GB 7412-2003 小麦种子产地检疫规程

412小麦种子产地检疫规程。412麦种子产地检疫规程，已执行了10余年，小麦生产形势、限定有害生物发生和检验技术等方面都发生了很大变化，为了适应这些变化，对原标准进行了修订。修订后的标准增加了种子样品的扦样方法、小麦全蚀病菌分离培养技术、小麦矮腥黑穗病菌显微荧光鉴定与抱子萌发试验法、小麦黑森痪蚊的形态鉴定方法等内容，并对前版标准中一些提法作了适当的修改。本标准的附录录标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由农业部种植业管理司归口。本标准负责起草单位:全国农业技术推广服务中心。本标准参加起草单位:农业部小麦玉米质量监督检验测试中心、河南省植保植检站、山东省植保植检站、安徽省植保植检站。本标准主要起草人:王春林、林芙蓉、商鸿生、王伟新、韩世平、宋妹娥、戴钢、李传礼。本标准委托全国农业技术推广服务中心负责解释。本标准1987年首次发布，本次为第一次修订。康种子生产、检验和签证等。本标准适用于实施小麦种子产地检疫的检疫机构和所有小麦种子的繁育单位和个人。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1有害生物任何对植物或植物产品有害的植物、动物或病原物的种、株(品)系或生物型。尚未在该地区发生，或虽已发生但分布不广并已进行官方防治的有害生物。它在供种植的植物中存在，危及这些植物的预期用途而产生无法接受的经济影响，因而在输人方境内受到限制。肉眼检查以外的官方检查。确定存在的品种情况)而在一定时期采取的官方程序。散以及确保其官方控制的一切活动。括田间调查、现场检查以及室内检验、签证及疫情监督处理。检疫性有害生物:小麦矮腥黑穗病菌二。:麦普通腥黑穗病菌小麦光腥黑穗病菌:(c饭(在当地植物检疫部门的指导下，选择在无检疫对象发生的地区或轻发生地区，但具有一定隔离条件的无检疫对象发生的地块。繁殖地确定后，种子繁育单位或农户应在播种前一个月向当地植物检疫部门申请产地检疫，并提交产地检疫申报表(见表1)，经审查同意后，方可安排生产。表1产地检疫申报表申报号:作物名称:申报单位(农户)联系人联系电话地址种植地点种植地块编号种植面积/667)品种种苗来源预计播期预计总产量/一一一一一一一一一一一一一一一合计植物检疫机构审核意见:审核人:植物检疫专用章年月日注1:本表一式二联，第一联由审核机关留存，第二联交申报单位注2:本表仅供当季使用。用调人种子应附有植物检疫证书并报请当地植物检疫部门验证或复检;泥(盐)水、比重选种机选种以汰除菌瘦、虫瘦、毒麦粒和小麦植株的残渣碎屑。在黑森痪蚊发生地区，用锐劲特、甲基异柳磷或其他有效剂进行拌种后播种。萎锈灵或其他有效药剂处理麦种或55的。次氯酸钠处理30 s,4. 2. 6在小麦普通腥黑穗病发生地区，用粉锈宁、烯哇醇、恶霉灵、卫福或其他有效药剂拌种后播种。甲基对硫磷、甲基异柳磷等闷、1生产小麦种子的地块与其他小麦田之间必须具有一定的隔离条件。禁和邻近田块串灌或大水漫灌。3在黑森瘦蚊、矮腥黑穗病、全蚀病、小麦粒线虫等发生地区，采用轮作倒茬、调整播期、高茬收割等措施。镖马、禾草灵等除草剂防除。打、单贮，并防止污染。中销毁，并通知生产单位或农户进一步查除。检验和签证5. 户)协同植物检疫部门进行。在小麦拔节期、抽穗期调查小麦黑森瘦蚊、毒麦、小麦粒线虫病、小麦全蚀病;小麦乳熟期调查第3章所列全部有害生物(田间调查症状识别参见附录A)表2),表2产地检疫田间调查记录表编号种苗繁育单位调查地点调查地块编号对应申报号:调查面积:调查日期:作物名称:品种名称:种苗来源:生长期:田间调查情况症状/危害状发病率厂虫口密度及田间分布情况:危害面积:判断/初步判断:备注:填表人(签名):植物检疫专用章审核人(签名):年月日全面目侧的基础上，对疑似发生的地块米取棋盘式取样方法有针对性地调查，0. 