ELISA2-乙肝两对半.ppt

1、乙肝两对半的检测,临床免疫学教研室 邓念华,【目的要求】,1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。,【原理】,【器材】,BIORAD680型自动化酶免分析仪、BIORAD全自动酶标洗板机、微量加样器、吸头等,【试剂】,HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒 HBeAgELISA试剂盒 HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒,【标本】,待测血清,【操作步骤】,准备：试剂盒各组份在37平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20洗液稀释； 加样品：加入待测样品或阳性、阴性对照75ul/孔，轻轻振荡混匀； 孵育：贴上封膜，37 反应60min; 加酶

2、结合物： 每孔加入50ul/孔,表面抗原检测(夹心法),孵育：贴上封膜，37 反应30min; 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，混匀，贴上封膜，37反应30min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度),结果判断及解释： COV=2.1N 阴性对照A0.10，阳性对照A1.0，否 则实验无效。 SCOV 阳性 SCOV 阴性,准备：试剂盒各组份在37平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20洗液稀释； 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、

3、阴性 孵育：贴上封膜，37 反应30min; 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；,表面抗体检测(夹心法),显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度),结果判断及解释： COV=2.1N 阴性对照A0.10，阳性对照A1.0，否 则实验无效。 SCOV 阳性 SCOV 阴性,准备：试剂盒各组份在37平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20洗液稀释； 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性

4、、阴性 孵育：贴上封膜，37 反应30min; 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；,e抗原检测(夹心法),显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度),结果判断及解释： COV=2.1N 阴性对照A0.10，阳性对照A1.0，否 则实验无效。 SCOV 阳性 SCOV 阴性,e抗体检测(竞争抑制法),准备：试剂盒各组份在37平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20洗液稀释； 加样品及酶

5、标：各50ul，同时设阳性、阴性 孵育：贴上封膜，37 反应30min; 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；,显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度),结果判断： COV=0.5N 阴性对照A1.0 ，阳性对照A0.5 ，否则实验无效。 SCOV 阳性 SCOV 阴性,准备：试剂盒各组份在37平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20洗液稀释； 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、

6、阴性（样品作1：30稀释） 孵育：贴上封膜，37 反应30min; 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；,c抗体检测(竞争抑制法),显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度),结果判断： COV=0.5N 阴性对照A 1。0 ，阳性对照A 0.50 ，否则实验无效。 SCOV 阳性 SCOV 阴性,1.不同品种及批号试剂组份请勿混用； 2.试剂从2-8条件下取出，先在室温平衡1h； 3.最好用微量移液器加各种组份； 4.每次手工加样，应更换吸头； 5.加样时尽量避免反应微孔中产生气泡； 6.封板膜不能重复使用；,【注意事项】,7.洗液如有结晶形成建议放置37充分溶解，再稀释； 8.洗板：(洗板机) 1)