOVARIECTOMIZEDRATSYONGHONGYAN,CHENGYUNYINGNANJINGMEDICALUNIVERSITYNO1AFFILIATEDHOSPITAL,NANJING210006【ABSTRACT】OBJECTIVESTODEMONSTRATETHEHISTOMORPHOMETRICANDHISTOLOGICALCHANGESOFBONE3WEEKSAFTERBILATERALOVARIECTOMYINRATSANDTOINVESTIGATETHEIMPACTSOF4DIFFERENTHORMONE精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/13REPLACEMENTTHERAPIESONTHEBONEHISTOMORPHOMETRIC,HOSTOLOGICALAPPEARANCESMETHODSBILATERALOVARIECTOMIESWEREDONEON41FEMALERATSANDSHAMOPERATIONSONOTHER9SHAMGROUPRESPECTIVELYAFTER3WEEKS,4DIFFERENTTREATMENTSIELIVIAL,GEVRINE,PREMARIN,WEINIANWEREINITIATEDSEPARATELYONEACH8OVARIECTOMIZEDRATSFORANOTHER3WEEKSTHEREMAINING9WERESERVEDASCONTROLSOVXGROUPALLRATSWERESACRIFIEDEITHER3WEEKSAFTEROVARIECTOMY/SHAMOPERATIONORATTHEENDOFHORMONETHERAPIESTHEIRFEMORALBONEMINERALDENSITYBMDWEREMEASUREDBYDUALENERGYXRAYABSORPTIOMETRYDEXASPECIMENSOFPROXIMALFEMURWEREEMBEDDEDUNDECACIFIDEFORHISTOMORPHOMETRICANALYSISANDOFDISTALFEMORALMETAPHYSICSWEREPROCUREDFORSCANNINGELECTRONMIROSCOPESEMANDPATHOLOGICEXAMINATIONSRESULTS1THREEWEEKSAFTEROVX,THEFEMORALBMD,MEANCORTICALTHICKNESSDECREASEDSIGNIFICANTLYWHILETHENUMBEROFOSTEOCLASTINCREASEDSIGNIFICANTLYASCOMPAREDWITHSHAMGROUPTHETRABECULARBECAMETHINNERANDIRREGULARWHICH精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/13CHANGEDTHEBONEMICROSTRUCTUREINTHREEDIMENSION2AFTERTREATMENTOF4DIFFERENTPREPARATIONS,THEABOVEPARAMETERSRESTOREDTOVARIOUSEXTENTSTOTHESHAMOPERATIONLEVELSAMONGTHEM,THEREWASGREATERINCREASEOFFEMORALBMDONTHELIVIALANDGEVRINEGROUPASCOMPAREDWITHPREMARINANDWEINIANGROUPP近年来的研究表明，卵巢性激素缺乏引起的骨丢失与成骨细胞、破骨细胞及骨小梁的显微结构有关。激素替代治疗HRT是防治绝经后骨质疏松症的关键措施。目前临床常用的雌激素制剂有利维爱LIVIAL、盖福润GEVRINE、倍美力PREMARIN和维尼安WEINIAN。本研究通过对去势后大鼠骨密度BMD的测定、骨吸收及骨转换参数的定量分析，骨小梁的结构观察，探讨卵巢性激素缺乏导致骨丢失的组织学改变，综合评估上述4种雌激素制剂的疗效。材料和方法一、动物分组及模型制备选取3月龄未经产雌性SD大鼠50只平均体重20010G，随机分为6组，去势组9只，对照组9只，去势利维爱组、去势盖福润组、去势倍美力组与去势维尼安组各8只，组间大鼠体重无统计学差异。