33 h.'以下的地块取样数不少于10点;0. 33 33 . 33 3. 33 地块取样数不少于20点;3. 33 h.'以上的地块取样数不少于25点;每点面积为。.5 m'一1.0 m=。育地收获的种子必须扦样进行实验室检验(方法见附录B)，检验结果填入“实验室检验报告单，(见表3) 0表3实验室检验报告单编号对应申报号:样本编号:取样日期:作物名称:作物品种:取样部位:检验方法:检验结果:备注:检验人(签名):植物检疫专用章审核人(签名):1凡两次田间调查及实验室检验后均未发现第3章所列检疫性有害生物的，发给产地检疫合格证(见表4) 412检()字第号日日月月年年作物名称一品种名称种植面积田块数目种苗产量)种苗来源种植单位负责人检疫结果!合小麦健康种子标准，准予作种用签发机关(盖章)检疫员注1:本证第一联交生产单位凭证换取植物检疫证书第二联留存检疫机关备查注2:本证不作炙植物检疫证书,1)使用。验室检验过程中，有一次发现带有第3章所列检疫性有害生物的，不发给产地检疫合格证，所繁育的种子经当地农业植物检疫部门监督处理后，可在当地发生区使用。发生田不得再作种子繁育地。果该限定非检疫性有害生物为所在省补充检疫对象，则不发给产地检疫合格证;. 售种子。412料性附录)a)病株矮化，高度为健株的1/4，在重病田可明显见到健穗在上面，病穗在下面，形成“二层楼”的现象。b)分粟增多，病株分孽一般比健株多一倍以上。c)小花增多，病穗宽展、小穗紧密，有芒品种芒外张。d)小花成菌痪。菌瘦黑褐色，近球形，较硬，不易压破，破碎后呈块状，有鱼腥味。在小麦生长后期，如水分多病粒可胀破，使抱子外溢，干燥后形成不规则的硬块。但是，在自然条件下，矮腥病株的多分孽与矮化程度变异较大，这既与寄主、病菌和环境多种因素有关，也与侵染时间和程度密切相关，有时与网腥的症状不易区别，此时不宜以症状作为诊断的唯一依据。小麦矮腥黑穗病的典型症状与小麦其他腥黑穗病有明显区别，1小麦三种腥黑穗病典型症状比较项目矮腥网腥和光腥株高极度矮化，可为健株的1/4较健株稍矮分孽增多，穗、小花明显增多;演)，近球形，较硬;穗、小花略有增多，颖壳略开张;痪)，麦粒状，不硬，易破;株一般较健株稍矮，分孽增多，矮化程度及分孽情况依品种而异。当小麦行将成熟而健穗变黄时，病穗一般较短，直立，颜色较健穗深，保持灰绿色或灰白色。病穗的典型特征是颖壳略向外张开，露出灰黑色或灰白色菌瘦。菌瘦外面有一层灰色薄膜，用手指微压，容易破裂，散发黑色粉末，此即病菌的冬抱子。菌痪有鱼腥味。病穗的籽粒多数变为菌瘦，但也有部分小穗仍为健粒，甚至同一粒部分完好，部分有病。还有一些病粒，外表完好，状如健粒，但胚内则有抱子堆。A. 3小麦全蚀病小麦全蚀病是一种典型根部病害。病菌侵染的部位只限于小麦根部和茎基部，地上部的症状，是根及茎基部受害所引起。受土壤菌量和根部受害程度的影响，田间症状显现期不一。轻病地块在小麦灌浆期病株始显零星成簇的早枯白穗，远看与绿色健株形成明显对照;重病地块在拔节后期即出现若干矮化发病中心，小麦植株生长高低不平，中心病株矮、黄、稀疏，极易识别。各期症状主要特征如下:a)节后期重病株矮化、稀疏，叶片自下向上变黄，似千旱、缺肥。植株种子根、次生根大部变黑。横剖病根根轴变黑，湿度大时，在茎基部表面和叶鞘内侧，生有较明显的灰黑色菌丝层。b>乳熟期病株成簇或点片出现早枯“白穗”，在潮湿麦田中，茎基部表面布满条点状黑斑，覆盖黑色菌丝块，形成“黑脚”。麦株基部叶鞘内侧生有黑色颗粒状突起即子囊壳。在土壤干燥的412不形成“黑脚”症状，也不产生子囊壳，仅在因病早死的无效分孽和变黑的根部上，能够镜检到菌丝体。