探析苍术挥发油对成骨样细胞增殖的作用

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/6探析苍术挥发油对成骨样细胞增殖的作用摘要目的研究苍术挥发油对成骨样细胞UMR106的增殖作用。方法苍术挥发油和UMR106成骨样细胞体外共同培养,用MTT法检测细胞增殖。结果挥发油在MG/ML培养48H具有最强的促进细胞增殖作用。结论苍术挥发油中可能含有促进成骨细胞增殖的活性成分。关键词苍术挥发油增殖作用成骨样细胞UMR106MTT法苍术（RHIZOMAATRATYLODES）为菊科植物南苍术ATRACTYLODESLANCEATHUNBDC或北苍术ATRACTYLODESCHINENSISKOIDZ等的干燥根茎。苍术性辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目作用。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒、感冒等1。苍术在中医临床中使用十分广泛。已有研究发现苍术挥发油增加去卵巢雌性大鼠的骨钙含量（闫雪生苍术油软胶囊的研制。山东中医药大学硕士学位论文，2002），但对苍术挥发油是否影响成骨细胞的增殖，尚未见报道。本实验研究苍术挥发油对成骨细胞UMR106的增殖作用。1材料与方法精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/6材料苍术药材购自上海德康药业有限公司,经中国人民解放军第二军医大学药学院生药教研室黄宝康副教授鉴定为苍术ATRACTYLODESLANCEATHUNBDC的干燥根茎。试剂DMEM培养基CIBCO；34,5二甲基噻唑22，5二苯基四唑氢溴酸盐MTTSIGMA；胎牛血清FBS杭州四季青生物工程材料研究所；胰蛋白酶CIBCO；其它试剂均为国产分析纯。方法挥发油样品的制备水蒸气蒸馏法将药材样品粉碎过40目筛，精确称取200G的苍术，加水浸泡1H，然后用挥发油提取器按常规水蒸气蒸馏，提取直至挥发油的量不再增加，蒸馏液用正己烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤，微热蒸去溶剂得挥发油样品，挥发油样品为淡黄色透明油状物，具有刺激性气味。取50MG挥发油样品溶于1ML二甲基亚砜中，用灭菌过的MM滤器GELMANNSCIENCES除菌,并于4保存，备用。临用时用DMEM培养液稀释至所需浓度。成骨样细胞UMR106的培养3UMR106大鼠成骨肉瘤细胞系细胞株获赠于江苏镇江医学院病原生物教研室,源于美国麻省医学院。将UMR106细胞培养于10胎精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/6牛血清（100KU/L青霉素，100MG/ML链霉素）的无菌DMEM培养基中，置37,5CO2培养箱中进行培养。取生长状态良好的细胞，用胰蛋白酶消化，加含胎牛血清的培养基制成细胞悬浮液，调整细胞浓度为5106个/ML接种于100ML培养瓶中，二氧化碳培养箱中孵育，23D换液1次。MTT法测定细胞的增殖2取对数生长期细胞消化计数后,用含血清的DMEM细胞培养液将细胞浓度稀释至1105个/ML,铺入96孔细胞培养板中100L/孔培养24H后加入含不同浓度挥发油每个浓度6孔的无血清DMEM培养。结束培养4H前弃去培养液,每孔加入20LMTT5MG/ML,用PBS配制继续孵育4H,有蓝紫色沉淀生成,每孔加入150L二甲基亚砜DMSO,振荡10MIN待沉淀完全溶解,用酶标仪以550NM为测定波长、650NM为参比波长测定吸光值,以不加中药的细胞孔测得的吸光值为空白,用T检验进行各加药组与空白组之间均值的比较。细胞增殖率的计算如下增殖率（）AI实验组AO对照组AO对照组100AI不同条件下的吸光值；AO空白组的吸光值精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/62结果MTT法测定细胞增殖与吸光度的关系将UMR106细胞分别以6个不同浓度1105106个铺入96孔板,培养8H贴壁后,用上述方法测定每孔吸光度Y,与细胞数目X作线性回归,得标准曲线方程Y6106XR0,N6,两者具有良好的线性关系。见图1。挥发油对细胞增殖的作用用1，MG/ML4种浓度的挥发油作用于细胞24H，在550NM测定其吸光值。结果见表1。表1不同挥发油浓度对UMR106的增殖作用略苍术挥发油浓度MG/ML时培养24H，可明显促进细胞的增殖,细胞的增殖率为。在低的浓度下对细胞增殖有轻微的抑制作用,表明挥发油短期内使用低浓度较好。为了观察挥发油促细胞增殖的最适宜的作用时间,用浓度为MG/ML的苍术挥发油作用于细胞分别为24，48，72H,在550NM测定其吸光值。结果见表2。表2不同作用时间对细胞增殖的影响略由表2可见，当挥发油在浓度为MG/ML作用24H时能明显刺激UMR106增殖，在近48H时增殖率为，达到最强,72H时细胞数目又下降。3讨论精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/6苍术挥发油在MG/ML浓度下作用24，48H，均对UMR106增殖有明显的促进作用。UMR106大鼠成骨肉瘤细胞系从形态和性质上都保留了成骨细胞独有的特征,并且具有稳定、均一、纯度高等优点。因此,UMR106细胞作为一种国际公认的成骨细胞系可以用来代替成骨细胞3。在骨形成最初阶段的成骨细胞增殖期,成骨细胞数量增多,形成多层细胞并合成、分泌I型胶原以便最终矿化形成骨结节。成骨样细胞的增殖与细胞培养液中药物的成分有关,与成骨样细胞UMR106共同体外培养的方法可能作为对骨形成有促进作用的活性化合物的筛选模型,经过进一步的动物体内实验从这些活性药物中追踪对骨形成有促进作用的活性成分。因此，以成骨样细胞UMR106的增殖为活性指标,观察了苍术挥发油对该细胞系增殖的作用。由于采用的是苍术挥发油和细胞共同体外培养的方法,推测苍术挥发油中含有直接刺激成骨样细胞增殖的成分,为苍术治疗骨质疏松症提供初步筛选，具体机制有待进一步研究。【参考文献】1国家药典委员会中国药典，部S北京化学工业出版社，20