所有大鼠均以3的戊巴比妥钠40MG/KG腹腔内注射麻醉，除对照精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/13组行单纯开腹之外，其余5组均行双侧卵巢切除术，术后置大鼠于室温下分笼饲养，自由摄水，每天每只予标准饲料18G1。二、方法一药物治疗术后3周开始给各治疗组大鼠用药，所有药物均以无菌生理盐水配成混悬液，以灌胃法每天每只2ML给药。动物用量剂量MG/KG人的剂量MG/KG2，即给药剂量去势利维爱组每天利维爱MG/KG；去势盖福润组每天盖福润MG/KG；去势倍美力组每天倍美力MG/KG；去势维尼安组每周维尼安MG/KG。连续给药3周，在处死前第10和第3天，每日以20MG/KG四环素上海华美公司腹腔内注射。术后3周处死去势组，术后6周给药3周后处死其他各组。二骨组织形态计量学分析1不脱钙切片取材及制作截取双侧股骨远端1/3处骨，丙酮脱水、脱脂，24小时内每隔6小时换液1次。低温塑料甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸羟乙酯，丙烯酸羟乙酯包埋，4冰箱聚合。包埋标本用德国JUNG型硬切骨机沿股骨矢状面切片，每只鼠切片4张，切片厚度为5M，其中2张切片采用1的甲苯胺蓝染色，另外2张切片不染色作为荧光观察用。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/132参数测量采用德国ZEISS公司VIDAS型计算机全自动图像分析系统，每只鼠观察荧光染色切片各2张，观察甲苯胺蓝染色切片各2张，每个参数测量取高倍视野，测定区域限定在距骺板下1CM外的干骺端，每个标本测定面积为16MM2，所有参数均参照WRONSKI等3和MALLUCHE等4的标准，骨量参数1骨小梁体积骨小梁面积/髓腔及骨小梁面积100；2骨小梁平均厚度M；3皮质骨平均厚度M；骨吸收参数骨小梁表面破骨细胞数103/M骨转化及骨形成参数1骨小梁骨矿化率M/D两条荧光标记线间距/两次注射四环素间隔天数图1；2骨小梁矿化缘长度四环素标记线长度/骨小梁边缘长度。图1四环素荧光双标线。荧光双标100三扫描电镜观察取股骨干骺端，沿矢状面剖开，以浓度为4的戊二醛固定，磷酸缓冲液清洗3次；以浓度为10的次氯酸钠浸泡6小时，超声清洗15分钟，乙醇逐级脱水，乙醚浸泡。室温下空气干燥；真空喷金。在日本产明石SX40型电镜下观察放大倍数700倍。四组织形态学观察取大鼠股骨干骺端，以浓度为10的甲醛液常规固定，精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/13脱钙处理后石蜡制片。HE染色，光镜下观察。五BMD测量将大鼠经乙醚麻醉后称重，四肢展开平置于美国LUNAR公司生产的双能X线吸收测量仪平台上，通过计算机系统中小动物软件测股骨BMD，精确度，准确度90。三、统计学方法采用本校统计中心CCSTAT软件包进行统计运算，所有参数均以S表示，组间差异采用方差分析、显著性T检验。结果一、实验后大鼠体重变化术后3周，各组大鼠体重均有所增加。实验结束时除去势组与去势利维爱组体重增加较明显外，其余各组大鼠体重均维持在给药前水平。见表1。表1各组大鼠实验前后体重比较G,S组别只数实验前体重实验后体重去势组9对照组9去势利维爱组8去势盖福润组8精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/13去势倍美力组8去势维尼安组8与对照组相比，P二、BMD的变化术后3周，去势组与对照组相比，BMD明显降低P表2各组大鼠术后BMD的变化G/CM2,S组别只数术后3周术后6周去势组9对照组9去势利维爱组8去势盖福润组8去势倍美力组8去势维尼安组8与对照组相比，P三、骨形态计量学参数变化与对照组相比，去势组骨小梁体积减少P表3各组大鼠骨组织形态计量学参数比较组别只数骨小梁精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创8/13体积骨小梁平均厚度M皮质骨平均厚度M骨小梁表面破骨细胞数103/M骨小梁骨矿化率M/D骨小梁矿化缘长度去势组918525对照组935471去势利维爱组834958去势盖福润组83546去势倍美力组832147去势维尼安组828027与对照组相比，P。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创9/13四、骨组织的形态学观察染色切片1去势组股骨干骺端骨小梁明显变稀疏，皮质骨变薄，骨髓腔相对扩大，部分区域骨小梁消失，沿“S”形的骨小梁边缘有众多深浅不一的吸收陷窝，有些部分由于破骨细胞的溶骨作用，小梁出现中断图2。