苗期到成熟期都有症状表现，但以接近成熟期在穗上形成虫瘦时最为明显。一般受害麦苗叶片短阔，皱边，直立，微现黄色，严重者可萎缩枯死。能成长起来的病株在抽穗前叶片皱缩畸卷，叶鞘疏松，茎秆肥肿扭曲，有时在幼嫩叶片上出现很小的圆形突起(叶片虫瘦)。孕穗期以后，病株矮小，茎秆肥大，节间缩短，受害重的不能抽穗。一般虽能抽穗，但麦穗的部分或全部不结籽实，而变成虫瘦。有时一花裂成2个5个小虫瘦，有时还有半病半健麦粒。病穗比健穗短，颜色深绿，而且绿的时间较长，芒短而扭曲。虫瘦比健粒短而圆，近球形，颖壳及芒被挤向外张开，从颖缝间露出瘦粒。虫痪顶上有钩状尖突，侧边有沟，最初油绿色，以后变成黄褐色至暗褐色，同时外壳增厚变硬。为老熟座粒。瘦粒外形与小麦腥黑穗病的病粒相似，但其外被硬壳不易压碎，内含物为白色棉絮状(线虫)A. 5小麦黑森翅蚊对冬小麦和春小麦都能造成严重危害。以幼虫潜伏在麦株茎秆基部的叶鞘内侧吸吮汁液，小麦在拔节前受害，植株严重矮化，受害麦叶比未受害麦叶短、宽而直立，叶片变厚、叶色加深呈黑绿色，受害植株因不能拔节而甸伏地面，心叶变黄以致不能抽出，严重时分孽枯黄乃至整株死亡。小麦拔节后，幼虫多数在地面上的1,2节上危害，被害植株由取食处折倒。田间检查若发现可疑植株，剥开叶鞘检查发现幼虫和围蛹后，带回室内作进一步鉴定。变绿色，成株茎秆光滑坚硬，肥沃田中植株比小麦矮，疮薄田中比小麦植株高。穗形狭长，穗轴平滑两侧有轴沟，呈波浪形弯曲。每穗8个19个小穗，互生于穗轴上，每个小穗2个6个花，排成两列，其腹面可见明显的小穗节段，小穗第一颖缺，第二颖大，长短与小穗相近，所以，俗称小尾巴麦子。毒麦与其他近似种的区别见表A. 2 0表A. 2毒麦与其他近似种的区别名称学名典型症状黑麦草5个花，外释无芒多花黑麦草5个花，外秤有长5 个花，颖短于小穗欧毒麦 小穗含4个6个花，颖短或等长、或长于小穗，颖有5脉，芒自外释顶伸出毒麦小穗含4个6个花，颖短或等长、或长于小穗，颖有67脉，芒自外释顶端稍下方伸出长芒毒麦长，小穗有7个一8个花412范性附录)层筛孔2. 5 层筛孔1. 5 过筛后将两层筛下物分别倒入两个白瓷盘内，摊开用肉眼或手持放大镜检查，最下层细小筛出物倒在黑底玻璃板上，用50倍60倍双筒体视显微镜观察。通过筛检确定是否带有菌座、线虫虫痪、毒麦及小麦全蚀病病株碎屑。如发现可疑物而肉眼不能确定的，应进一步作室内检验。B. 2三种腥黑粉病菌的实验室鉴定B. 2. 1洗涤检验B. 2. 1. 1仪器设备a)振荡器;b)低速大容量离心机;c)高倍生物显微镜B. 2适用范围本检验方法适用于检验粘附于小麦种子表面的三种腥黑粉病菌冬抱子的形态。B. 2. 1. 3检验程序B. 2. 1. 3. 1将每份小麦样品按四分法提取两份试验样品，每份50 无菌水100 加表面活性剂(温滴2滴，加塞后在振荡器上振荡5 后将悬浮液倾人50 1 000 r/上清液，再加适量无菌水悬浮沉淀物并合并悬浮物于一10 以1 000 r/上清液。加席尔氏液悬浮沉淀物，视沉淀物多少，定容至1 片镜检。每个样品全片检查5个玻片。1 000倍)检测成熟抱子各种尺度，目尺要精确核校。B. 2. 1. 3. 4在鉴定腥黑穗冬袍子时，每个样品必须测量25个一30个抱子，测量参数为网纹有无、网目大小、网脊高度、胶质鞘厚度B. 4结果判定无网纹的抱子应确定为光腥，凡是70%以上的泡子网脊高度集中在1. 5 2. 5 0 0 确定为矮腥，低于这个数值的应确定为网腥。三种腥黑穗病冬抱子特征见表B. 1三种小麦腥黑穗病菌冬抱子形态特征比较项目光腥网腥矮腥菌澳麦粒状麦粒状或近球状球形坚实网纹无有有网目大小/54121仪器设备落射式荧光显微镜。B. 2. 