薄膜过滤法微生物限度检查操作要点_第1页
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文档简介

1、.薄膜过滤法微生物限度检查操作要点1. 设备、仪器1.1 无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。1.1.1 操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。1.1.2 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。1.1.3 在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化

2、装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。1.1.4 无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。1.2 仪器1.2.1 恒温培养箱（30350C）、生化培养箱（23280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。1.2.2 玻璃器皿 烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹

3、置蒸汽灭菌器高压蒸汽121灭菌30min，烘干。或于160干热灭菌2h，备用。2 培养基及其制备方法2.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121高压灭菌15分钟。2.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121高压灭菌15分钟。2.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121高压灭菌15分钟。3 稀释剂3.1 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121灭菌20分钟。3.2 PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二

4、氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。4 供试液的制备4.1 取供试品10g，加经干热灭菌的5%吐温-80 0.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，静止5分钟使分层，倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟，取上清液作为供试品溶液。5 检查方法采用薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，直径为50mm。滤膜及滤器在使用前采用121高压灭菌30钟。试验过程中，应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供试液过滤，然后用100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面）。冲洗后，用镊子

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