2对照组及治疗组股骨干骺端骨小梁丰富，皮质骨致密，小梁排列以纵向为主。在皮质骨形成表面4个治疗组均可见成队状排列似上皮细胞样覆盖于新生骨表面的成骨细胞，呈立方型、柱状和豆点状，有些细胞间有裂隙相连图3。2甲苯胺蓝染色切片1去势组可见小梁表面矿物质沉积较少，类骨质生成较多，皮质骨亦变薄，小梁表面骨吸收陷窝中有外形较大、淡染、胞浆分布均匀、内有多个细胞核的破骨细胞充填图4。2对照组甲苯胺蓝染色的切片中，骨小梁呈纵向排列，纵向小梁间由横向小梁相连，小梁中央有大量紫蓝色的矿物质沉积，其上有较多的骨细胞嵌于其中，矿化骨的两侧为浅染的类骨质图5，去势利维爱和去势盖福润两组骨小梁的表面有大量的成骨细胞，局部骨小梁形成表面活跃，髓腔内偶见有破骨细胞及类似破骨细胞的巨噬细胞图6。图3皮质骨致密，表面豆点状、柱状成骨细胞。HE染色100精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创10/13图4骨小梁稀疏，表面骨吸收陷窝增多。甲苯胺蓝染色100图5骨小梁排列以纵向为主。甲苯胺蓝染色100图6骨小梁表面矿物质沉积及大量成骨细胞。甲苯胺蓝染色2003扫描电镜1去势组小梁变细、中断，残端游离，小梁数量减少，小梁间距增宽，表面较多的骨吸收陷窝，局部骨小梁变细，有裂隙图7。2对照组及治疗组骨小梁相互连接成立体网状，小梁表面光滑，小梁间距小图8。图7骨小梁变细，残端游离。扫描电镜700图8骨小梁排列整齐，表面光滑。扫描电镜700讨论一、实验前后大鼠体重的变化及实验时间的选择本研究结果表明，雌激素具有维持体重的作用。利维爱对体重增加更明显，可能与其雄激素样作用有关。盖福润对体重增加不明显可能与甲基睾丸素口服后活性降低50以上有关。卵巢切除后引起骨丢失的时间长短不一。KIMBLE等1认为，卵巢切除后2周的大鼠，骨小梁和皮质骨与对照组相比较变化不明显，而4周后骨丢失则明显增加，2周的替代治疗可以抑制骨吸收。本研究结果表明，去势后3周的大鼠骨转换即加快，骨吸收明显增加。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创11/13二、卵巢切除后大鼠BMD、骨形态计量学及组织学的改变BMD是骨矿代谢中量化骨量的重要指标。本研究结果表明，去势后3周的大鼠BMD明显下降，提示大鼠卵巢切除后早期处于快速骨丢失阶段。骨矿化率和矿化缘的长度，反映了成骨细胞生成类骨质速度的快慢。卵巢切除后两者均增加，说明成骨细胞活性增强，骨重建活跃。而3个骨量参数均降低及破骨细胞数增多，说明骨量明显丢失。推知，在去势后早期快速骨丢失阶段，骨吸收及骨形成是同时存在的。破骨细胞活性增强和高转换应是早期快速骨丢失的机理之一。本研究结果与文献报道相符合5。同时本研究结果提示，卵巢切除后的骨吸收主要以破骨细胞性骨吸收为主，即破骨细胞将骨组织、胶原及矿化骨不断从骨小梁表面降解、吸收，使骨小梁间隙增宽、中断。显微骨折的修复作用降低，是骨折发生的病理学基础6。本研究结果提示，松质骨的力学强度下降，是造成骨显微骨折的主要原因。松质骨和密质骨的变化在卵巢切除早期是相同的。三、各种雌激素制剂对去势大鼠BMD、骨形态计量学及组织学的改变精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创12/13各给药组与去势组相比，BMD均有所增加，以去势利维爱、去势盖福润组增加较多P本研究受江苏省科委社会发展基金资助作者单位210006南京医科大学附属南京第一医院妇产科红岩；南京铁道医学院附属医院妇产科程云英参考文献1KIMBLERB,MATAYOSHIAB,VANNICEJL,ETALSTIMULANEOUSBLOCKOFINTERLUEKIN1ANDTUMERNECROSISFACTORISREQUIREDTOCOMPLETELYPREVENTBONELOSSINTHEEARLYPOSTOVARIECTOMYPERIODENDOCRINOLOGY,1995,136305430612施新猷医学动物实验学西安陕西科学技术出版社，3WRONSKITJ,WALSHCC,IGNASZEWSKILA,ETALHISTOLOGICEIDENCEFOROSTEOPENIAANDINCREASED