2. 2适用范围本方法主要针对发现菌座后的网腥和矮腥病菌的鉴别。B. 2. 2. 3检验程序B. 2. 2. 3. 1从菌瘦上刮取少许冬抱子粉至洁净的载玻片上，加适量蒸馏水制成抱子悬浮液，其浓度以显微镜每视野(400倍600倍)不多于40个抱子为宜，然后任其自然干燥。在载玻片干燥的抱子上加一滴无荧光浸泡油(516)，加覆盖玻片。B. 2. 2. 3. 2用落射式荧光显微镜检查冬抱子的自发荧光，50 发滤光片485 障滤光片520 视野照射2. 5 发抱子产生荧光，并在此时开始计数。全过程不得超过3 少于200个抱子。B. 2. 2. 3. 3通过观察冬抱子表面的网纹来判定冬抱子有无荧光。如网纹有不同程度的橙黄色至黄绿色的荧光，就认为该抱子有自发荧光。有些抱子网纹荧光亮而强，一经照射立即发生，有些抱子需经一定时间的照射后才缓慢地出现荧光，还有些抱子经近3 在网纹的边缘发出一定强度的荧光(称为“镶边”)。若网纹不可见或呈暗网状，则该抱子定为无荧光。B. 2. 2. 4结果判定自发荧光率在80%以上为矮腥冬抱子，30%以下为网腥冬抱子。B. 2. 3冬抱子萌发鉴定B. 2. 3. 1仪器设备a)高倍生物显微镜;b)光照培养箱。B. 2. 3. 2适用范围本方法可用于鉴别发现菌痪后矮腥和网腥病菌。B. 2. 3. 3检验程序将冬抱子团块置于灭菌凹玻片上，加灭菌水数滴，琼脂培养基平板上，密度以显微镜低倍视野不超过40个60个抱子为宜。然后分别在5'C ,弱光照(450 以及17弱光照或黑暗条件下恒温培养。第一次检查可在培养1。天后进行，以后每隔3天的甚至始干第5周以后。网腥冬抱子在150C 0天萌发，而在53. . 3. 1. 3. 1检查甸甸菌丝:病株种子根、次生根不同程度地变黑腐烂，地下茎亦变黑，根表、茎基部和叶鞘内侧均有黑褐色、粗壮近平行分布的甸甸菌丝将可疑病株带回实验室洗净泥土，直接以体视显微镜检查根部甸旬菌丝。若不清楚，可将变黑的细根剪成3 组织透明后412基部检查，需剥取叶鞘，用体视显微镜检查，挑取有菌丝的叶鞘，用小镊子撕下一小段内表皮，置于载玻片上，滴加一滴乳酚油，镜检，观察菌丝形态。常用透明剂有:a)毗咙液(用于快速透明);b)苯酚二甲苯液(苯酚1份与二甲苯4份混合而成);c)乳酚油(苯酚10 g、乳酸10 油20 馏水10 可疑病株带回实验室洗净泥土，仔细检查有无黑色颗粒状子囊壳，特别注意检查麦株基部叶鞘内侧。若发现可疑黑色颗粒状突起物，可用拨针挑取，用蒸馏水做浮载液制片镜检。若为子囊壳，用拨针轻压盖玻片，使子囊、子囊抱子溢出，观察子囊壳、子囊、子囊抱子形态，计测其尺度。B. 3. 1. 3. 3诱导子囊壳产生:若可疑病株未生有子囊壳或子囊壳未成熟，压碎后无子囊和抱子散放，可进一步诱生子囊壳，再行检查。用细沙土将病株茎基部(最好病根部已形成“黑膏药”)埋在花盆中，并经常浇水，保持湿润。也可置于培养皿内，用棉球浸水保湿。在16025和有散射光的条件下诱导，约20天后即可产生子囊壳。B. 3. 2病原菌室内分离和检查B. 3. 2. 1仪器设备a)高倍生物显微镜;b)高压灭菌锅;c)恒温培养箱。B. 3. 2. 2适用范围根据田间症状，自然发病植株上病原菌检查结果仍不能确诊时，需采取可疑植株，进行全蚀病菌分离和鉴定B. 3. 2. 3操作程序B. 3. 2. 3. 1全蚀病菌的分离B. 3. 2. 3. 1. 1分离用培养基以1/2 铃薯100 g,葡萄糖10 g，酵母膏1 g，琼脂171 000 果较好。也可以用普通铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂17 g，水1 000 玉米粉琼脂培养基(玉米粉100 g、琼脂20 g、水1 000 压灭菌后制成培养基平板备用。为防止细菌污染，可在培养基内加人含量为200个300个单位的链霉素。生根和茎基部叶鞘或茎秆作为分离材料，以剥去叶鞘的茎基部第一节茎秆和新鲜种子根的中柱组织分离效果最好。病株根部严重腐烂或腐生菌较多时，可将病根茬切成1 播种经表面消毒(用75%酒精消毒2 小麦种子，15天后麦苗种子根受侵变黑，用作分离材料很易成功。B. 3. 2. 3. 1. 3将待分离的材料用水洗净，剪成3 。1%硝酸银()溶液消毒30 s，再用无菌水冲洗3次一5次，移植于培养基平板上，置于200C 温箱中培养。直接用子囊抱子做分离材料。取有成熟子囊抱子的基部叶鞘一小块，用自来水充分冲洗后，在解剖镜下挑单个子囊壳，用0. 1%硝酸银溶液消毒15 s，经无菌水冲洗后压碎子囊壳，在无菌水中稀释子囊抱子，取子囊抱子悬液在培养基表面划线，再置于200C . 3. 2. 3. 1. 5病组织在1/2 天后由两端长出纤细无色的菌丝，5天一10天后形成菌丝束，培养6周8周后形成成熟的子囊壳。B. 3. 2. 3. 2诱导子菠壳产生B. 3. 2. 3. 2. 1用1/2 离物可在培养基平板上产壳，不需另行诱导。若采用其他培养基分离，不能产壳时，需行诱导。0 后10接于三角瓶培养液中。在250出放在20室内散射光下再培养4周7周，形成成熟子囊壳。分为马铃薯100 g,葡萄糖10 g,酵母膏2g，水1 000 . 0)成分为碎麦秆1 g,母膏水溶液15 . 3. 2. 3. 2. 3寄主诱导法:将灭菌沙装人小花盆中，再将平板培养的菌落置于沙层表面，其上放置表面消毒后催芽的麦种，再覆以灭菌沙。在18'C C、每天光照12 0天左右可在麦苗根和茎基部产生子囊壳。B. 3. 2. 3. . 3. 3全蚀病菌鉴定标准小麦全蚀病菌为禾顶囊壳小麦变种(依据菌丝、菌落、有性态和附着枝特征鉴定，其中有性态特征最重要。B. 3. 3. 1匆甸菌丝病株上甸甸菌丝黑褐色，有隔，粗壮，宽4 根丝分枝处主枝与侧枝各形成一横隔膜，两横隔构成“八”形。根部甸甸菌丝与根轴近平行分布。茎基部叶鞘内表皮上长满密集交织的黑色菌丝体和成串连生的菌丝结。B. 3. 3. 2菌落病组织在1/2 风轮状平贴向周围延伸，5天10天后形成浅灰色菌丝束，渐变为黑色扭曲状，类似婴儿头发，从接种点向外放射状分布。菌落颜色随菌龄增长由浅变深，最终呈深灰色或黑褐色。菌落边沿的菌丝有反卷现象，气生菌丝稀少。B. 3. 3. 3附粉枝禾顶囊壳小麦变种附着枝简单，生于分枝菌丝上，浅褐色或无色，间生时为不规则球状，端生的卵圆形至长筒形，具小孔(清晰的小亮点)，尺度(9察附着枝可在培养5天的菌落边缘，斜插灭菌盖玻片，使菌丝沿玻片生长，并形成附着枝，7天10天后取下玻片镜检。B. 3. 3. 4有性态子囊壳散生，壳体卵圆形至近球形，有颈，黑色至暗褐色。周围有褐色毛茸状菌丝，基部埋人基质中，颈圆筒状，微弯曲，穿透寄主表皮外露，尺度(150)200 400(500)长100 也较长，位置居中，很少弯曲。子囊无色，单壁，棍棒形，尺度(70)8010部钝圆，基部向柄变细顶部壁较厚，侧看有两个折光小亮点为其原生质环，吸水后易从下部胀裂。成熟的子囊抱子吸水后会溢出子囊壳孔口，干固后成团块，呈淡红色。单个子囊袍子无色线形，稍弯曲，中部较宽，两端渐细。尺度(60)7010)2. 5)成熟的子囊抱子有隔膜5个12(14)个，两周后隔膜消解，抱子成浑浊状，内含许多油球。B. 4小麦粒线虫的实验室检验B. 4. 1仪器设备a)体视显微镜;b)高倍生物显微镜。B，. 4. 3操作程序将虫痪切开，加水一滴，稍后，即有白色丝状物游出，此即线虫。在显微镜下观察线虫形态B. 4. 4结果判定雌雄成虫线形，均不很活跃，具